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公开(公告)号：CN104726355B
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201510164275.3
申请日：2015-04-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 酿酒酵母孢子表达的(S)‑羰基还原酶II不对称转化制备(S)‑苯乙二醇的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株重组酿酒酵母（Saccharomyces. cerevisiae）AN120/pRS424‑TEFpr‑scrII，保藏编号CCTCC NO：M2015100；及其不对称转化制备(S)‑苯乙二醇的方法。本发明将(S)‑羰基还原酶II表达于酿酒酵母AN120中，利用限制培养条件使重组酿酒酵母产生具有活性的孢子，以2‑羟基苯乙酮为底物，催化不对称转化反应，通过优化生物转化反应条件，产物(S)‑苯乙二醇光学纯度达到99.3%，产率为99.0%。本发明利用酵母孢子表达技术解决了羰基还原酶对环境耐受性和重复使用性差的问题，为高效生物合成(S)‑苯乙二醇的工业应用奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN104830704A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510206914.8
申请日：2015-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: (R)-羰基还原酶在近平滑假丝酵母中原位表达重组菌及用其高效制备(R)-苯基乙二醇的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株近平滑假丝酵母重组菌Candida parapsilosis pCP-rcr，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2015106；本发明构建了外源蛋白在近平滑假丝酵母中的表达质粒pCP，将(R)-羰基还原酶克隆到该质粒中，获得重组质粒pCP-rcr，电击转化入近平滑假丝酵母获得重组菌株Candida parapsilosis pCP-rcr。该重组菌催化2-羟基苯乙酮，通过优化生物转化反应条件，产物(R)-苯基乙二醇光学纯度达到99.9%，产率为99.6%，生物转化的时间由48 h缩短到13 h，为高效、低成本制备(R)-苯基乙二醇提供了有效途径。
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公开(公告)号：CN104726355A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201510164275.3
申请日：2015-04-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 酿酒酵母孢子表达的(S)-羰基还原酶II不对称转化制备(S)-苯乙二醇的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株重组酿酒酵母（Saccharomyces.cerevisiae）AN120/pRS424-TEFpr-scrII，保藏编号CCTCC NO：M2015100；及其不对称转化制备(S)-苯乙二醇的方法。本发明将(S)-羰基还原酶II表达于酿酒酵母AN120中，利用限制培养条件使重组酿酒酵母产生具有活性的孢子，以2-羟基苯乙酮为底物，催化不对称转化反应，通过优化生物转化反应条件，产物(S)-苯乙二醇光学纯度达到99.3%，产率为99.0%。本发明利用酵母孢子表达技术解决了羰基还原酶对环境耐受性和重复使用性差的问题，为高效生物合成(S)-苯乙二醇的工业应用奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN101469318A
公开(公告)日：2009-07-01
申请号：CN200810196512.4
申请日：2008-09-08
Applicant: 江南大学
Abstract: (R)－羰基还原酶与甲酸脱氢酶偶联促进(R)－苯基乙二醇的合成，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株重组大肠杆菌E.coli Rosetta/pETDuet－rcr－fdh，保藏编号CCTCC NO：M208123；将(R)－专一性羰基还原酶和甲酸脱氢酶通过共表达方式进行偶联，利用培养后的重组菌株，以2－羟基苯乙酮为底物，催化不对称转化反应，通过优化生物转化反应条件，产物(R)－苯基乙二醇光学纯度达到100％e.e.，产率为85.9％。本发明利用双酶偶联技术解决了高浓度底物条件下的辅酶再生循环的限制性问题，为高效、低成本制备(R)－苯基乙二醇提供了有效途径，为生物合成(R)－苯基乙二醇的工业应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN119842646A
公开(公告)日：2025-04-18
申请号：CN202411592487.7
申请日：2024-11-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种双酶级联催化肌肉肌醇高效合成表肌醇的方法，属于生物催化工程领域。本发明对鲨肌醇脱氢酶进行突变，获得有益突变体C261R，并与耐热肌肉肌醇脱氢酶进行偶联，高效催化合成表肌醇，属于生物催化工程领域。该表肌醇合成新途径完全不同于已报道的鲨肌醇以及D‑手性肌醇合成方法，是以肌肉肌醇，先肌肉肌醇C4位置先脱氢形成中间产物酮，然后加氢，实现C4位置氢手性反转，获得终产物表肌醇。本发明提供一种全新的生物催化合成表肌醇的途径，获得表肌醇产量为1.39g/L，转化率为38.7％，均为目前公开报道的最高水平，生物合成工艺操作简单、成本低、绿色环保，为表肌醇的工业化生产奠定了扎实的研究基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119082064B
