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    VERFAHREN ZUR SELEKTION VON BIOMOLEKÜLEN AUS VARIANTEN-BIBLIOTHEKEN VON BIOMOLEKÜLEN
    3.
    发明申请
    VERFAHREN ZUR SELEKTION VON BIOMOLEKÜLEN AUS VARIANTEN-BIBLIOTHEKEN VON BIOMOLEKÜLEN 审中-公开

    公开(公告)号：WO2005040376A3

    公开(公告)日：2005-05-06

    申请号：PCT/DE2004/002386

    申请日：2004-10-22

    申请人： UNIVERSITÄT LEIPZIG ,  GREINER-STÖFFELE, Thomas ,  STRUHALLA, Marc

    发明人： GREINER-STÖFFELE, Thomas ,  STRUHALLA, Marc

    IPC分类号： C12N15/10

    摘要： Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Selektion von Biomolekülen aus Varianten-Bibliotheken, insbesondere von biokatalytisch aktiven Biomolekülen, mit den Schritten: a) Herstellung einer Varianten-Bibliothek, b) Aufteilung der Varianten-Bibliothek in eine Anzahl von Kompartimenten, die mindestens um einen Faktor kleiner ist, als die Anzahl der in der Varianten-Bibliothek enthaltenen Varianten, c) Produktion und Test der in den einzelnen Kompartimenten enthaltenen Biomoleküle auf eine bestimmte Eigenschaft, z. B. eine biokatalytische Aktivität, d) Auswahl mindestens eines Kompartiments, in dem Biomoleküle enthalten sind, welche die gewünschten Eigenschaft erfüllen, e) Aufteilung der in dem ausgewählten Kompartiment enthaltenen Teilbibliothek in weitere Kompartimente und f) n-faches Wiederholen der Schritte c) bis e) bis in jedem Kompartiment nur noch maximal eine Variante der für das Biomolekül codierenden Gensequenz enthalten ist. Gegenüber etablierten Verfahren, die Mutagenese- und Selektionsschritte enthalten, wird im erfindungsgemässen Verfahren von einer grossen Bibliothek ausgegangen, die von vornherein die gewünschte Variante enthält.

    VERFAHREN ZUR ERZEUGUNG EINER VARIANTEN-BIBLIOTHEK VON DNA-SEQUENZEN
    6.
    发明申请
    VERFAHREN ZUR ERZEUGUNG EINER VARIANTEN-BIBLIOTHEK VON DNA-SEQUENZEN 审中-公开
    过程用于产生DNA序列的变体文库

    公开(公告)号：WO2009146892A1

    公开(公告)日：2009-12-10

    申请号：PCT/EP2009/003945

    申请日：2009-06-03

    申请人： C-LECTA GMBH ,  GREINER-STÖFFELE, Thomas ,  FELLER, Claudia ,  STRUHALLA, Marc

    发明人： GREINER-STÖFFELE, Thomas ,  FELLER, Claudia ,  STRUHALLA, Marc

    IPC分类号： C12N15/10 ,  C12Q1/68

    CPC分类号： C12N15/1093 ,  C12N15/102

    摘要： Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Erzeugung einer Varianten-Bibliothek von DNA- Sequenzen ausgehend von mindestens einer DNA-Ausgangssequenz umfassend die folgenden Schritte: a) Auswählen von mindestens zwei Mutationsstellen in der DNA-Ausgangssequenz; b) Unterteilen der DNA-Ausgangssequenz in mindestens zwei Sequenzabschnitte in einer Weise, so dass mindestens zwei dieser Sequenzabschnitte jeweils mindestens eine der Mutationsstellen umfassen; c) Amplifizieren der Sequenzabschnitte durch PCR mit Hilfe von insgesamt wenigstens fünf verschiedenen Oligonukleotiden, wobei (i) sich an jede der Mutationsstellen mindestens eines der Oligonukleotide anlagern kann; (ii) sich an mindestens eine Mutationsstelle wenigstens zwei der Oligonukleotide anlagern können; und (iii) in den durch PCR erhaltenen Amplifikations-Produkten durch die Oligonukleotide an den Mutationsstellen über Mismatch -Positionen Mutationen eingeführt werden, wobei an mindestens einer der Mutationsstellen mindestens zwei Mutationen eingeführt werden; und d) Verknüpfen der Amplifikations-Produkte zu DNA-Sequenzen.

    摘要翻译： 本发明涉及一种方法，用于从至少一个DNA序列输出包括以下步骤产生DNA序列的变体文库：a）选择在该DNA序列输出突变的至少两个位点; b）将所述DNA序列输出，使得至少两种这些序列区段的每个包括以这样的方式突变位点中的至少一个的至少两个序列段; c）中通过PCR扩增的序列段具有总共至少五个不同的寡核苷酸，其中（i的帮助下）可以附加到每个所述寡核苷酸中的至少一个的突变位点的; （二）能够附着到至少一个突变位点中的至少两个寡核苷酸; 和（iii）被引入到在突变位点不匹配通过定位突变，通过PCR扩增产物所获得由寡核苷酸的结果，至少两个突变的突变位点中的至少一个引入的; 以及d）连接的扩增产物的DNA序列。

    PROTEOLYTISCHE ABSPALTUNG VON PROTEIN-TAGS IN DER REKOMBINANTEN PROTEIN-HERSTELLUNG
    7.
    发明申请
    PROTEOLYTISCHE ABSPALTUNG VON PROTEIN-TAGS IN DER REKOMBINANTEN PROTEIN-HERSTELLUNG 审中-公开
    蛋白标签在重组蛋白生产水解去除

