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公开(公告)号：CN116004593A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202211559294.2
申请日：2022-12-06
Applicant: 宜兴食品与生物技术研究院有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种半理性设计酶定向进化方法及其在腈水解酶分子改造中的应用，本发明应用ALF‑扫描对腈水解酶的活性口袋进行了几何重塑，以改变底物偏好性并提高催化效率。通过利用该方法结合定点饱和突变，成功获得了4个具有强芳香腈底物偏好性和高催化活性的突变体，分别为W170G，V198L，M197F和F202M。为了探究这4个突变的协同关系，又围绕这4个突变体构建了6个双组合突变体以及4个三组合突变体。通过组合突变，获得了协同增强突变体V198L/W170G，该突变体对芳香腈具有显著的底物偏好性，并且具有更好的催化效率。与野生型相比，其对4种芳香腈底物的比酶活分别提高了11.10、12.10、26.25和2.55倍。
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公开(公告)号：CN114891665B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210413478.1
申请日：2022-04-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/20 , C12N9/24 , C12N15/56 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/02 , C12P19/14 , C12R1/01 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种海藻糖酶、重组菌及其在酵母制品水解中的应用，本发明的杓兰果胶杆菌，保藏编号为CGMCC No.17442。本发明首次报道了一种产海藻糖酶的杓兰果胶杆菌，海藻糖酶酶活为19U/mL。将该海藻糖酶基因在大肠杆菌体系中异源表达，重组菌在5 L罐发酵28 h达到最高酶活2150 U/mL。重组蛋白PCTre的最适反应温度和pH分别为35°C和5.5，在25‑55°C、pH 5‑8.5条件下均有较好的稳定性，对有机溶剂耐受性好，在10%乙醇溶液中16 h仍能保留70%的酶活。该海藻糖酶水解酵母粉中海藻糖，可在20 min内完全水解，体系中可利用糖比率从1.45%增加到10.31%。
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公开(公告)号：CN113528493B
公开(公告)日：2022-11-25
申请号：CN202110592639.3
申请日：2021-05-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明的突变体为A165E、Q170T、N292F、L190Q、H92N和S171G，上述突变体在较好的保持催化活性的基础上使热稳定性获得不同程度提升，其中Q170T突变体具有最优热稳定性，在60℃的半衰期由野生型的17.3min提升到38.5min。六个位点组合突变体的半衰期显著改善至66.1min，最适反应温度由40℃提高至60℃。突变体的催化活性和热稳定性均较好，较野生型角蛋白酶更具应用价值和潜力。并且基于计算机辅助分析的蛋白质热稳定性提升方法可以成为工业酶热稳定性改造的通用途径。
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公开(公告)号：CN111763677B
公开(公告)日：2022-10-04
申请号：CN202010700360.8
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶异源表达的启动子，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN111662908B
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202010698996.3
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/54
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶高效异源表达的方法，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114574469A
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202210298614.7
申请日：2022-03-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于定向进化改造的角蛋白酶突变体及其应用，本发明提供了一种基于易错PCR技术，定向进化获得高酶活突变体的方法。本发明共获得了9个酶活提高的突变体，其中突变体T8(R72S/F107Y/N291S/N295D)的酶活水平最高，为2382U/mL，是对照菌酶活的2.1倍。采用培养基组分优化及7L发酵罐扩大培养的发酵研究策略，实现了突变菌产酶量的提升，角蛋白酶活力可达8448U/mL，本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效的策略。采用角蛋白酶与胰蛋白酶复配降解角蛋白废弃物，探究酶解法的最佳条件，为实际生产中高效利用羽毛、提高蛋白利用率提供了理论基础。
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公开(公告)号：CN111662908A
公开(公告)日：2020-09-15
申请号：CN202010698996.3
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/54
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶高效异源表达的方法，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN108060170B
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN201711468398.1
申请日：2017-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明为一种新型金属离子耐受性角蛋白酶及其应用，提供了一种基于宏基因组技术挖掘的角蛋白酶及其应用方法，属于工业生物技术领域。该角蛋白酶基因全长1,149bp，编码382个氨基酸；以枯草芽孢杆菌B.subtilis WB600为例，成功实现了该角蛋白酶基因的异源表达。该角蛋白酶基因的获取方法方便可行，将该基因进行重组表达，构建的重组菌株可以实现重组角蛋白酶的分泌表达，重组角蛋白酶对金属离子和表面活性剂表现出较好的耐受性，酶稳定性较好。重组菌发酵周期短，适合于工业化大规模的生产。另外，该酶具有良好的还原能力，能应用于生物法制备纳米银粒子的研究中，制备得到的纳米银粒子具有良好的形态，并且具有较好的抑菌活性。
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公开(公告)号：CN109593746A
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201910068548.2
申请日：2019-01-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化性能提高的角蛋白酶突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了一株基于前导肽工程和多位点饱和突变构建的重组角蛋白酶及前导肽工程改造的方法。重组菌株M7表现出高角蛋白酶催化潜力，酶活从179U/mL显著改善至1114U/mL，最适反应温度为40℃，最适反应pH为10.0，在40℃水浴90min后仍保留超过80％的酶活，热稳定性较好，适合于工业化大规模生产。并且利用前导肽工程改造蛋白酶的方法可以成为修饰具有自剪切特性的工业酶的通用途径。
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公开(公告)号：CN109022438A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810933416.7
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶异源表达的启动子及其应用，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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