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公开(公告)号：CN103233075B
公开(公告)日：2016-02-10
申请号：CN201310170677.5
申请日：2013-05-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法。利用EST‐SSR的种间转移性，在转录组测序的基础上，结合Perl编程语言方法，对大量序列信息进行批量处理，进行SSR序列查找和SSR标记引物设计，克服了SSR开发效率低、耗时久、成本高等障碍。选择菊属不同种的材料对设计的SSR引物进行验证，若有条带检测出，即为成功的SSR引物。应用本方法成功地设计了1788对SSR引物，为菊属SSR引物开发进而实现分子标记辅助选择育种和比较基因组学研究提供了新的方法和思路。
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公开(公告)号：CN104673938A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510100532.7
申请日：2015-03-06
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明属于分子生物学病毒检测领域，提供一种高灵敏度检测菊花B病毒的引物、利用该特异引物检测菊花B病毒的方法及引物的应用。其中，本方法步骤如下：1)设计针对菊花B病毒的两轮特异性引物；2)以CVB1-R为引物，对待检测菊花DNA进行反转录得到cDNA，并以步骤1)所述两轮特异性引物进行巢式PCR扩增；3)将步骤2)进行的第二轮PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当获得381bp特异性片段时，表示待检测菊花感染菊花B病毒。本发明由于加入了特异的反转录引物进行巢式PCR，极大地提高了菊花B病毒检测灵敏度，经过验证灵敏度达到10-9ug/ul。本发明提供的方法，菊花CVB检测特异性强，工序简单，成本低廉。
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公开(公告)号：CN104372019A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410569007.5
申请日：2014-10-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，提供包括有CmWRKY48基因的重组载体、转化细胞、转CmWRKY48基因切花菊的培育、鉴定方法及应用。转CmWRKY48基因切花菊的培育方法包括如下步骤：(1)菊花CmWRKY48基因的克隆(2)植物表达载体pMDC43-CmWRKY48的构建(3)农杆菌EHA105介导叶盘法转化菊花。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmWRKY48基因已整合到转基因植株基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行抗蚜性检测，转基因植株抗蚜能力有很大提高，为利用基因工程技术选育菊花抗逆品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN103232996B
公开(公告)日：2014-11-12
申请号：CN201310121313.8
申请日：2013-04-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P1）为母本、‘南农银山’为父本（P2）杂交获得的92株F1分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN103232996A
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201310121313.8
申请日：2013-04-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P1）为母本、‘南农银山’为父本（P2）杂交获得的92株F1分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102676545B
公开(公告)日：2013-05-29
申请号：CN201210172706.7
申请日：2012-05-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1表达载体构建。本发明所构建的表达载体pCAMBIA 1301-CmIAA1是由CmIAA1基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector，经BamH I和Xba I双酶切后连接到载体pCAMBIA 1301的BamH I和Xba I位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmIAA1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成Aux/IAA蛋白，影响生长素信号途径，对植物生长发育产生负调控作用，抑制植物主根伸长，促使侧根增多，并抑制植物整体生长进度。
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公开(公告)号：CN103004585A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210534830.3
申请日：2012-12-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用卡那霉素快速筛选菊花转基因植株的方法，包括以下几个步骤：（1）确定菊花叶盘不定芽分化Kan筛选浓度、菊花茎段生根Kan筛选浓度以及Kan溶液浸泡筛选浓度和观察时间；（2）对菊花转化植株进行分化再生阶段和生根阶段的筛选得到生根株系；再将生根株系经Kan溶液浸泡筛选后得到转基因菊花Kan抗性株系；（3）转基因菊花的PCR验证：根据转基因载体中的35S启动子序列设计引物对筛选的转基因菊花Kan抗性株系进行PCR 扩增，验证载体片段是否插入菊花基因组。该方法简单准确，能有效地剔除大量假阳性植株，对于实现菊花转基因植株的规模化快速筛选、加快育种进程具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102154320B
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201110039094.X
申请日：2011-02-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 菊花抗逆转录因子DgZFP1及其植物表达载体和构建方法及应用，本发明属于分子生物学领域。本发明所构建的表达载体pCAMBIA1301-DgZFP1是由DgZFP1基因插入到克隆载体pMD19-Tsimplevector(Takara)，经BamH (Takara)和Kpn (Takara)双酶切后连接到载体pCAMBIA1301(Invitrogen)的BamH和Kpn位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，DgZFP1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成DgZFP1蛋白，调控下游基因的表达，提高植物耐盐性。
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公开(公告)号：CN102175554A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110007021.2
申请日：2011-01-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物栽培与育种技术领域，公开了从多个切花菊品种中筛选氮利用效率相对最高的品种的方法，该方法包括以下几个步骤：a、获取水培苗；b、砂培初筛：将水培苗分为两组，一组进行低氮处理，另一组进行正常氮处理；分别测定每个品种的筛选指标：相对干物质重、相对含氮量、相对叶绿素含量，筛选出2～6个氮利用效率较高的品种和2～6个氮利用效率较低的品种作为对照；c、营养液培养复筛：将步骤b中筛选出的品种进行营养液培养，重复筛选出1个氮利用效率相对最高品种和1个氮利用效率相对最低的品种。本方法最终筛选出的切花菊品种，为进一步对现有切花菊品种进行了改良，研究其生物学特性和生理生化机制提供材料。
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公开(公告)号：CN101513167B
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN200910029625.X
申请日：2009-04-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明获得菊属与近缘属属间远缘杂种的方法，属于生物技术育种领域。选择栽培菊花品种为母本，以野生的抗病虫能力强或具特异观赏价值的近缘属物种为父本，采用组织培养手段进行杂种胚的离体培养，以克服菊属与近缘属远缘杂交后合子胚败育的障碍。对获得的后代材料进行杂种形态学鉴定和原位杂交鉴定，选择茎、叶、花序、表皮毛等形态学特征介于双亲之间、与母本不同、出现父本特异性状或双亲不具有的新性状的后代材料，进行原位杂交，若染色体组成为分别来源于双亲，即为获得的属间远缘杂交种。应用本方法成功地实现了菊属与多个近缘属的属间远缘杂交种，对现有栽培菊花品种进行了改良，并创造了一批有应用价值的新种质。
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