一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法

    公开(公告)号:CN113004377B

    公开(公告)日:2022-11-25

    申请号:CN202110165882.7

    申请日:2021-02-07

    发明人: 王鹏 肖聪 刘姣

    摘要: 本发明一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法,包括以下步骤,步骤S1:将新冠病毒重组蛋白包涵体溶解得到包涵体溶解产物;步骤S2:将所述包涵体溶解产物进行柱层析纯化,得到纯化新冠病毒重组蛋白;步骤S3:将纯化新冠病毒重组蛋白制备成新冠病毒重组蛋白溶液液,所述新冠病毒重组蛋白溶液中,蛋白质的浓度为0.6mg/ml~1.0mg/ml,含尿素的浓度为4mol/L~4.5mol/L;步骤S4:将所述新冠病毒重组蛋白溶液依次采用第一复性液及第二复性液进行梯度稀释复性,得到新冠病毒重组蛋白复性液;步骤S5:将所述新冠病毒重组蛋白复性液进行后处理即得复性蛋白产品;本发明的有益效果在于蛋白回收率高且利于工业化的生产。

    一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备及纯化方法

    公开(公告)号:CN112961202A

    公开(公告)日:2021-06-15

    申请号:CN202110278235.7

    申请日:2021-03-15

    摘要: 本发明属于药物合成技术领域,公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备及纯化方法,包括如下步骤:S1.提取纯化GM1:将动物脑组织提取制得纯化后的GM1;S2.GM1的水解:将步骤S1制得的纯化后的GM1经SCDase催化的水解反应,使纯化后的GM1鞘氨醇部分中的多羟基脂肪胺的脂肪酸模块水解去除,而后经纯化制得纯化后的Lyso‑GM1;S3.特定脂肪酸模块的GM1的合成:将步骤S2制得的纯化后的Lyso‑GM1和特定脂肪酸在SCDase催化条件下反应,合成后经纯化制得特定脂肪酸模块的GM1。本发明能够高效制备千克级规模的单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1),并对其进行再次分离纯化。

    一种用于合成mRNA的氘代加帽化合物及其制备方法

    公开(公告)号:CN118459524A

    公开(公告)日:2024-08-09

    申请号:CN202410480131.8

    申请日:2024-04-19

    IPC分类号: C07H21/02 C07H1/00

    摘要: 本发明公开了一种用于合成mRNA的氘代加帽化合物及其制备方法,涉及生物医药及化学技术领域。具有如下式(I)所示的结构通式:#imgabs0#其中,B选自天然或修饰的碱基;R1、R2、R3、R5相同或不同的选自氢、氘、卤素、烷基或氘代烷基,R4选自烷基或氘代烷基;且所述氘代加帽化合物中至少含有一个氘代烷基。本发明的氘代加帽化合物通过在腺苷的6位有烷基取代,帽结构中引入氘代甲基,使得该氘代加帽化合物在mRNA合成中具有明显的优势:蛋白表达量提升大于30%,纯度在90%以上的mRNA产量提升20%。

    果糖脱氢酶的发酵及补液培养基、发酵培养及纯化方法

    公开(公告)号:CN116814571A

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202310657706.4

    申请日:2023-06-02

    IPC分类号: C12N9/04 C12N1/20 C12R1/01

    摘要: 本发明公开了一种果糖脱氢酶的发酵及补液培养基、发酵培养及纯化方法,涉及果糖脱氢酶制备技术领域。其中,用于制备果糖脱氢酶的发酵培养基,包括如下成分:8‑12g/L甘油,10‑15g/L硫酸铵,0.5‑1.5g/L酵母粉,1‑3g/L磷酸二氢钾,1‑3g/L磷酸氢二钾,0.5‑1.5g/L七水硫酸镁,0.05‑0.1g/L氯化钙;用于制备果糖脱氢酶的补液培养基,包括如下成分:200600g/L甘油,50150g/L硫酸铵,1‑3g/L硫酸镁。本发明提供的一种果糖脱氢酶的发酵及补液培养基、发酵培养及纯化方法,优化了发酵培养基,增加了补料工艺,制备得到的菌体表达量可以达到50g/L;纯化过程中用洗涤剂TritonX‑114固液分离提取取代了成本投入较大的超滤离心,后续采取离子交换+分子筛层析得到酶活性高达480U/mg蛋白的酶。

