一种腈水解酶重组表达菌株的构建及其高密度发酵方法

    公开(公告)号:CN107267433B

    公开(公告)日:2020-05-22

    申请号:CN201710580770.1

    申请日:2017-07-17

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明涉及一种腈水解酶组成型表达体系的构建及其在烟酸合成中的应用,属于工业生物技术领域。所述的腈水解酶组成型表达载体是通过在pET‑3b质粒导入恶臭假单胞菌Pseudomonas putida腈水解酶基因编码序列构建而成,得到重组质粒pET‑3b‑NIT,转化至E.coli BL21(DE3)中得到无需进行体外诱导的组成型重组腈水解酶表达菌株,命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli NIT‑1,现保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC No.14254。进一步采用pH‑stat补料策略进行精确调控以提升菌体密度和腈水解酶产量,并以大肠埃希氏菌游离细胞为催化剂,以3‑氰基吡啶为底物,通过批次投料的方式进行连续转化生产烟酸。本发明提供了一种新的无需体外诱导的组成型重组腈水解酶产生菌,该重组菌可高效表达腈水解酶,生产成本低,周期短,发酵过程无需添加诱导剂,最终获得的菌体密度大,可有效催化3‑氰基吡啶生产烟酸,具有广阔的应用前景。

    热稳定性提升的角蛋白酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN107828765B

    公开(公告)日:2020-05-08

    申请号:CN201711058163.5

    申请日:2017-11-01

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N9/52

    摘要: 本发明公开了热稳定性提升的角蛋白酶突变体及其应用,属于工业生物技术领域。将来源于Brevibacillus parabrevis CGMCC No.10798的角蛋白酶第181位天冬酰胺、第218位酪氨酸、第236位丝氨酸进行定点突变改造,并对上述位点进行随机组合制备获得组合突变体。本发明实现了角蛋白酶热稳定性的1~4.09倍的显著提高,具有良好的理论价值和应用前景。

    一种食品级烟酸的分离提取方法

    公开(公告)号:CN106220557B

    公开(公告)日:2019-06-25

    申请号:CN201610579361.5

    申请日:2016-07-22

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C07D213/80 C07D213/803

    摘要: 本发明公开了一种基于生物转化的食品级烟酸分离提取方法,包括对转化液经陶瓷膜或板框过滤去除菌体,处理后的烟酸溶液经大孔树脂吸附、洗脱、浓缩、结晶、干燥,得到烟酸成品。一次结晶母液需回收以提高烟酸收率。该工艺操作简洁,节能环保,并可实现连续生产。烟提取总收率可达到90%以上,产品质量符合国家标准。

    一株海藻糖酶生产菌及其应用

    公开(公告)号:CN109439599A

    公开(公告)日:2019-03-08

    申请号:CN201811590020.3

    申请日:2018-12-25

    摘要: 本发明公开了一株海藻糖酶生产菌及其应用,属于工业微生物技术领域。本发明的大黄欧文菌C2,其特征在于,其分类学命名为大黄欧文菌Erwinia rhapontici,已于2018年11月21日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号CGMCC No.16760。本发明首次报道了一种产海藻糖酶的大黄欧文菌(Erwinia rhapontici),并对其酶学性质进行研究。该菌株所产海藻糖酶的最适温度和pH分别为40℃和pH5,在酸性条件下具有较高活性和稳定性,在乙醇工业中应用前景广阔。

    一种新型金属离子耐受性角蛋白酶及其应用

    公开(公告)号:CN108060170A

    公开(公告)日:2018-05-22

    申请号:CN201711468398.1

    申请日:2017-12-29

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明为一种新型金属离子耐受性角蛋白酶及其应用,提供了一种基于宏基因组技术挖掘的角蛋白酶及其应用方法,属于工业生物技术领域。该角蛋白酶基因全长1,149bp,编码382个氨基酸;以枯草芽孢杆菌B.subtilis WB600为例,成功实现了该角蛋白酶基因的异源表达。该角蛋白酶基因的获取方法方便可行,将该基因进行重组表达,构建的重组菌株可以实现重组角蛋白酶的分泌表达,重组角蛋白酶对金属离子和表面活性剂表现出较好的耐受性,酶稳定性较好。重组菌发酵周期短,适合于工业化大规模的生产。另外,该酶具有良好的还原能力,能应用于生物法制备纳米银粒子的研究中,制备得到的纳米银粒子具有良好的形态,并且具有较好的抑菌活性。

    一种腈水解酶产生菌突变体的复合固定化方法及其应用

    公开(公告)号:CN107460188A

    公开(公告)日:2017-12-12

    申请号:CN201710666240.9

    申请日:2017-08-07

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明的目的在于提供一种含腈水解酶的恶臭假单胞菌Pseudomonas putida突变体mut-D3的细胞复合固定化方法及其在烟酸制备中的应用。该突变体菌株现保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC No.14276。本发明具体是将海藻酸钠溶液与PVA(聚乙烯醇)按照一定比例混合,作为固定材料,再与制备好的菌悬液混合,滴入预冷的固化液中进行固定;获得的固定化细胞对高浓度底物耐受性大大增强,可应用于烟酸的高效转化合成,相比于游离细胞烟酸产量提高约2倍;本发明所提供的固定化方法操作简单、成本低、固定化细胞机械强度高、且可重复利用率高,为工业生产烟酸提供了有益的方法。

    一种腈水解酶重组表达菌株的构建及其高密度发酵方法

    公开(公告)号:CN107267433A

    公开(公告)日:2017-10-20

    申请号:CN201710580770.1

    申请日:2017-07-17

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明涉及一种腈水解酶组成型表达体系的构建及其在烟酸合成中的应用,属于工业生物技术领域。所述的腈水解酶组成型表达载体是通过在pET-3b质粒导入恶臭假单胞菌Pseudomonas putida腈水解酶基因编码序列构建而成,得到重组质粒pET-3b-NIT,转化至E.coli BL21(DE3)中得到无需进行体外诱导的组成型重组腈水解酶表达菌株,命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli NIT-1,现保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC No.14254。进一步采用pH-stat补料策略进行精确调控以提升菌体密度和腈水解酶产量,并以大肠埃希氏菌游离细胞为催化剂,以3-氰基吡啶为底物,通过批次投料的方式进行连续转化生产烟酸。本发明提供了一种新的无需体外诱导的组成型重组腈水解酶产生菌,该重组菌可高效表达腈水解酶,生产成本低,周期短,发酵过程无需添加诱导剂,最终获得的菌体密度大,可有效催化3-氰基吡啶生产烟酸,具有广阔的应用前景。

    一种磷脂酶D的基因挖掘及其应用方法

    公开(公告)号:CN107164397A

    公开(公告)日:2017-09-15

    申请号:CN201710292991.9

    申请日:2017-04-28

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明提供了一种基于基因挖掘方法获得的磷脂酶D及其基因编码序列与应用方法。该磷脂酶D基因全长1,614bp,编码538个氨基酸,以质粒pET28a(+)为表达载体,以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为表达宿主,实现了磷脂酶D的高效表达。该磷脂酶D基因的基因挖掘方法简易便捷,经挖掘获得的目标基因所构建的重组菌株经发酵诱导可以分泌磷脂酶D,该磷脂酶D的最适反应温度为60℃,最适反应pH为7.5,且Ca2+对其酶活具有较好的激活促进作用。该酶能对磷脂进行改性,催化底物磷脂酰胆碱和L‑丝氨酸合成磷脂酰丝氨酸,在食品、医药和保健行业具有良好的应用前景。