公开(公告)号：CN101768217A

公开(公告)日：2010-07-07

申请号：CN201010034438.3

申请日：2010-01-20

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  赵洪伟 ,  南铁贵 ,  谭桂玉 ,  刘威 ,  高巍 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K1/113 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种铜离子抗原及其制备方法与应用。该铜离子抗原，是螯合剂与载体蛋白的偶联物与铜离子形成的络合物。本发明的制备铜离子抗原的方法能够方便、快捷地获得铜离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的铜离子抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备铜离子抗原的方法及由该方法获得的铜离子抗原在铜离子的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。

公开(公告)号：CN103193873B

公开(公告)日：2015-11-18

申请号：CN201310070514.X

申请日：2013-03-06

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  曹振 ,  张亮 ,  张威 ,  张瑞 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  崔永亮 ,  郭素琴

IPC: C07K14/325 ,  C07K16/12 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种用于制备识别变性Bt蛋白的抗体的免疫原及其制备的抗体和应用。本发明提供了用于制备识别变性Bt蛋白的抗体的免疫原，是将含有变性Bt蛋白的溶液和佐剂混合并乳化得到的产物。所述免疫原免疫动物得到的多克隆抗体也属于本发明的保护范围。所述多克隆抗体可用作包被抗原和/或检测用一抗，从而用于检测待测样本中是否含有变性Bt蛋白。所述待测样本可为煮熟的转基因作物，转基因作物加工得到的食品或饲料等。本发明对转基因粮食作物的生物安全性评价具有实用价值，潜在社会效益巨大。

公开(公告)号：CN103804490B

公开(公告)日：2015-11-04

申请号：CN201210460425.1

申请日：2012-11-15

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  崔永亮 ,  曹振 ,  谭桂玉 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种噻苯隆抗原及其制备方法与应用。该噻苯隆抗原的结构式如式A所示。本发明提供的噻苯隆抗原的制备方法，包括如下步骤：（1）5-氨基-1,2,3-噻二唑与式B所示含有酯基的苯异氰酸酯进行反应得到式C所示化合物；（2）在酸或碱存在的条件下，式C所示化合物经水解反应得到式D所示化合物；（3）式D所示化合物和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式E所示化合物；（4）式E所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示噻苯隆抗原；所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。用本发明方法制备的噻苯隆抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。

公开(公告)号：CN103233022B

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201310133842.X

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  何丽珊 ,  张瑞 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  张亮 ,  郭素琴 ,  张威

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/15 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C07K14/325 ,  C07K19/00 ,  A01N57/16 ,  A01N63/02 ,  A61P7/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry9C的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-1548位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry9C（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry9C基因（N-Cry9C基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN102590527B

公开(公告)日：2014-04-23

申请号：CN201210012498.4

申请日：2012-01-16

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  何丽珊 ,  谭桂玉 ,  孙硕 ,  曹振 ,  张亮 ,  李召虎

IPC: G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种检测杀虫晶体蛋白Bt？Cry1Ab/Ac的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该方法及试剂盒所使用的抗Bt？Cry1Ab/Ac的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株Bt2F9分泌产生的，该杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC？No.5162。本发明所提供单克隆抗体是同时以Bt？Cry1Ac蛋白溶液和转Bt？Cry1Ac基因棉花植株叶片的提取液为包被抗原，通过间接非竞争ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选得到的、对在植物中表达的Bt？Cry1Ab/Ac蛋白具有高亲和力的抗体，亲和常数为1.03×109M-1；利用该单克隆抗体制备得到的双抗夹心酶联免疫试剂盒，用于定性或定量检测棉花、玉米等转基因植物中的Bt？Cry1Ab/Ac蛋白，线性检测范围在0.78～50ng/mL，具有快速、灵敏的优点。

公开(公告)号：CN101968481B

公开(公告)日：2013-12-11

申请号：CN201010253926.3

申请日：2010-08-13

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  赵洪伟 ,  南铁贵 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  高巍 ,  王敏 ,  孙硕 ,  李召虎

