試料細菌のRNAを用いた細菌同定方法及びそのためのキット

    公开(公告)号:JPWO2019189266A1

    公开(公告)日:2021-01-14

    申请号:JP2019013021

    申请日:2019-03-26

    IPC分类号: C12N15/09 C12Q1/689

    摘要: 本発明の目的は、限定的な数種の細菌ではなく、多くの細菌を、同定用の試薬や条件を変えることなく同定可能な同定方法を提供すること。また、1回のPCRのみで高感度に検出・同定し、煩雑な操作および作業者の負担を軽減することを可能とする同定方法を提供することにある。 本発明においては、細菌の同定に、以下の工程を有する方法を用いる。(1)同定対象細菌の同定用の塩基配列を含むcDNAを調製するための逆転写用のプライマー、試料中の細菌から抽出されたRNA、及びRNA依存型DNAポリメラーゼ活性を有する酵素を含む第一の反応系を用いて、逆転写反応を行い、合成されたcDNA及び前記逆転写用のプライマーを含む反応混合物を得る工程、(2)前記反応混合物、前記同定対象細菌の同定用の塩基配列を含む二本鎖DNAを合成するためのプライマーペア、及びDNA依存型DNAポリメラーゼ活性を有する酵素を含む第二の反応系を用いて、PCRを行う工程、但し、第二の反応系において、前記反応混合物から供給される前記逆転写用のプライマーの濃度が0.08nM以上20nM以下である、及び(3)PCR後の前記第二の反応系から、前記同定対象細菌の同定用の塩基配列を含む二本鎖DNAの生成を検出する工程。