公开(公告)号：CN110872344B

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN201911131748.4

申请日：2019-11-19

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  王冕 ,  谭桂玉 ,  陈晓娇 ,  何青青

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K1/113 ,  C07K1/02 ,  C07K16/44 ,  G01N33/68 ,  C07C231/02 ,  C07C233/73

Abstract: 本发明公开了一种氯霉素完全抗原及其制备方法与应用。本发明氯霉素完全抗原，为半抗原与载体蛋白的偶联物；其中，所述半抗原的结构式如下式Ⅰ所示：它的制备方法，包括如下步骤：先合成所述半抗原；然后将所述半抗原活化，与所述载体蛋白进行偶联，即得到所述氯霉素完全抗原。一种氯霉素抗体，它通过上述的氯霉素完全抗原制备。本发明氯霉素完全抗原或氯霉素抗体在如下1)或2)中的应用：1)检测样品中氯霉素；2)制备成检测样品中氯霉素的酶联免疫试剂盒、试纸条和免疫亲和色谱柱中至少一种；其中，所述样品为水体和/或食品。本发明氯霉素完全抗原能够用于羊驼抗体制备的氯霉素完全抗原，为进一步筛选高质量的氯霉素纳米抗体奠定条件。

公开(公告)号：CN103145815B

公开(公告)日：2014-12-31

申请号：CN201310070417.0

申请日：2013-03-06

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张亮 ,  曹振 ,  郭素琴 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  李召虎

IPC: C07K14/325 ,  C07K1/36 ,  C07K1/34 ,  C07K1/30 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了一种从抗虫棉种子中纯化Bt毒蛋白的方法。本发明提供的从抗虫棉种子中纯化Bt Cry1Ac蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将抗虫棉种子去壳后进行可溶性总蛋白的提取，得到溶液甲；（2）将所述溶液甲进行60%饱和度的硫酸铵沉淀，离心收集沉淀；（3）溶解步骤（2）得到的沉淀并进行透析，得到溶液乙；（4）将所述溶液乙进行免疫亲和层析，收集与抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体特异结合的蛋白组分，即为Bt毒蛋白；所述抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体为是由杂交瘤Bt2F9CGMCC No.5162分泌产生的单克隆抗体。本发明具有以下优点：（1）简化了纯化流程，降低了纯化成本；（2）缩短了纯化时间，减少了目的蛋白损失。

公开(公告)号：CN103804490A

公开(公告)日：2014-05-21

申请号：CN201210460425.1

申请日：2012-11-15

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  崔永亮 ,  曹振 ,  谭桂玉 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

CPC classification number: C07K14/765 ,  C07K1/1077 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  C07K19/00 ,  G01N33/531

Abstract: 本发明公开了一种噻苯隆抗原及其制备方法与应用。该噻苯隆抗原的结构式如式A所示。本发明提供的噻苯隆抗原的制备方法，包括如下步骤：（1）5-氨基-1,2,3-噻二唑与式B所示含有酯基的苯异氰酸酯进行反应得到式C所示化合物；（2）在酸或碱存在的条件下，式C所示化合物经水解反应得到式D所示化合物；（3）式D所示化合物和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式E所示化合物；（4）式E所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示噻苯隆抗原；所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。用本发明方法制备的噻苯隆抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。

公开(公告)号：CN103233022A

公开(公告)日：2013-08-07

申请号：CN201310133842.X

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  何丽珊 ,  张瑞 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  张亮 ,  郭素琴 ,  张威

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/15 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C07K14/325 ,  C07K19/00 ,  A01N57/16 ,  A01N63/02 ,  A61P7/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry9C的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-1548位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry9C（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry9C基因（N-Cry9C基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN103193873A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201310070514.X

申请日：2013-03-06

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  曹振 ,  张亮 ,  张威 ,  张瑞 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  崔永亮 ,  郭素琴

IPC: C07K14/325 ,  C07K16/12 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种用于制备识别变性Bt蛋白的抗体的免疫原及其制备的抗体和应用。本发明提供了用于制备识别变性Bt蛋白的抗体的免疫原，是将含有变性Bt蛋白的溶液和佐剂混合并乳化得到的产物。所述免疫原免疫动物得到的多克隆抗体也属于本发明的保护范围。所述多克隆抗体可用作包被抗原和/或检测用一抗，从而用于检测待测样本中是否含有变性Bt蛋白。所述待测样本可为煮熟的转基因作物，转基因作物加工得到的食品或饲料等。本发明对转基因粮食作物的生物安全性评价具有实用价值，潜在社会效益巨大。

