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公开(公告)号：CN115786295B
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202310035122.3
申请日：2023-01-10
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其在微生物催化制备酮基泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码基因如SEQ ID NO.2所示。本发明挖掘的源自Pseudonocardia sp.73‑21的L‑泛解酸内酯脱氢酶具有严格的L‑立体选择性，本发明构建的重组大肠杆菌表达L‑泛解酸内酯脱氢酶具有良好的溶解性，避免了L‑泛解酸内酯脱氢酶异源表达容易形成大量包涵体的问题。本发明提供的L‑泛解酸内酯脱氢酶在生物催化制备酮基泛解酸内酯/D‑泛解酸内酯中具有应用价值。
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公开(公告)号：CN119162268B
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202411554316.5
申请日：2024-11-04
Applicant: 浙江工业大学 , 华东合成生物学产业技术研究院
Abstract: 本发明提供了一种利用全细胞转化生物质水解液合成D‑阿洛酮糖的方法，利用重组大肠杆菌经诱导培养后的培养液获得的湿菌体为生物催化剂，在金属离子的存在下，直接以生物质水解液为底物，无处理直接进行催化反应制得D‑阿洛酮糖；所述重组大肠杆菌为同时表达葡萄糖异构酶和D‑阿洛酮糖‑3差向异构酶的重组大肠杆菌。本发明方法可以实现生物质水解液一步转化为高浓度D‑阿洛酮糖溶液，采用全细胞作为催化剂，不需要对酶进行纯化，减少了工艺步骤，降低了水解液中的杂质对酶的抑制作用，使得生产成本可明显下降，有利于工业化生产，D‑阿洛酮糖的转化率可达15%以上。
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公开(公告)号：CN119570758A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411799940.1
申请日：2024-12-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司 , 浙江永太手心医药科技有限公司
Abstract: 本发明涉及酶工程技术领域，公开了一种氨基转移酶突变体及其应用。本发明提供了一种野生型来源于燕麦曲霉(Aspergillus avenaceus)的氨基转移酶突变体。所述氨基转移酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第20位、第60位、第92位、第186位进行单位点或多点联合突变获得，作为生物催化剂可以直接以西他列汀中间体前体酮为底物、以异丙胺为氨基供体、以磷酸吡多醛为辅酶、以二甲基亚砜为底物助溶剂，催化制备高光学纯度的西他列汀中间体，在DMSO体积终浓度为50％反应体系下比酶活达到139.3U/g，极大地提高催化效率且产物具有高立体选择性(产物e.e.值达到99％)，具有广泛的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN119530027A
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202411679681.9
申请日：2024-11-22
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及代谢工程技术领域，公开了一种副产物消除的赤霉素高产菌、其构建方法与应用。藤仓赤霉菌中，比卡菌素基因簇和镰刀菌素基因簇较大，比卡菌素基因簇大小约为17 kb，镰刀菌素基因簇大小约为16.8 kb，因此，同时敲除比卡菌素和镰刀菌素基因簇难度较大。本发明通过CRISPR‑Cas9基因编辑技术，实现了比卡菌素和镰刀菌素基因簇的同时敲除，由此消除发酵副产物比卡菌素和镰刀菌素的影响，并增加赤霉素合成，得到高产赤霉素的基因工程菌株。
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公开(公告)号：CN119331797A
公开(公告)日：2025-01-21
申请号：CN202411412651.1
申请日：2024-10-11
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种提高新金分枝杆菌细胞通透性的方法、新金分枝杆菌工程菌及其在制备9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮(9‑OHAD)中的应用。在分枝杆菌中生物转化植物甾醇为9‑OHAD等高价值类固醇中间体是类固醇药物的基石。然而，分枝杆菌其致密细胞壁的有限渗透性严重阻碍了植物甾醇的有效胞内转运及其向9‑OHAD的生物转化。本发明通过基因敲除，破坏了新金分枝杆菌海藻糖内源性合成能力和外源性循环能力，不仅提高了细胞的通透性，将9‑OHAD的摩尔转化率由44.7％提升至65.7％，还提升了9‑OHAD的胞外产生，使得9‑OHAD的细胞外产量从12％增加到32.1％，便于后续的分离纯化。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119320737A
公开(公告)日：2025-01-17
申请号：CN202411436746.7
申请日：2024-10-15