IPC: G01N33/53 ,  G01N33/566 ,  C07K16/44 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种检测样品中是否含有重金属的方法及其专用试剂盒。该试剂盒，包括包被原、抗待检重金属的抗体；所述包被原与抗待检重金属的抗体相互作用，且所述包被原与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力。实验证明，本发明所提供的制备铜离子非均等竞争ELISA检测法中，包被抗原的制备方法简单，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的包被抗原对ELISA检测灵敏度有明显提高。本发明的制备包被抗原的方法及由该方法建立的铜离子快速免疫检测方法将有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102492671B

公开(公告)日：2013-02-27

申请号：CN201110378381.3

申请日：2011-11-24

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  高巍 ,  王敏 ,  孙硕 ,  曹振

IPC: C12N9/10 ,  C07K16/40 ,  G01N33/573

Abstract: 本发明公开了5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶的多肽抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的制备5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶的多肽抗原的方法，包括如下步骤：(1)将载体蛋白与双功能试剂进行反应，得到反应产物I；所述双功能试剂选自4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺基4-[p-马来酰亚胺苯基]丁酸盐或N-[ε-马来酰亚胺乙酰基氧]硫代琥珀酰亚胺酯；(2)将所述步骤(1)得到的反应产物I与序列表中序列1所示的多肽进行反应，得到反应产物II，即得到5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原。本发明所提供的制备EPSPS多肽抗原的方法以及由该方法获得的EPSPS多肽抗原，将在EPSPS蛋白的酶联免疫检测中有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102627628A

公开(公告)日：2012-08-08

申请号：CN201210060248.8

申请日：2012-03-08

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘尚钟 ,  崔永亮 ,  徐川 ,  王毅 ,  刘峰 ,  王磊 ,  欧俊军 ,  南铁贵 ,  谭桂玉 ,  王敏 ,  曹振 ,  孙硕

IPC: C07D401/04 ,  C07D401/14 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K1/113 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种氯虫苯甲酰胺抗原及其制备方法与应用。该氯虫苯甲酰胺抗原如式C所示，是氯虫苯甲酰胺与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物。本发明提供的制备氯虫苯甲酰胺抗原的方法，能够方便、快捷地获得氯虫苯甲酰胺抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的氯虫苯甲酰胺抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备氯虫苯甲酰胺抗原的方法及由该方法获得的氯虫苯甲酰胺抗原在氯虫苯甲酰胺的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。式C

公开(公告)号：CN102590527A

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201210012498.4

申请日：2012-01-16

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  何丽珊 ,  谭桂玉 ,  孙硕 ,  曹振 ,  张亮 ,  李召虎

IPC: G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种检测杀虫晶体蛋白Bt Cry1Ab/Ac的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该方法及试剂盒所使用的抗Bt Cry1Ab/Ac的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株Bt2F9分泌产生的，该杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.5162。本发明所提供单克隆抗体是同时以Bt Cry1Ac蛋白溶液和转Bt Cry1Ac基因棉花植株叶片的提取液为包被抗原，通过间接非竞争ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选得到的、对在植物中表达的Bt Cry1Ab/Ac蛋白具有高亲和力的抗体，亲和常数为1.03×109M-1；利用该单克隆抗体制备得到的双抗夹心酶联免疫试剂盒，用于定性或定量检测棉花、玉米等转基因植物中的Bt Cry1Ab/Ac蛋白，线性检测范围在0.78～50ng/mL，具有快速、灵敏的优点。

公开(公告)号：CN102190723A

公开(公告)日：2011-09-21

申请号：CN201110090978.8

申请日：2011-04-12

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  孙硕 ,  赵洪伟 ,  南铁贵 ,  高巍 ,  谭桂玉 ,  王敏 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张炜 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了铬离子抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的制备铬离子抗原的方法，包括如下步骤：(1)将螯合剂进行重氮化反应，得到重氮化螯合剂；(2)将所述步骤(1)得到的重氮化的螯合剂与载体蛋白进行偶联反应，得到偶联产物；(3)将所述步骤(2)得到的偶联产物与铬离子进行络合反应，得到络合物，即得到铬离子抗原。本发明所提供的制备铬离子抗原的方法能够方便、快捷地获得铬离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的铬离子抗原进行免疫得到的抗体特异性好、最低检测限值低。因此，本发明所提供的制备铬离子抗原的方法以及由该方法获得的铬离子抗原，将在铬离子的酶联免疫检测中有广阔的应用前景。