精氨酸脱亚胺酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN112442496A

    公开(公告)日:2021-03-05

    申请号:CN201910800782.X

    申请日:2019-08-28

    发明人: 马永 庄宇

    摘要: 本发明提供了精氨酸脱亚胺酶的突变体,特别是精氨酸脱亚胺酶突变体的设计与制备,以及其聚乙二醇修饰产物在药物制备中的应用。本发明的ADI突变体是通过氨基酸的突变破坏ADI同源二聚体亚基间相互作用力,而不能形成二聚体的单体形式ADIm。本发明的突变设计于Loop或者二级结构α‑Helix和β‑sheet边缘的氨基酸突变;且突变前后氨基酸结构相似,例如突变前为Arg,可突变成与Arg结构最相似的脂肪族氨基酸,如Leu等。本发明提供的ADIm不仅是精氨酸脱亚胺酶单体突变体,而且最大程度保留了ADI活性;同时,在此基础上得到的聚乙二醇修饰的ADIm,在具有长效等优点的基础上,更大程度的降低了其免疫原性,从整体来说提高了疗效。

    利用毕赤酵母分泌表达精氨酸脱亚胺酶及构建方法

    公开(公告)号:CN111944841A

    公开(公告)日:2020-11-17

    申请号:CN202010627909.5

    申请日:2020-07-01

    申请人: 湖北大学

    摘要: 本发明属于基因工程技术领域,公开了一种利用毕赤酵母分泌表达精氨酸脱亚胺酶及构建方法,将优化的精氨酸脱亚胺酶基因融合在酵母表达载体BDM上,构建单拷贝表达载体;利用限制性内切酶EcoRⅠ、SPeⅠ、BamHⅠ、XbaⅠ四个酶进行酶切,根据SpeⅠ和XbaⅠ粘性末端能互补配对的原则,通过反复酶切、连接和转化操作,获得含精氨酸脱亚胺酶的重组质粒,电转毕赤酵母后,在甲醇诱导下能高效分泌表达精氨酸脱亚胺酶。本发明所构建的多拷贝高效表达精氨酸脱亚胺酶可用于提高产量、降低成本,实现精氨酸脱亚胺酶的胞外分泌表达,适用于精氨酸脱亚胺酶的规模化生产。

    一种无标记多位点整合表达谷氨酰胺酶菌株及其构建方法

    公开(公告)号:CN107828710B

    公开(公告)日:2020-07-03

    申请号:CN201711328979.5

    申请日:2017-12-13

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明公开了一种无标记多位点整合表达谷氨酰胺酶菌株及其构建方法,属于基因工程领域。本发明的是将谷氨酰胺酶基因在16S rDNA、nprB、nprE、aprE、spo0A、epr、bpr 7个位点整合表达,最终得到了多位点无抗性整合表达谷氨酰胺酶菌株BSM7。本发明得到的BSM1和BSM7,摇瓶发酵24h后,酶活分别为40.5U/mL和85.6U/mL,突变酶活提高了111.4%。BSM7菌株分批补料发酵,在32h左右达到最高酶活,为375.6U/mL。通过遗传稳定性分析发现,BSM7的遗传稳定性远远大于改基因的质粒表达的稳定性。该发明提高了谷氨酰胺酶酶在食品工业的应用潜力。