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公开(公告)号：CN116731203A
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202310520431.X
申请日：2023-05-09
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： C07K19/00 , A23K10/18 , A23K20/147 , A23K20/153 , A23K50/80 , C12N15/62 , C12N15/74 , C12N1/21 , A61K39/15 , A61K39/385 , A61P31/14 , C12R1/01
摘要： 本发明属于基因工程及分子免疫学技术领域，具体涉及一种融合表达GCRV VP4和LTB的重组乳酸菌及其制备方法与应用。本发明提供了一种融合蛋白，包含GCRV VP4蛋白和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位蛋白；通过大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位蛋白可以进一步提升VP4蛋白被肠黏膜免疫组织抗原呈递细胞直接识别并呈递抗原，激活先天性免疫Toll样受体信号转导，提高免疫相关基因(IFNα、TLR3、TLR5、MyD88、NF‑κB、Mx、IRF3、IRF7、MHCII、IL‑1β和/或IL‑8基因)表达水平，增强鱼体抗病毒能力。
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公开(公告)号：CN112680544B
公开(公告)日：2021-11-26
申请号：CN202011577941.3
申请日：2020-12-28
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种用于检测Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒的实时荧光RT‑RPA引物、探针和试剂盒及其应用。本发明通过基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒特定的保守区域设计筛选得到引物和探针的最佳组合，其检测灵敏度高、特异性好、检测效果稳定；而且与包括Ⅰ型GCRV和Ⅲ型GCRV在内的9种鱼类常见病毒和草鱼易感染细菌维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌均无交叉反应，表现出良好的特异性。基于本发明所建立的实时荧光RT‑RPA引物、探针及检测试剂盒，对于基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒检测灵敏度为101copy/μl，检测灵敏度比巢氏PCR方法高10倍，不需要大型仪器设备，检测时间仅需4.5～30min，大大缩短了检测时间，可用于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN113604438A
公开(公告)日：2021-11-05
申请号：CN202110751722.0
申请日：2021-07-02
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/91
摘要： 本发明公开了一种抗罗非鱼湖病毒的单克隆抗体及其细胞株和应用，该杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞TiLV S10E3，于2020年11月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2020209。该杂交瘤细胞株由SP2/0骨髓瘤细胞与免疫了罗非鱼湖病毒S10节段编码蛋白的小鼠脾细胞融合得到，能够无限增殖并持续产生抗罗非鱼湖病毒S10节段编码蛋白的单克隆抗体，产生的单克隆抗体效价高，对罗非鱼湖病毒具有较好的特异性，可用于各类体外检测、野毒株病毒筛选分离以及抗病毒药物筛选等多个方面，具有极高的应用及科研价值。
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公开(公告)号：CN112680544A
公开(公告)日：2021-04-20
申请号：CN202011577941.3
申请日：2020-12-28
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种用于检测Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒的实时荧光RT‑RPA引物、探针和试剂盒及其应用。本发明通过基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒特定的保守区域设计筛选得到引物和探针的最佳组合，其检测灵敏度高、特异性好、检测效果稳定；而且与包括Ⅰ型GCRV和Ⅲ型GCRV在内的9种鱼类常见病毒和草鱼易感染细菌维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌均无交叉反应，表现出良好的特异性。基于本发明所建立的实时荧光RT‑RPA引物、探针及检测试剂盒，对于基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒检测灵敏度为101copy/μl，检测灵敏度比巢氏PCR方法高10倍，不需要大型仪器设备，检测时间仅需4.5～30min，大大缩短了检测时间，可用于现场快速检测。
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公开(公告)号：CN110551689B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201910743467.8
申请日：2019-08-13
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
