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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105349569B
公开(公告)日：2020-05-12
申请号：CN201510802312.9
申请日：2015-11-19
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一组不同启动子介导的蛋白酶高通量筛选载体及筛选方法。本发明通过在pESD载体上插入不同转录强度的启动子GALX，构建了GALX–pESD‑GAL1/GAL10‑Aga2‑FLAG‑HA重组质粒，在相应的启动子后插入底物序列与酶突变体库，利用荧光标记技术和流式细胞仪检测细胞表面展示的蛋白，根据细胞表面荧光的强弱，从而分析底物与酶的不同比例下底物的酶切情况。这种方法在蛋白酶进化过程中，可以控制酶与底物的浓度在1:2到1:100之间，利用启动子转录的强弱来逐步提高酶活，最终获得高活性的蛋白酶突变体。
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公开(公告)号：CN107602706A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710956966.6
申请日：2017-10-16
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明利用酵母内质网滞留筛选系统(YESS)快速解析蛋白酶底物切割位点特异性，最终提供了一种切割效率增强的HRV 3C蛋白酶底物序列突变体及其应用。该底物变体包含序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其在蛋白纯化过程中移除纯化标签中具有较好的实际应用优势，从而有利于HRV 3C蛋白酶的进一步应用和研究。
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公开(公告)号：CN116555235A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310613615.0
申请日：2023-05-29
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一组针对底物P1’位点特异性改变的HRV3C蛋白酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明利用饱和突变和随机突变技术针对野生型HRV3C蛋白酶进行分子改造，使其从识别原有多肽序列LEVLFQ↓G变为识别多肽序列LEVLFQ↓M，得到了一系列HRV3C蛋白酶突变体。与wtHRV3C‑P相比，本发明提供的突变体针对底物LEVLFQ↓M有更好的特异性和切割活性，可以达到无痕切除蛋白融合标签的效果，从而拓宽了HRV3C蛋白酶的实际应用范围。
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公开(公告)号：CN105349569A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510802312.9
申请日：2015-11-19
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一组不同启动子介导的蛋白酶高通量筛选载体及筛选方法。本发明通过在pESD载体上插入不同转录强度的启动子GALX，构建了GALX–pESD-GAL1/GAL10-Aga2-FLAG-HA重组质粒，在相应的启动子后插入底物序列与酶突变体库，利用荧光标记技术和流式细胞仪检测细胞表面展示的蛋白，根据细胞表面荧光的强弱，从而分析底物与酶的不同比例下底物的酶切情况。这种方法在蛋白酶进化过程中，可以控制酶与底物的浓度在1:2到1:100之间，利用启动子转录的强弱来逐步提高酶活，最终获得高活性的蛋白酶突变体。
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公开(公告)号：CN107602706B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201710956966.6
申请日：2017-10-16
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明利用酵母内质网滞留筛选系统(YESS)快速解析蛋白酶底物切割位点特异性，最终提供了一种切割效率增强的HRV 3C蛋白酶底物序列突变体及其应用。该底物变体包含序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其在蛋白纯化过程中移除纯化标签中具有较好的实际应用优势，从而有利于HRV 3C蛋白酶的进一步应用和研究。
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