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公开(公告)号：CN116004546A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202211720620.3
申请日：2022-12-30
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/50
Abstract: 本发明属于生物医药工程技术领域，公开了一种稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白CHO细胞系的构建。所述构建方法为：在PEDV的S1基因序列起始密码子ATG之前添加Kozac序列，在序列N端设计小鼠IgGκ链信号肽序列，在肽链C端设计1个Strep标签，并以柔性Linker与目的蛋白相连接，得到改造后的序列，然后克隆至慢病毒包装载体，转染至293T细胞培养，收获慢病毒包装病毒液加入到CHO细胞中进行筛选培养，得到稳定表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白CHO细胞系。本发明所得CHO单克隆细胞株连续传20代后仍能表达PEDVS1重组蛋白，且重组蛋白的回收率和纯度显著提高。
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公开(公告)号：CN115612696A
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202210770868.4
申请日：2022-06-30
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明公开了一种PRRSV基因组全长cDNA全长质粒、PRRS病毒及其构建方法和应用，属于生物技术领域，以PBR322作为基础载体，包括PRRSV基因组全长cDNA序列和CMV启动子序列，bGH poly(A)signal序列，CMV启动子序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的上游，bGH poly(A)signal序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的下游，PRRSV基因组全长cDNA全长质粒为pBR322‑CMV‑rJXA1R，其序列如如SEQ ID No.1所示。该PRRSV基因组全长cDNA全长质粒保真度高，构建便捷效率高。
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公开(公告)号：CN112680477B
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202011629470.6
申请日：2020-12-30
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于生物领域，公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法，包括如下步骤：步骤1：提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA，并根据RNA获得病毒的cDNA；步骤2：以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物；步骤3：将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段；步骤4：将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒；步骤5：将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞，得到重组的H9N2病毒；其中，8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：17所示。该方法的优势在于：操作简单、重组精确、拯救效率高。
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公开(公告)号：CN110592108B
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN201910894754.9
申请日：2019-09-20
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK‑21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；NP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1‑1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925‑3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166‑15192nt。该方法可以成功的克隆出于原病毒株完全相同、无突变的重组病毒。
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公开(公告)号：CN110951767A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911379403.0
申请日：2019-12-27
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种具有高拷贝能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体，所述表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。通过在pXMJ19载体的棒状杆菌复制子调节部位，将第1786位点的核苷酸C进行人工突变，成功获得比pXMJ19质粒拷贝能力高约12.5倍的棒状杆菌/大肠杆菌双用载体pXMJ19C1786T质粒。pXMJ19质粒在棒状杆菌的拷贝数约为20，pXMJ19C1786T质粒在棒状杆菌的拷贝数为251。同时，本发明还公开了该表达质粒的构建方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110317830A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910315101.0
申请日：2019-04-18
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N15/85 , A61K39/235 , A61P31/20
Abstract: 本发明一种鸭腺病毒2型DNA疫苗及其制备方法和应用，属于免疫学技术领域。所述制备方法包括：合成如SEQ ID NO.3所示的DAV-hexon序列；构建pcDNA3.1-DAV-hexon质粒；pcDNA3.1-DAV-hexon质粒转染293T细胞，在293T细胞中表达得到hexon蛋白即鸭腺病毒2型DNA疫苗。所述鸭腺病毒2型DNA疫苗由上述制备方法制得。所述鸭腺病毒2型DNA疫苗在制备预防鸭腺病毒2型疫病疫苗中的应用。本发明具有以下优点：SEQ ID NO.3所示的DAV-hexon序列有利于抗原蛋白的表达；更能提高hexon的表达量；可对番鸭提供80％-90％的攻毒保护。
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公开(公告)号：CN110317778A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910551879.1
申请日：2019-06-25
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N5/0735 , C12N5/02
Abstract: 本发明属于培养基领域，具体为一种EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，添加剂A中各物质在所述培养基中浓度为：胰岛素1-10mg/L；IGF-1 5-10μg/L；腐胺0.5-2mg；谷胱甘肽0.5-5mg/L；乙醇胺1-5mg/L；β-巯基乙醇10-50μM；卵磷脂1-5mg/L；维生素C 10-50mg/L；牛磺酸50-100mg/L；胆固醇2-5mg/L；谷氨酰胺3-6mM；每1L培养基中所述氨基酸混合组分添加量为1000mg-3000mg。该培养基支持EB66细胞在无血清、全悬浮的条件下快速增殖，倍增时间短。细胞呈现较高密度，同时，本发明还提供该培养基的制备方法。
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公开(公告)号：CN110283846A
公开(公告)日：2019-09-27
申请号：CN201910314515.1
申请日：2019-04-18
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N15/85 , C07K14/075 , A61K39/235 , A61P31/20
Abstract: 本发明一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白及其制备方法和应用，属于免疫学领域。所述制备方法，包括下述步骤：化学合成SEQ ID NO.1所示五邻体基因序列；制备重组pFastBac-1-penton载体；用制备的重组pFastBac-1-penton载体转染sf9细胞，在sf9细胞表达得到重组蛋白；对得到的重组蛋白经Ni-NTA纯化后得到纯化的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白。所述血清4型禽腺病毒五邻体蛋白由上述制备方法制得。所述的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白在制备预防禽腺病毒疫苗中的应用。本发明具有以下优点：基因合成无需模板，更经济、简便；更能提高penton的表达量；易于工业化规模生产。
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公开(公告)号：CN108159412A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201810030757.3
申请日：2018-01-12
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
CPC classification number: A61K39/12 , A61K39/39 , A61K2039/5252 , A61K2039/55511 , A61K2039/70 , C12N7/00 , C12N2760/16151 , C12N2760/18151
Abstract: 本发明公开一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品，该方法包括以下步骤：用EB66传代细胞分别接种鸡新城疫、禽流感病毒株，在病毒EID50效价达到最高时收获病毒并保存；分别灭活鸡新城疫和禽流感病毒；将灭活后的鸡新城疫和禽流感病毒在吐温‑80中完全混合，得到病毒混合液；在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化配制成二联疫苗。本发明通过采用鸭胚胎干细胞EB66传代细胞系分别进行鸡新城疫和禽流感病毒的培养，然后制备成的二联疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。
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公开(公告)号：CN116444654A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310268334.6
申请日：2023-03-20
Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C07K16/08 , C12N15/70 , C12N5/20 , C07K14/01 , G01N33/569 , G01N33/577 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体及制备方法和应用。本发明采用重组质粒pET28b‑p72进行表达纯化后得到p72蛋白免疫小鼠，选择血清抗体效价最高的小鼠进行腹腔注射p72蛋白加强免疫，然后取加强免疫后小鼠脾细胞与sp2/0细胞进行融合，筛选出分泌抗p72抗体的阳性杂交瘤细胞，对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆，得到抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体细胞株。本发明利用原核表达系统表达ASFV p72蛋白，成功制备了能稳定分泌与ASFVp72蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株，该抗体纯度高、亲和性和特异性强。
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