本发明涉及一种中国被毛孢原生质体制备与再生方法，所述方法是通过以氯化钾溶液为渗透压稳定剂，以商品酶Driselase from Basidiomycetes sp，Lysing Enzyme from Trichoderma harizianum和Yatalase作为复合酶进行酶解，能够制备得到含量高的中国被毛孢原生质体并成功再生，同时通过优化再生培养基实现原生质体再生时间的缩短，且操作简单，便于推广实施，具有较好应用前景。