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公开(公告)号：CN103361339A
公开(公告)日：2013-10-23
申请号：CN201310326924.6
申请日：2013-07-30
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种提取丝状真菌基因组DNA的方法及试剂盒和遗传转化子的快速筛选方法，该试剂盒包括电动研磨器、溶液A(裂解液)、溶液B（DNA结合液）、溶液C（DNA洗涤液）、溶液D（DNA洗脱液）和DNA吸附柱。该发明的丝状真菌基因组DNA提取方法，耗时短（30min以内），提取的基因组质量高，不会用到有毒的试剂苯酚、氯仿，能很好的满足后续的实验。本发明快速筛选丝状真菌遗传转化子的方法克服了传统转化子筛选方法耗时、耗力、筛选效率低等缺点，特别适合大规模筛选遗传转化子。
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公开(公告)号：CN102952815A
公开(公告)日：2013-03-06
申请号：CN201210029597.3
申请日：2012-02-10
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了利用转谷氨酰胺酶酶原生产微生物转谷氨酰胺酶的方法，包括如下步骤：（1）茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因扩增，在酶原与成熟肽之间引入牛肠激酶的识别序列DDDDK；（2）基因克隆构建表达载体，转化大肠杆菌E.coliBL21（DE3）为工程菌E.coliBL21/proMTG，菌株保藏号为CCTCCM208240；（3）可溶性诱导表达转谷氨酰胺酶酶原；（4）亲和层析纯化蛋白，获得转谷氨酰胺酶酶原；（5）采用牛肠激酶激活酶原为成熟的转谷氨酰胺酶。本发明获得的转谷氨酰胺酶生物活性高；简化了发酵生产工艺，可以特异性完整切除转谷氨酰胺酶酶原序列，不会因非特异性切割或长时间切割导致酶的降解。
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公开(公告)号：CN102586167A
公开(公告)日：2012-07-18
申请号：CN201210052578.2
申请日：2012-03-01
申请人： 华南理工大学 , 广州市澳键丰泽生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法，该重组菌株由以下步骤构建得到：(1)通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接，再将融合PCR扩增产物转化入枯草芽孢杆菌WB800，得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S；(2)PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因，然后将扩增产物转化入枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG。将枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG发酵、纯化，得到可溶性的转谷氨酰胺酶。本发明方法可以在发酵液上清中直接获得具有生物活性的转谷氨酰胺酶，省去了繁琐的细胞破碎、纯化后激活酶原等过程，简化了发酵生产工艺。
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公开(公告)号：CN101691560A
公开(公告)日：2010-04-07
申请号：CN200810220160.1
申请日：2008-12-19
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法，该方法包括如下几个步骤：(1)根据茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因的核苷酸序列，设计PCR引物进行PCR扩增，克隆到原核表达载体pET22b(+)中，构建表达载体pET22b-proMTG，转化为大肠杆菌E.coli BL21/proMTG，该菌株保藏号为CCTCC M 208240；(2)可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原；(3)转谷氨酰胺酶酶原的激活；(4)高密度发酵；(5)蛋白纯化工艺。本发明方法的转谷氨酰胺酶产量及比活力达到直接在大肠杆菌中表达形成包涵体并经变性及复性生产该酶的水平，而且发酵生产工艺更简单。
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公开(公告)号：CN113957071A
公开(公告)日：2022-01-21
申请号：CN202111161871.8
申请日：2021-09-30
申请人： 华南理工大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
摘要： 本发明公开一种具有双重启动子和双重分泌信号功能的组合DNA片段及其应用，属于基因工程技术领域。本发明采用双启动子双信号肽Pcd‑P43‑SamyQ‑SBsGGT表达系统在枯草芽孢杆菌中合成γ‑谷氨酰胺转肽酶，其效果显著较双启动子单信号肽Pcd‑P43‑SamyQ表达系统的单位酶活力提高至161.45％，而Pcd‑P43‑SBsGGT‑SamyQ表达效果微弱。不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件；不仅能够简化生产工艺流程，降低生产成本，同时能使制备的蛋白酶产品达到符合食品安全级别酶制剂的要求。
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公开(公告)号：CN110106157B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201910306109.0
申请日：2019-04-17
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种经优化的能在黑曲霉中高效表达的高温海藻糖酶MS‑Tre及其编码基因与应用。经优化的高温海藻糖酶MS‑Tre，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明经优化的高温海藻糖酶MS‑Tre编码基因与优化前的编码基因相比，可以在黑曲霉中更高效表达，重组黑曲霉菌株可以高产海藻糖酶。本发明提供的海藻糖酶稳定性好，在高温条件下也能将二糖水解成单糖，降低淀粉液化后的冷却耗能和提高淀粉质原料的利用率，提高生物能源的利用效率，降低生产成本，本发明提供的海藻糖酶MS‑Tre及其编码基因对实现海藻糖酶工业化生产具有一定的现实意义和应用价值。
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公开(公告)号：CN106947766B
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN201710235662.0
申请日：2017-04-12
申请人： 华南理工大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。本发明的DNA片段具有启动子的功能，同时具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，可将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达分泌系统提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN105969675B
公开(公告)日：2019-11-15
申请号：CN201610308960.3
申请日：2016-05-10
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种低转苷酶背景的糖化酶高产菌基因敲除重组菌及其构建与应用，属于生物技术领域。本发明的重组菌是通过失活α‑葡萄糖转苷酶表达相关的一个或多个基因后得到的。本发明的实验证明，本发明通过对一株高产糖化酶的黑曲霉pyrG缺陷型Aspergillus niger SH‑2:ΔpyrG进行基因工程改造，失活基因agdB、agdA和agdE后，得到低转苷酶活性的新菌株，利用该菌株发酵生产的糖化酶与原始菌株相比，糖化酶酶活增加33％，α‑葡萄糖转苷酶酶活降低43％以上，简化了从发酵液中去除转苷酶的分离纯化工艺，降低了生产成本，具有一定的创新性，有较强的开发意义。
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公开(公告)号：CN106085937B
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201610429216.9
申请日：2016-06-15
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌重组菌株及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明所提供的重组菌株是将枯草芽孢杆菌中的十个蛋白酶基因敲除或失活得到，这十个蛋白酶基因为：nprE、nprB、aprE、mpr、bpf、epr、vpr、wprA、spollAC和srfAC。本发明通过同源重组方法进行前述10个蛋白酶基因的敲除，得到的枯草芽孢杆菌重组菌株生长快、且外源蛋白表达量高。因此，该重组菌株可作为外源蛋白高效表达的宿主。
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