公开(公告)号：US5854039A

公开(公告)日：1998-12-29

申请号：US914066

申请日：1997-07-14

申请人： Christopher K. Raymond ,  Susan D. Holderman ,  Erica Vanaja

发明人： Christopher K. Raymond ,  Susan D. Holderman ,  Erica Vanaja

IPC分类号： C12N1/19 ,  C12N9/50 ,  C12N9/88 ,  C12N15/81 ,  C12N15/87 ,  C12N15/90 ,  C12N15/63

CPC分类号： C12N9/50 ,  C12N15/815 ,  C12N15/87 ,  C12N9/88

摘要： Methods for transforming Pichia methanolica, and DNA molecules useful in transformation of P. methanolica, are disclosed. P. methanolica cells are exposed, in the presence of DNA molecules, to a pulsed electric field having a field strength of from 2.5 to 4.5 kV/cm and a pulse duration of from 1 to 40 milliseconds, whereby the DNA molecules are introduced into the cells. The DNA molecules may comprise an expression unit that includes a transcription promoter of a P. methanolica gene operably linked to a segment encoding a polypeptide or protein of interest. The DNA molecules may also encode a selectable marker, such as a P. methanolica ADE2 gene. Cells transformed according to the invention may be used in production systems for the preparation of proteins of commercial importance.

摘要翻译： 公开了用于转化甲醇毕赤酵母和用于甲醇转化甲醇的DNA分子的方法。 在DNA分子存在下将甲醇状细胞暴露于场强为2.5〜4.5kV / cm，脉冲持续时间为1〜40毫秒的脉冲电场，由此将DNA分子引入 细胞。 DNA分子可以包含表达单元，其包括可操作地连接到编码感兴趣的多肽或蛋白质的区段的甲醇咖啡基因的转录启动子。 DNA分子还可以编码选择性标记，例如甲醇白葡萄酒ADE2基因。 根据本发明转化的细胞可用于制备具有商业重要性的蛋白质的生产系统中。

公开(公告)号：US06613547B1

公开(公告)日：2003-09-02

申请号：US09786606

申请日：2001-03-06

申请人： Christopher K. Raymond ,  Erica Vanaja ,  Brady G. Miller ,  James S. Sloan

发明人： Christopher K. Raymond ,  Erica Vanaja ,  Brady G. Miller ,  James S. Sloan

IPC分类号： C12P2102

CPC分类号： C12N9/0008 ,  C07K14/47 ,  C12N15/815

摘要： Transcription promoter and terminator sequences from the Pichia methanolica glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 1 gene (GAP1 gene) are disclosed. The sequences are useful within DNA constructs for the production of proteins of interest in cultured P. methanolica cells. Within the expression vectors, a GAP1 promoter and/or a GAP1 terminator is operably linked to a DNA segment encoding the protein of interest.

摘要翻译： 公开了来自甲醇毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶1基因（GAP1基因）的转录启动子和终止子序列。 该序列在DNA构建体中用于在培养的甲醇毕赤酵母细胞中产生感兴趣的蛋白质。 在表达载体内，GAP1启动子和/或GAP1终止子可操作地连接到编码目的蛋白质的DNA区段。

公开(公告)号：US6153424A

公开(公告)日：2000-11-28

申请号：US265628

申请日：1999-03-09

申请人： Christopher K. Raymond ,  Erica Vanaja

发明人： Christopher K. Raymond ,  Erica Vanaja

IPC分类号： C12N9/04 ,  C12N9/08 ,  C12N9/50 ,  C12N9/88 ,  C12N15/81 ,  C12N15/87 ,  C12N1/14

CPC分类号： C12N9/50 ,  C12N15/815 ,  C12N15/87 ,  C12N9/0006 ,  C12N9/0065 ,  C12N9/88

摘要： Protease-deficient strains of the methylotrophic yeast Pichia methanolica and materials and methods for generating such strains are disclosed. The strains have a functional deficiency in a vacuolar protease, such as proteinase A or proteinase B. The strains are useful as hosts for the expression of heterologous genes encoding proteins of commercial or other interest.

摘要翻译： 公开了甲基营养酵母毕赤酵母甲醇的蛋白酶缺陷菌株及其生产方法。 菌株在液泡蛋白酶例如蛋白酶A或蛋白酶B中具有功能缺陷。该菌株可用作表达编码商业或其他兴趣蛋白质的异源基因的宿主。

公开(公告)号：US6001597A

公开(公告)日：1999-12-14

申请号：US211631

申请日：1998-12-15

申请人： Christopher K. Raymond ,  Erica Vanaja

发明人： Christopher K. Raymond ,  Erica Vanaja

IPC分类号： C12N9/04 ,  C12N9/08 ,  C12N9/50 ,  C12N9/88 ,  C12N15/81 ,  C12N15/87 ,  C12P21/02

CPC分类号： C12N9/0065 ,  C12N15/815 ,  C12N15/87 ,  C12N9/0006 ,  C12N9/50 ,  C12N9/88

摘要： Pichia methanolica cells in which an alcohol oxidase gene has been disrupted are disclosed. The cells may also be deficient in vacuolar protease activity. The cells are useful as hosts in recombinant protein production methods.

摘要翻译： 公开了醇氧化酶基因已被破坏的甲醇毕赤酵母细胞。 细胞也可能缺乏液泡蛋白酶活性。 细胞在重组蛋白质生产方法中可用作宿主。