摘要： 本发明公开了一种乌斑鳢脑细胞系及其构建方法和应用，本发明针对乌斑鳢脑组织细胞的特征，采用胶原酶I和胰酶联合消化法分离脑组织细胞，进行原代培养，继而成功构建了乌斑鳢脑细胞系，已连续传至100代以上，可提供大量的乌斑鳢脑来源细胞，且细胞能维持良好的生长状态，可以对其进行冷冻保存。乌斑鳢脑细胞系对多种鱼类病毒具有敏感性，接毒后均出现细胞病变，而且乌斑鳢脑细胞系还可用于鳢源舒伯特气单胞菌的黏附特性研究，可以直接应用于病原特性研究及疫苗研制。
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公开(公告)号：CN108866008B
公开(公告)日：2020-03-31
申请号：CN201810680288.X
申请日：2018-06-27
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/535
摘要： 本发明公开了抗锦鲤疱疹病毒的单克隆抗体制备方法及其应用，本发明制备的抗锦鲤疱疹病毒的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC NO：C201887的小鼠杂交瘤细胞株分泌产生的，单克隆抗体的效价为1：1.28×105；杂交瘤细胞株活性高，可识别锦鲤疱疹病毒结构蛋白，特异性强。并在此的基础上建立了检测锦鲤疱疹病毒的夹心ELISA检测方法，其最低检测浓度为3.923ng/mL，利用上述单克隆抗体建立了检测锦鲤疱疹病毒的间接夹心ELISA试剂盒，可用于大规模锦鲤疱疹病毒的检测，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN108865974B
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201810669284.1
申请日：2018-06-26
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
摘要： 本发明公开了一种罗非鱼脑细胞系的构建方法，其步骤是：取鲜活罗非鱼消毒取脑组织，剪碎块，用胶原酶处理后，加入胰蛋白酶；用含培养液充分悬浮，进行原代培养；细胞长满瓶底时，用胰酶‑EDTA消化，接种传代培养；传代培养60代后，于对数生长期加入秋水仙素处理并进行核型分析。本发明公开的罗非鱼脑细胞系的制备方法，方法简单方便；并且用该方法制备的罗非鱼脑细胞系，可以进行长时间的传代培养，对罗非鱼出血病病毒非常敏感，可以广泛应用于实验中。
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公开(公告)号：CN108020664A
公开(公告)日：2018-05-11
申请号：CN201711274976.8
申请日：2017-12-06
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/533
摘要： 本发明涉及一种检测II型草鱼呼肠孤病毒疫苗中病毒含量的试剂盒及方法，进一步地涉及活疫苗或灭活疫苗(病毒灭活前)的病毒含量的测定，所述试剂盒包括用于检测基因II型GCRV VP41的血清抗体、FITC标记的羊抗兔IgG、阳性对照样品、固定液和PBS洗液。检测方法为将活疫苗或灭活疫苗(病毒灭活前)进行梯度稀释后接种于PSF细胞，连续培养完成后再用本发明所述的试剂盒进行免疫荧光检测，将检测结果进行计算得出相应的病毒含量。本发明的试剂盒及方法灵敏度高、特异性强，且能定量检测活病毒。
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公开(公告)号：CN106866796A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710067886.5
申请日：2017-02-07
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC分类号： C07K14/14 , C12N15/46 , C07K16/10 , A61K39/15 , A61K39/42 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/68
CPC分类号： C07K14/005 , A61K39/00 , C07K16/10 , C12N2720/12022 , C12N2720/12034
摘要： 本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S9基因编码的重组蛋白及其应用。所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，编码该蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明获得的重组蛋白具有较好的免疫原性，与GCRV其它结构蛋白相比，其诱导免疫动物产生的特异性抗体效价更高。进一步试验表明，用VP6蛋白免疫草鱼，可使草鱼诱导产生较高的特异性抗体，并能对草鱼呼肠孤病毒强毒株的攻击起到一定的免疫保护作用。因此，对GCRV Ⅱ型VP6蛋白的研究和应用，对开发草鱼出血病新型疫苗及免疫学检测试剂盒具有极其重要的意义，为草鱼出血病提供新的有效解决途径。
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公开(公告)号：CN104388588B
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201410633166.7
申请日：2014-11-11
申请人： 中国水产科学研究院珠江水产研究所
摘要： 本发明公开了一种Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒NASBA-ELISA检测引物、探针及试剂盒。所述引物及探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示。所述试剂盒中含有引物、探针、NASBA扩增缓冲液，酶混合液，扩增产物检测试剂，阴性对照和阳性对照。本发明的Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒NASBA-ELISA 检测试剂盒检测时间周期短、检测效率高；检测病毒特异性高，准确率高；在进行病毒定性分析的同时还能进行病毒定量分析；检测灵敏度比普通PCR高；操作简单、易于推广；实验结果重复性好。
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