一种玉米赤霉烯酮及其衍生物的水解方法

    公开(公告)号:CN110819608B

    公开(公告)日:2022-03-15

    申请号:CN201911038267.9

    申请日:2019-10-29

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明涉及一种玉米赤霉烯酮及其衍生物的水解方法,以玉米赤霉烯酮或其衍生物为底物,利用玉米赤霉烯酮降解酶对所述底物进行水解,所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示,本发明所述的玉米赤霉烯酮降解酶具有酶活高、温度与pH耐受性良好等优点,可以广泛应用于玉米赤霉烯酮及其几种衍生物的酶解,底物范围广,其中对玉米赤霉烯酮、α‑玉米赤霉醇和β‑玉米赤霉醇具有较高活性,SEQ ID NO:2在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列上将第158位T突变为H,突变后其对于底物α‑玉米赤霉烯醇的酶活提高40%。

    一种split-TEV-Fast系统的构建方法及其在检测蛋白相互作用中的应用

    公开(公告)号:CN108048480B

    公开(公告)日:2021-04-23

    申请号:CN201711193064.8

    申请日:2017-11-24

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于酿酒酵母的split‑TEV‑Fast系统方法及其在检测蛋白互作中的应用,包括:1)构建载体pESD‑PPI,其含受半乳糖诱导的一个正向启动子和一个双向启动子,所述正向启动子用以表达TEV‑Fast蛋白酶底物与FLAG和HA标签序列,所述双向启动子用以表达拆分的TEV‑Fast蛋白酶和待测目的蛋白;2)用半乳糖同时诱导启动子,引发下游基因等量表达;3)利用分别识别FLAG和HA标签序列的荧光抗体对细胞进行标记;4)利用流式细胞仪检测细胞表面荧光信号,根据单双荧光信号判断蛋白之间相互作用的强度。本发明在TEV‑Fast蛋白酶及其底物‑COOH端使用不同强度的内质网滞留信号肽,可扩大检测蛋白互作的范围,并根据最终检测的单双荧光信号强度的比例分析蛋白互作的强弱。

    一种低温碱性果胶裂解酶及其编码基因和应用

    公开(公告)号:CN107164353B

    公开(公告)日:2020-03-31

    申请号:CN201710497480.0

    申请日:2017-06-27

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明提供了一种低温碱性果胶裂解酶及其编码基因和应用,该裂解酶具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列;或该裂解酶具有在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列基础上缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的衍生序列并且具有低温碱性果胶裂解酶活性。本发明所述的低温果胶裂解酶具有反应温度低、pH耐受性好等优点,最适天然底物为来源于橙皮的果胶,同时可以广泛应用于果胶的酶解。

    一种玉米赤霉烯酮及其衍生物的水解方法

    公开(公告)号:CN110819608A

    公开(公告)日:2020-02-21

    申请号:CN201911038267.9

    申请日:2019-10-29

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明涉及一种玉米赤霉烯酮及其衍生物的水解方法,以玉米赤霉烯酮或其衍生物为底物,利用玉米赤霉烯酮降解酶对所述底物进行水解,所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示,本发明所述的玉米赤霉烯酮降解酶具有酶活高、温度与pH耐受性良好等优点,可以广泛应用于玉米赤霉烯酮及其几种衍生物的酶解,底物范围广,其中对玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇具有较高活性,SEQ ID NO:2在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列上将第158位T突变为H,突变后其对于底物α-玉米赤霉烯醇的酶活提高40%。

    一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体

    公开(公告)号:CN110218737A

    公开(公告)日:2019-09-10

    申请号:CN201910523234.7

    申请日:2019-06-17

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用酵母内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体,属于抗体工程技术领域。本发明利用GAL1-GAL10双向启动子载体同时表达Adalimumab或Infliximab的VH-CH1和VL-CL两个结构域,通过氨基端内质网定位信号肽定位在内质网内组装成天然Fab形式片段,再利用Aga1-Aga2酵母细胞展示系统展示到细胞表面。同时,通过将酿酒酵母内质网滞留信号肽融合到Fab片段VL-CL结构域的羧基端,明显提高了酵母细胞表面展示的Fab片段结合抗原的能力,促进了功能性Fab片段的展示,从而更适用于Fab片段的酵母细胞表面展示,为抗体工程中Fab的改造方法提供了一种优化策略。

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