高产他克莫司低产子囊霉素的筑波链霉菌ZJXM0001及其应用

    公开(公告)号:CN115386511A

    公开(公告)日:2022-11-25

    申请号:CN202210913412.9

    申请日:2022-07-25

    IPC分类号: C12N1/20 C12P17/18 C12R1/465

    摘要: 本发明公开了一种高产他克莫司低产子囊霉素的筑波链霉菌ZJXM0001及其应用,将筑波链霉菌ZJXM0001接种至发酵培养基,在26‑30℃、180‑240rpm下培养144‑192h,获得含他克莫司的发酵液,发酵液分离纯化,获得他克莫司;本发明通过UV、ARTP诱变和抗性筛选的方法得到一株高产他克莫司且副产物子囊霉素明显降低的筑波链霉菌ZJXM0001菌株;在温度28℃,转速200rpm,培养时间180h下相对原始筑波链霉菌菌株S1,筑波链霉菌ZJXM0001菌株的他克莫司产量提高了236%,低产副产物子囊霉素,在温度26℃,其他条件不变的情况下,较原始菌株提升166%,无子囊霉素产生,本发明方法对于后续的纯化、提取及工业化有着重要的意义。

    一种基于荧光探针Rho-IDA-CoII的信号肽文库的高通量筛选方法

    公开(公告)号:CN114231553A

    公开(公告)日:2022-03-25

    申请号:CN202111602169.0

    申请日:2021-12-24

    摘要: 本发明公开了一种基于荧光探针Rho‑IDA‑CoII的信号肽文库的高通量筛选方法。与传统的筛选方法相比,使用荧光探针标记定量法能准确测定50~500 ng范围内的组氨酸标签融合蛋白,不会受到复杂样品及环境污染导致的高背景荧光,应用范围广。通过荧光高通量筛选法,从枯草芽孢杆菌表达腈水合酶信号肽文库中,筛选得到能分泌表达活性腈水合酶的枯草芽孢杆菌重组子,其培养上清液中检测到腈水合酶活性为12.97±0.77 U/mL。本发明的可分泌表达腈水合酶的重组子可应用于工业生产腈水合酶及其下游应用。

    L-阿拉伯糖异构酶、突变体及其应用

    公开(公告)号:CN111057698B

    公开(公告)日:2021-10-15

    申请号:CN201911384083.8

    申请日:2019-12-28

    IPC分类号: C12N9/90 C12P19/24 C12P19/02

    摘要: 本发明涉及一种新型L‑阿拉伯糖异构酶(LAI)及其突变体,及其在连续催化D‑半乳糖异构化制备D塔格糖(D‑tagatose)的应用。所述异构酶突变体,由SEQ ID NO.1所示所示氨基酸经定点突变而得,所述点突变位点为下列中的一个或多个:(1)第107位、(2)第199位、(3)第59位。本发明有益效果主要体现在:本发明提供了一种全新的LAI及其突变体,85℃,700g/L D‑半乳糖反应体系下,产物得率最高达89.2%。将重组酶进行固定化并连续催化200批次,转化率均仍大于89%。本发明解决了现有酶催化制备D‑tagatose效率低下的难题,获得的优于文献报道的连续转化效果对提升D‑tagatose工业化水平具有重要意义。

    L-阿拉伯糖差向异构酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN110904087B

    公开(公告)日:2021-05-11

    申请号:CN201911383972.2

    申请日:2019-12-28

    摘要: 本发明涉及一种L‑阿拉伯糖差向异构酶突变体,及其在微生物催化D‑半乳糖异构化制备D‑塔格糖中的应用。所述L‑阿拉伯糖差向异构酶突变体,由所示氨基酸经定点突变而得,所述点突变位点为下列中的一个或多个:(1)第97位、(2)第189位、(3)第301位、(4)第409位和(5)第462位。本发明有益效果主要体现在:本发明提供了一种全新的差向异构酶及其突变体,以及其在制备塔格糖(D‑tagatose)中的应用。该突变体具有高最适反应温度80℃,解决了现有酶无法在高温生产D‑tagatose的技术难题。使用本突变体生产D‑tagatose,底物浓度为600g/L时,产物得率最高可达79.7%,优于原始酶和其他突变酶的转化效果,具有较好工业应用前景。

    一种中国被毛孢原生质体的制备及再生方法

    公开(公告)号:CN111334436A

    公开(公告)日:2020-06-26

    申请号:CN202010126500.5

    申请日:2020-02-28

    IPC分类号: C12N1/14 C12N1/00 C12R1/645

    摘要: 本发明涉及一种中国被毛孢原生质体制备与再生方法,所述方法是通过以氯化钾溶液为渗透压稳定剂,以商品酶Driselase from Basidiomycetes sp,Lysing Enzyme from Trichoderma harizianum和Yatalase作为复合酶进行酶解,能够制备得到含量高的中国被毛孢原生质体并成功再生,同时通过优化再生培养基实现原生质体再生时间的缩短,且操作简单,便于推广实施,具有较好应用前景。

    一种L-阿拉伯糖异构酶异构体及其应用

    公开(公告)号:CN110951717A

    公开(公告)日:2020-04-03

    申请号:CN201911384932.X

    申请日:2019-12-28

    IPC分类号: C12N9/90 C12N15/61 C12P19/02

    摘要: 本发明涉及一种L-阿拉伯糖差向异构酶突变体,及其在微生物催化D-半乳糖异构化制备D-塔格糖中的应用。所述L-阿拉伯糖差向异构酶突变体,由所示氨基酸经定点突变而得,所述点突变位点为下列中的一个或多个:(1)第304位、(2)第75位、(3)第274位、(4)第167位。本发明有益效果主要体现在:本发明提供了一种全新的L-阿拉伯糖差向异构酶及其突变体,该突变体具有高最适反应温度75℃,其酶活与原始酶相比提高280%。使用本突变体生产D-tagatose,产物得率最高可达73.3%。将重组酶进行固定化并连续催化30批次,转化率均大于73%。该突变体的转化水平展示了优良的工业应用前景。