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种生产L‑精氨酸的基因工程菌及其构建方法和应用。以大肠杆菌为出发菌株，进行以下处理：过表达谷氨酸脱氢酶的基因gdhA和gdh，促进谷氨酸的生成，过表达编码精氨酸转运蛋白基因argO增强精氨酸向胞外转运，引入外源argJ替换大肠中的线性合成途径，提高乙酰辅酶A利用率，加快精氨酸合成效率；过表达谷氨酰胺合成酶基因glnA，加强谷氨酰胺合成；过表达pckA促进ATP合成；同时对编码精氨酸脱羧酶的speA和adiA基因进行删除，抑制L‑精氨酸进一步合成腐胺，提高菌株积累L‑精氨酸的能力。通过上述处理的共同作用，最终得到一株生成L‑精氨酸的产量极高的基因工程菌，摇瓶发酵产量可达到13.7g/L。
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公开(公告)号：CN119286748A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411415071.8
申请日：2024-10-11
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种基于平衡糖利用高产D‑泛酸的工程菌、其构建方法与应用。首先，本发明通过弱化糖酵解EMP途径的pfkB、eno与pgi基因，同时过表达zwf与pgl基因，将部分碳流量通过推拉的方式流入PPP途径；其次，敲除了6‑磷酸果糖激酶II PfkB、修改烯醇化酶基因eno的起始密码子以及减弱葡萄糖磷酸异构酶Pgi的酶活；随后，为了让碳流量进一步流向PPP与ED途径，过表达PPP与ED共有基因zwf和pgl，并引入源于运动发酵单胞菌的edd与eda基因，打通了大肠杆菌中的ED途径；再有，将多余的PPP途径的碳流量分配给TCA循环，在基因组中整合来源于青春双歧杆菌的fxpk基因以及克鲁伊维梭菌的pta基因；最后，通过上述共同作用，使D‑泛酸效价达到了4.80 g/L。
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公开(公告)号：CN119286746A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411412649.4
申请日：2024-10-11
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种高产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明通过阻断新金分枝杆菌中Opccr、SalA、TeB表达和过表达KshA1来消除副产物4‑HBC、4‑AD和9‑OH‑3‑OPCM的产生，还通过过表达限速酶ChsH1‑2以解放9‑OHAD的生产限制，最终在植物甾醇浓度为20g/L的情况下实现了9‑OHAD的产量为13.4g/L，摩尔产量为91.1％且几乎无副产物的目标。在5L生物反应器中以45g/L植物甾醇浓度进行放大时，使用大豆油和(2‑羟丙基)‑β‑环糊精作为助剂，基本复现了摇瓶中20g/L时的9‑OHAD转化结果。
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公开(公告)号：CN119286745A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411405705.1
申请日：2024-10-10
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N9/88 , C12N9/02 , C12N9/10 , C12N9/00 , C12N9/04 , C12P13/04 , C12R1/15
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高效生产D‑泛酸的谷氨酸棒杆菌生产菌、构建方法及应用。所述构建方法具体包括如下步骤：（1）以野生型谷氨酸棒杆菌ATCC 13032为底盘，弱化ilvA，突变表达构建DPA1；（2）敲除丙酮酸醌氧化还原酶并在其插入一个panBCE基因表达框，构建DPA2；（3）在DPA2中导入使用pEC‑xk99E过表达质粒筛选表达Escherichia coli W3110、Bacillus subtilis 168、以及内源性的乙酰羟酸合酶、乙酰乳酸异构还原异构酶和2‑羟酸脱水酶；（4）对筛选出的ilvBNCD基因在强启动子控制下，由pEC‑xk99E进行串联过表达，构建DPA3，加强泛酸主合成途径以及上游途径拉动力，即得所述高效生产D‑泛酸的谷氨酸棒杆菌。本发明提供的菌株能够利用碳源高产量和高转化率的生产D‑泛酸，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN119220529A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411381896.2
申请日：2024-09-30
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐高温的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体及在制备D‑阿洛酮糖中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第17位、118位、121位、165位、197位、249位进行单突变或多突变获得的。本发明筛选得到的突变体能够耐受45～70℃高温，提高了突变酶的Tm值，延长了酶的半衰期，提高了酶对底物D‑阿洛酮糖的亲和力和转化效率，扩展了相对稀少的酶库，进而降低生产成本，进一步提高了D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的工业应用价值。
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