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公开(公告)号：CN110387366B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN201910712032.7
申请日：2019-08-02
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法及其应用。本发明通过在在毕赤酵母中进行表达，通过基因串联的方法使AEP环化酶基因串联拷贝数最高达到了5拷贝，当基因拷贝数达到3时AEP环化酶表达量最高，达到0.89±0.03mg/mL。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS‑PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。
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公开(公告)号：CN110331157A
公开(公告)日：2019-10-15
申请号：CN201910712666.2
申请日：2019-08-02
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在大肠杆菌中的融合表达方法、AEP环化酶环化能力鉴定方法及其应用。本发明通过在大肠杆菌中利用不同的融合标签进行融合表达，之后通过移除融合标签得到表达量较高的AEP环化酶，其表达量为0.36±0.05mg/mL，高于原先文献报道的1.8mg/L。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS-PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110331157B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN201910712666.2
申请日：2019-08-02
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在大肠杆菌中的融合表达方法、AEP环化酶环化能力鉴定方法及其应用。本发明通过在大肠杆菌中利用不同的融合标签进行融合表达，之后通过移除融合标签得到表达量较高的AEP环化酶，其表达量为0.36±0.05mg/mL，高于原先文献报道的1.8mg/L。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS‑PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。
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公开(公告)号：CN110387366A
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201910712032.7
申请日：2019-08-02
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法及其应用。本发明通过在在毕赤酵母中进行表达，通过基因串联的方法使AEP环化酶基因串联拷贝数最高达到了5拷贝，当基因拷贝数达到3时AEP环化酶表达量最高，达到0.89±0.03mg/mL。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS-PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。
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公开(公告)号：CN107602706A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710956966.6
申请日：2017-10-16
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明利用酵母内质网滞留筛选系统(YESS)快速解析蛋白酶底物切割位点特异性，最终提供了一种切割效率增强的HRV 3C蛋白酶底物序列突变体及其应用。该底物变体包含序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其在蛋白纯化过程中移除纯化标签中具有较好的实际应用优势，从而有利于HRV 3C蛋白酶的进一步应用和研究。
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公开(公告)号：CN107602706B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201710956966.6
申请日：2017-10-16
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明利用酵母内质网滞留筛选系统(YESS)快速解析蛋白酶底物切割位点特异性，最终提供了一种切割效率增强的HRV 3C蛋白酶底物序列突变体及其应用。该底物变体包含序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其在蛋白纯化过程中移除纯化标签中具有较好的实际应用优势，从而有利于HRV 3C蛋白酶的进一步应用和研究。
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公开(公告)号：CN116555235A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310613615.0
申请日：2023-05-29
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一组针对底物P1’位点特异性改变的HRV3C蛋白酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明利用饱和突变和随机突变技术针对野生型HRV3C蛋白酶进行分子改造，使其从识别原有多肽序列LEVLFQ↓G变为识别多肽序列LEVLFQ↓M，得到了一系列HRV3C蛋白酶突变体。与wtHRV3C‑P相比，本发明提供的突变体针对底物LEVLFQ↓M有更好的特异性和切割活性，可以达到无痕切除蛋白融合标签的效果，从而拓宽了HRV3C蛋白酶的实际应用范围。
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