    公开(公告)号：WO2008083976A1

    公开(公告)日：2008-07-17

    申请号：PCT/EP2008/000174

    申请日：2008-01-11

    申请人： C-LECTA GMBH ,  GREINER-STOEFFELE, Thomas ,  KAPPELER, Stefan ,  STRUHALLA, Marc

    发明人： GREINER-STOEFFELE, Thomas ,  KAPPELER, Stefan ,  STRUHALLA, Marc

    IPC分类号： C07K14/47

    CPC分类号： C07K14/47 ,  C07K14/4741 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/01 ,  C07K2319/20 ,  C07K2319/35 ,  C07K2319/50

    摘要： Polypeptid P umfassend die drei Teilsequenzen A-B-Z, wobei: i) die Teilsequenzen A-B mindestens einen Tag T umfassen; ii) die Teilsequenz B eine Aminosäuresequenz umfasst, welche zu einer Chymosin-Erkennungssequenz eines κ-Kaseins wenigstens 50% Homologie aufweist, wobei: der N-Terminus der Teilsequenz B unmittelbar an den C-Terminus der Teilsequenz A gebunden ist, eine Chymosin-Spaltstelle zwischen Teilsequenz B und Teilsequenz Z liegt, und iii) die Teilsequenz Z die Aminosäurereste -U-X 1 -X 2 -X 3 -X 4 -X 5 -X 6 -X 7 -X 8 -X 9 -X 10 -... -X n-2 -X n-1 -X n umfasst, wobei: der N-Terminus der Teilsequenz Z unmittelbar an den C-Terminus der Teilsequenz B gebunden ist, U den Aminosäurerest Met, Me, VaI oder Leu darstellt, n eine ganze Zahl ≥ 13 ist, und - X 1 , X 2 , X 3 , X 4 , X 5 , X 6 , X 7 ,... X n jeweils unabhängig voneinander einen peptidisch gebundenen Aminosäurerest darstellen; mit der Maβgabe, dass -X 1 -X 2 -X 3 -X 4 -X 5 -X 6 -X 7 nicht -Ala-lle-Pro-Pro-Lys-Lys-Gly ist.

    摘要翻译： P多肽，其包含三个子序列A-B-Z其中：i）所述子序列A-B包含至少一种T日; ii）该部分序列B包括一个氨基酸序列，其是在凝乳酶识别序列-Kaseins至少50具有％的同源性，其中：所述部分序列B的N末端直接键合到所述部分序列A中，凝乳酶裂解位点的C-末端 子序列B和部分序列Z谎言，和iii）的部分序列Z的氨基酸残基-UX 1 X 2 X 3 X <子之间 > 4 X 5 X 6 X 7 X 8 X 9 X 10 -... -X N-2 X N-1 X ñ ，其中：所述部分序列Z的N末端直接键合于部分序列B的C-末端，U代表氨基酸基蛋氨酸中，Me，Val或亮氨酸，n是整数= 13，和 - X 1 ，X 2 ，X 3 ，X 4 ，X 5 ，X 6 ，X 7 ，... X 名词各自独立地表示肽结合的氨基酸残基; 条件是X 1 X 2 X 3 X 4 X 5 X 6 X 7 丙氨酸 - 异亮氨酸 - 脯氨酸 - 脯氨酸 - 赖氨酸 - 赖氨酸 - 甘氨酸是不。

    METHOD FROM THE SELECTION OF BIOMOLECULES FROM BIOMOLECULE VARIANT LIBRARIES
    8.
    发明申请
    METHOD FROM THE SELECTION OF BIOMOLECULES FROM BIOMOLECULE VARIANT LIBRARIES 审中-公开
    程序用于从生物分子变体文库的生物分子

    公开(公告)号：WO2005040376A2

    公开(公告)日：2005-05-06

    申请号：PCT/DE2004002386

    申请日：2004-10-22

    申请人： UNIV LEIPZIG ,  GREINER-STOEFFELE THOMAS ,  STRUHALLA MARC

    发明人： GREINER-STOEFFELE THOMAS ,  STRUHALLA MARC

    IPC分类号： C12N15/10

    CPC分类号： C12N15/1075

    摘要： The invention relates to a method from the selection of biomolecules from variant libraries, in particular of bio-catalytically active biomolecules, comprising the steps: a) production of a variant library, b) division of the variant library into a number of compartments, each of which is smaller than the total number of variants in the variant library by a factor of at least 10, c) production and testing of the biomolecules in the individual compartments for a particular property, for example, a bio-catalytic activity, d) selection of at least one compartment in which there are biomolecules fulfilling the desired properties, e) division of the partial library contained in the selected compartment into further compartments and f) n-fold repetition of the steps c) to e) until each compartment has only one variant of the gene sequence coding for the biomolecule. In contrast to established methods which comprise mutagenesis and selection steps, said method starts with a large library in which the desired variants are contained from the outset.

    摘要翻译： 本发明涉及一种用于从变体文库，特别是生物催化活性的生物分子的生物分子的选择的方法，包括以下步骤：a）制备一个变体文库，b）将所述变体文库分成若干隔室，至少一个因数 比包括在变体文库的变体的数量少，c）中生产和测试包含在各个隔室到特定属性的生物分子，例如。 B.生物催化活性，d）选择至少一个隔室，包含在包含在所选隔室到另一个隔室中的局部库的满足所期望的性质，E）分裂的生物分子和f）n倍，步骤c的重复）给 E）含有至多在每个隔间中最大限度仅编码所述生物分子的基因序列的一种变体。 相比，包括诱变和选择步骤，从在本发明中，包含从一开始就所需选项的过程的大文库开始建立的程序。