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公开(公告)号:CN118667840A
公开(公告)日:2024-09-20
申请号:CN202410638285.5
申请日:2024-05-22
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种萘高效降解基因、重组质粒、菌株及应用,涉及合成生物学技术领域。所述的萘高效降解基因包括P114‑nahABCDEF或P118‑nahABCDEF;所述P114‑nahABCDEF的序列如SEQ ID NO:1所示,所述P118‑nahABCDEF的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明提供的萘高效降解菌株,尤其是E.coli GM272/pMD18T‑P114‑nahABCDEF,对100μM萘在3h内能实现100%降解,与野生型相比较,降解效率显著提高。
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公开(公告)号:CN116555235A
公开(公告)日:2023-08-08
申请号:CN202310613615.0
申请日:2023-05-29
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一组针对底物P1’位点特异性改变的HRV3C蛋白酶突变体,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明利用饱和突变和随机突变技术针对野生型HRV3C蛋白酶进行分子改造,使其从识别原有多肽序列LEVLFQ↓G变为识别多肽序列LEVLFQ↓M,得到了一系列HRV3C蛋白酶突变体。与wtHRV3C‑P相比,本发明提供的突变体针对底物LEVLFQ↓M有更好的特异性和切割活性,可以达到无痕切除蛋白融合标签的效果,从而拓宽了HRV3C蛋白酶的实际应用范围。
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公开(公告)号:CN110819608B
公开(公告)日:2022-03-15
申请号:CN201911038267.9
申请日:2019-10-29
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米赤霉烯酮及其衍生物的水解方法,以玉米赤霉烯酮或其衍生物为底物,利用玉米赤霉烯酮降解酶对所述底物进行水解,所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示,本发明所述的玉米赤霉烯酮降解酶具有酶活高、温度与pH耐受性良好等优点,可以广泛应用于玉米赤霉烯酮及其几种衍生物的酶解,底物范围广,其中对玉米赤霉烯酮、α‑玉米赤霉醇和β‑玉米赤霉醇具有较高活性,SEQ ID NO:2在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列上将第158位T突变为H,突变后其对于底物α‑玉米赤霉烯醇的酶活提高40%。
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公开(公告)号:CN110358781B
公开(公告)日:2022-01-28
申请号:CN201910701617.9
申请日:2019-07-31
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种酸性哺乳动物几丁质酶编码基因和应用,该基因具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。本发明利用体外构建无抗生素筛选标记的多拷贝的方法,实现了酸性哺乳动物几丁质酶的高量表达,同时利用辅助因子Hac1的共表达,实现了酸性哺乳动物几丁质酶表达量的进一步提高。
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公开(公告)号:CN108048480B
公开(公告)日:2021-04-23
申请号:CN201711193064.8
申请日:2017-11-24
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种基于酿酒酵母的split‑TEV‑Fast系统方法及其在检测蛋白互作中的应用,包括:1)构建载体pESD‑PPI,其含受半乳糖诱导的一个正向启动子和一个双向启动子,所述正向启动子用以表达TEV‑Fast蛋白酶底物与FLAG和HA标签序列,所述双向启动子用以表达拆分的TEV‑Fast蛋白酶和待测目的蛋白;2)用半乳糖同时诱导启动子,引发下游基因等量表达;3)利用分别识别FLAG和HA标签序列的荧光抗体对细胞进行标记;4)利用流式细胞仪检测细胞表面荧光信号,根据单双荧光信号判断蛋白之间相互作用的强度。本发明在TEV‑Fast蛋白酶及其底物‑COOH端使用不同强度的内质网滞留信号肽,可扩大检测蛋白互作的范围,并根据最终检测的单双荧光信号强度的比例分析蛋白互作的强弱。
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公开(公告)号:CN107602707B
公开(公告)日:2021-04-23
申请号:CN201710965231.X
申请日:2017-10-17
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种特异性调节枯草芽孢杆菌外源基因表达的dcas9‑ω融合蛋白及其应用。dcas9‑ω融合蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示,该融合蛋白可被引导至特定靶向位点并与其结合,RNA聚合酶ω亚基在此位点招募RNA聚合酶其他亚基组装成RNA聚合酶,促进下游基因转录,从而提高靶基因的表达量,即融合蛋白dcas9‑ω保留dcas9的DNA结合能力与RNA聚合酶亚基的转录激活能力,从而特异性提高靶基因表达。
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公开(公告)号:CN107164353B
公开(公告)日:2020-03-31
申请号:CN201710497480.0
申请日:2017-06-27
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明提供了一种低温碱性果胶裂解酶及其编码基因和应用,该裂解酶具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列;或该裂解酶具有在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列基础上缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的衍生序列并且具有低温碱性果胶裂解酶活性。本发明所述的低温果胶裂解酶具有反应温度低、pH耐受性好等优点,最适天然底物为来源于橙皮的果胶,同时可以广泛应用于果胶的酶解。
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公开(公告)号:CN110819608A
公开(公告)日:2020-02-21
申请号:CN201911038267.9
申请日:2019-10-29
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米赤霉烯酮及其衍生物的水解方法,以玉米赤霉烯酮或其衍生物为底物,利用玉米赤霉烯酮降解酶对所述底物进行水解,所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示,本发明所述的玉米赤霉烯酮降解酶具有酶活高、温度与pH耐受性良好等优点,可以广泛应用于玉米赤霉烯酮及其几种衍生物的酶解,底物范围广,其中对玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇具有较高活性,SEQ ID NO:2在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列上将第158位T突变为H,突变后其对于底物α-玉米赤霉烯醇的酶活提高40%。
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公开(公告)号:CN107164350B
公开(公告)日:2019-12-24
申请号:CN201710492190.7
申请日:2017-06-26
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种吡嗪酰胺水解酶及其编码基因和应用,该水解酶具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列,编码基因为具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的DNA分子。本发明所述的吡嗪酰胺酶具有高酶活、pH耐受性好等优点,并为吡嗪酰胺与吡嗪酰胺酶联用治疗体内产生吡嗪酰胺耐药性的病人提供了治疗方向。
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公开(公告)号:CN110218737A
公开(公告)日:2019-09-10
申请号:CN201910523234.7
申请日:2019-06-17
Applicant: 湖北大学
Abstract: 本发明公开了一种利用酵母内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体,属于抗体工程技术领域。本发明利用GAL1-GAL10双向启动子载体同时表达Adalimumab或Infliximab的VH-CH1和VL-CL两个结构域,通过氨基端内质网定位信号肽定位在内质网内组装成天然Fab形式片段,再利用Aga1-Aga2酵母细胞展示系统展示到细胞表面。同时,通过将酿酒酵母内质网滞留信号肽融合到Fab片段VL-CL结构域的羧基端,明显提高了酵母细胞表面展示的Fab片段结合抗原的能力,促进了功能性Fab片段的展示,从而更适用于Fab片段的酵母细胞表面展示,为抗体工程中Fab的改造方法提供了一种优化策略。
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