公开(公告)号：CN101885768B

公开(公告)日：2012-10-10

申请号：CN200910083947.2

申请日：2009-05-11

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  高巍 ,  刘威 ,  谭桂玉 ,  何素平 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K14/77 ,  C07K1/113 ,  G01N33/84

Abstract: 本发明公开了一种汞离子抗原及其制备方法与应用。该汞离子抗原的制备方法包括以下步骤：(1)将对氨基苯甲基乙二胺四乙酸的酸溶液与可溶性亚硝酸盐反应，得到重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸；(2)将上述步骤(1)的重氮化的对氨基苯甲基乙二胺四乙酸与载体蛋白反应，得到偶联产物；(3)将上述步骤(2)的偶联产物与汞离子反应，得到汞离子抗原。本发明的汞离子抗原的制备方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的汞离子抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备汞离子抗原的方法及由该方法获得的汞离子抗原在汞离子的酶联免疫检测中将有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102199211A

公开(公告)日：2011-09-28

申请号：CN201110090869.6

申请日：2011-04-12

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  高巍 ,  王敏 ,  孙硕 ,  曹振 ,  李召虎

IPC: C07K16/38 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N21/31 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的方法及其专用酶联免疫试剂盒。本发明所提供的酶联免疫试剂盒含有豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体；所述豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.4617的豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体杂交瘤细胞株CpTI 3D6分泌产生的。本发明应用抗CpTI多克隆抗体及酶标记抗CpTI单克隆抗体，采用双抗夹心ELISA方法进行试剂盒制备，并应用制备的试剂盒鉴定转基因作物真伪，具有快速、灵敏的优点。

公开(公告)号：CN101935348A

公开(公告)日：2011-01-05

申请号：CN201010259874.0

申请日：2010-08-20

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  曹振 ,  赵洪伟 ,  南铁贵 ,  高巍 ,  谭桂玉 ,  王敏 ,  孙硕 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/566

Abstract: 本发明公开了一种铅离子抗原及其制备方法与应用。本发明提供的制备铅离子抗原的方法，包括如下步骤：1)将螯合剂溶解于酸的水溶液中，再向其中加入亚硝酸盐水溶液，进行重氮化反应，得到重氮化的螯合剂；2)将步骤1)得到的重氮化的螯合剂和载体蛋白溶液混合，进行偶联反应，得到所述螯合剂与载体蛋白的偶联物；3)将步骤2)得到的所述螯合剂与载体蛋白的偶联物与铅离子的溶液混合，进行络合反应，得到螯合剂与载体蛋白的偶联物与铅离子形成的络合物。本发明的制备铅离子抗原的方法及由该方法获得的铅离子抗原在铅离子的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。

公开(公告)号：CN101914152A

公开(公告)日：2010-12-15

申请号：CN201010259922.6

申请日：2010-08-20

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  谭桂玉 ,  高巍 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种汞离子抗原及其制备方法与应用。本发明提供的方法包括如下步骤：1)活化4-巯基苯基乙酸，得到活化的4-巯基苯基乙酸；2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联，得到活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物；3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合，得到所述偶联物和汞离子的螯合物，即得到汞离子抗原。本发明的制备汞离子抗原的方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。

公开(公告)号：CN101445557A

公开(公告)日：2009-06-03

申请号：CN200810239765.5

申请日：2008-12-16

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  高巍 ,  南铁贵 ,  何素平 ,  赵洪伟 ,  刘威 ,  谭桂玉 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种镉离子抗原及其制备方法与应用。该镉离子抗原，是螯合剂与载体蛋白的偶联物与镉离子形成的络合物。该制备镉离子抗原的方法，包括如下步骤：(1)将螯合剂重氮化，得到重氮化的螯合剂；(2)将载体蛋白与所述重氮化的螯合剂混合，进行偶联反应，得到载体蛋白与重氮化的螯合剂的偶联物；(3)将镉离子与所述偶联物混合，进行络合反应，得到镉离子抗原。利用本发明的方法能方便快捷地获得镉离子抗原，成本低，效果好。用本发明方法制得的完全抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。因此，本发明方法及由该方法获得的抗原在镉离子的酶联免疫检测中会有广阔的应用前景。