公开(公告)日：2025-04-15
申请号：CN202411394843.4
申请日：2024-10-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了羰基还原酶突变体及其催化合成高浓度玻色因的方法，属于生物催化领域。本发明采用一锅法催化β‑丙酮木糖苷合成高浓度玻色因，以羰基还原酶CnMDR编码的酶，理性设计底物口袋关键结合多位点，将有益突变进行组合，以优势突变酶重组菌为催化剂，以β‑丙酮木糖苷为底物，同时引入甲酸脱氢酶变体和NAD+激酶，驱动NADP+‑NADPH辅酶循环，合成玻色因的产量为200g/L，转化率>99％，产物ee值>99％，均为目前公开报道的最高水平，本发明提供了一种一锅法高效低成本合成玻色因的方法，仅需要添加微量(0.3mM)辅酶，反应体系中副产物易于分离，为工业化放大生产提供了极大的便利。
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公开(公告)号：CN119082064A
公开(公告)日：2024-12-06
申请号：CN202411394843.4
申请日：2024-10-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了羰基还原酶突变体及其催化合成高浓度玻色因的方法，属于生物催化领域。本发明采用一锅法催化β‑丙酮木糖苷合成高浓度玻色因，以羰基还原酶CnMDR编码的酶，理性设计底物口袋关键结合多位点，将有益突变进行组合，以优势突变酶重组菌为催化剂，以β‑丙酮木糖苷为底物，同时引入甲酸脱氢酶变体和NAD+激酶，驱动NADP+‑NADPH辅酶循环，合成玻色因的产量为200g/L，转化率>99％，产物ee值>99％，均为目前公开报道的最高水平，本发明提供了一种一锅法高效低成本合成玻色因的方法，仅需要添加微量(0.3mM)辅酶，反应体系中副产物易于分离，为工业化放大生产提供了极大的便利。
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公开(公告)号：CN117821433A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202311803653.9
申请日：2023-12-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖异构酶突变体及其高效合成异麦芽酮糖，属于基因工程、酶工程技术领域。本发明的突变体M282S/M441F/A470E在30℃和pH 6.0时，比酶活可到达871.3U/mg，较野生型提高1.33倍，且稳定性提高，在45℃下半衰期约为120min。将该重组蔗糖异构酶突变体应用于异麦芽酮糖生产中，产量和转化率提高，利用发酵液上清作为粗酶液添加入反应体系中，当蔗糖浓度为650g/L时，产率为98.7％，产量为641.6g，能够高效合成异麦芽酮糖并获得高产量。本发明为异麦芽酮糖的生物催化合成提供了优质蔗糖异构酶突变体，制备异麦芽酮糖产量达到国内外公开报道最高水平。
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公开(公告)号：CN116622686A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310497944.3
申请日：2023-05-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了L‑苏氨酸醛缩酶关键结构域改造高效合成β‑羟基‑α‑氨基酸，属于生物催化工程领域。本发明获得的最优突变菌株N12Q/Y35W/A176V催化100mM的底物4‑甲磺酰基苯甲醛(MSBA)，1M的甘氨酸，添加50μM PLP启动反应，反应8h，底物的摩尔转化率为78.3％，产物L‑thero‑对甲磺酰基苯丝氨酸的非对映选择性高达95.1％，转化率和非对映选择性分别是野生型酶的2.4和5.5倍。同时该突变菌株对其它一系列苯甲醛衍生物表现出提高的转化率和非对映选择性。本发明为基于蛋白结构理性改造L‑苏氨酸醛缩酶，实现β‑羟基‑α‑氨基酸的高效生物制备奠定了坚实的研究和工业制备基础。
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公开(公告)号：CN108504615B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201810275253.8
申请日：2018-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产酸性蛋白酶的重组菌及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的酸性蛋白酶在pH 2.8、55℃时比酶活高达903U·mg‑1。来源于E.coli BL21(DE3)/pET28‑proApp的proApp酶活和温度稳定性优于来源于E.coli BL21(DE3)/pGEX‑proApp的proApp。以大豆蛋白为底物进行水解，proApp在pH3.0、55℃时达到最佳水解活性为104U·mg‑1；以乳蛋白为底物进行水解，proApp在pH 2.2、55℃时达到最佳水解活性为252U·mg‑1。通过MALDI‑TOF/MS分析发现，proApp偏好于在Glu前或Leu后进行特异性酶切。这些工作为工业水解大豆蛋白和乳蛋白提供了新的方法，为工业中酸性蛋白酶的应用提供了新的思路，为工业中大豆蛋白和乳蛋白的水解酶提供了优良的代表性菌株，为酸性蛋白酶的工业应用奠定了基础。
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