    一种α-半乳糖抗原活性前体及其合成方法和应用

    公开(公告)号:CN111593080B

    公开(公告)日:2022-06-10

    申请号:CN202010408607.9

    申请日:2020-05-14

    摘要: 本发明提出了一种α‑半乳糖抗原活性前体及其合成方法和应用。本发明的合成方法包括以下步骤:在化合物I中加入尿苷二磷酸葡萄糖、可溶性镁盐和Tris‑HCl缓冲液,配制成水溶液;在水溶液中添加UDP‑葡萄糖‑4‑差向异构酶和α‑1,3‑半乳糖基转移酶,反应,得初产物;在初产物中添加β‑半乳糖苷酶,反应,得化合物II;将化合物II加氢反应,得化合物III;化合物III与方型酸二乙酯在室温下搅拌反应,浓缩,纯化,得α‑半乳糖抗原活性前体。本发明在糖基转移酶的作用下使糖链延长,通过化学反应转化为活性前体;该合成方法效率高,工艺流程短,操作简单,分离方便,产率高,易于实现产业化,可用于志贺样毒素检测试剂盒。

    一种化学酶法合成假尿苷的方法
    6.
    发明公开

    公开(公告)号:CN114196715A

    公开(公告)日:2022-03-18

    申请号:CN202111581013.9

    申请日:2021-12-22

    发明人: 肖聪 吴结缘

    IPC分类号: C12P19/38 C12N9/90 C12N15/61

    摘要: 本发明公开了一种化学酶法合成假尿苷的方法,将核糖‑5‑磷酸与假尿苷‑5‑磷酸糖苷酶突变体合成假尿苷单磷酸,再经去磷酸化、分离后得到假尿苷;所述假尿苷‑5‑磷酸糖苷酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过化学‑酶促反应合成假尿苷,通过简单的反应,以较低的成本实现假尿苷的大量生产,推进了假尿苷工业化合成的应用。

    一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法

    公开(公告)号:CN113004377A

    公开(公告)日:2021-06-22

    申请号:CN202110165882.7

    申请日:2021-02-07

    发明人: 王鹏 肖聪 刘姣

    摘要: 本发明一种新冠病毒重组蛋白包涵体的复性方法,包括以下步骤,步骤S1:将新冠病毒重组蛋白包涵体溶解得到包涵体溶解产物;步骤S2:将所述包涵体溶解产物进行柱层析纯化,得到纯化新冠病毒重组蛋白;步骤S3:将纯化新冠病毒重组蛋白制备成新冠病毒重组蛋白溶液液,所述新冠病毒重组蛋白溶液中,蛋白质的浓度为0.6mg/ml~1.0mg/ml,含尿素的浓度为4mol/L~4.5mol/L;步骤S4:将所述新冠病毒重组蛋白溶液依次采用第一复性液及第二复性液进行梯度稀释复性,得到新冠病毒重组蛋白复性液;步骤S5:将所述新冠病毒重组蛋白复性液进行后处理即得复性蛋白产品;本发明的有益效果在于蛋白回收率高且利于工业化的生产。

    糖核苷酸分离纯化方法

    公开(公告)号:CN112457355A

    公开(公告)日:2021-03-09

    申请号:CN202011312641.2

    申请日:2020-11-20

    发明人: 王鹏 杨广宇 肖聪

    IPC分类号: C07H1/06 C07H19/10 C12P19/30

    摘要: 本发明涉及一种糖核苷酸分离纯化方法,包括如下步骤:制备糖核苷酸样品,利用离子交换树脂柱层析和梯度洗脱所述糖核苷酸样品,得洗脱样品;采用卷式膜分离系统对所述洗脱样品脱盐,浓缩,即得。本发明糖核苷酸分离纯化方法将柱层析与卷式膜分离系统联合使用纯化糖核苷酸,不仅利用离子柱层析在工业纯化上的优势,同时再结合利用卷式膜分离系统处理柱层析纯化后的样品,整体上达到高效且高品质的优势。

    一种糖核苷酸类产品的制备方法
    10.
    发明公开

    公开(公告)号:CN116814721A

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202310649116.7

    申请日:2023-06-02

    摘要: 本发明公开了一种糖核苷酸类产品的制备方法,涉及生物药物技术领域。包括如下步骤:S1:将单糖、ATP、XTP、氯化镁溶解到水中,调节溶液pH值,再加入酶相应的激酶、合成酶、辅助酶进行反应,得到产物液1,所述XTP为UTP、GTP或CTP;S2:向产物液1中加入碱性磷酸酶,进行反应,得到产物液2,经微孔滤膜过滤后,采用蛋白膜包超滤除去蛋白残留,得到产物液3;S3:将产物液3通过C18层析柱进行纯化,得到产物液4;S4:将产物液4经过旋蒸浓缩后,通过离子色谱填料层析柱进行纯化,得到产物液5;S5:将产物液5采用卷式膜分离系统进行除盐处理,最后浓缩冻干,得到糖核苷酸类固体产品。本发明产品收率高,生产成本低,操作简便,产品纯度可达98%以上。