一种软骨器官芯片的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN118421553A

    公开(公告)日:2024-08-02

    申请号:CN202410558500.0

    申请日:2024-05-08

    Abstract: 本申请涉及生物医学技术领域,尤其涉及一种软骨器官芯片的构建方法及应用。诱导细胞炎症,通过半透膜的物质交换使底部物质进入细胞培养小室;包括下述步骤:S1:将GelMA‑60与软骨细胞的细胞悬液加入细胞培养小室中,并用紫外灯进行固化;S2:在底部以0.5ml/min的流速灌流含有IL‑1β的D/F12培养基;S3:通过活死染对细胞的生存情况进行表征;S4:通过免疫组化、免疫荧光和分子生物学对IL‑1β诱导的炎症进行表征;所述步骤S1的GelMA‑60溶解在PBS,且浓度为10%。所述步骤S2的流速和方向不会使水凝胶冲起来,造成水凝胶的脱落。所述步骤S3的活死染能够清楚的观察到细胞的存活情况。所述步骤S4的免疫组化和分子生物学实验能有效鉴定炎症是否诱导成功。

    修饰化过表达WIF1成骨细胞来源的细胞外囊泡的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN118048405A

    公开(公告)日:2024-05-17

    申请号:CN202410224040.8

    申请日:2024-02-29

    Abstract: 本申请涉及生物医学技术领域,本申请提出一种修饰化过表达WIF1成骨细胞来源的细胞外囊泡的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:S1:将过表达WIF1的病毒转染入MC3T3‑E1细胞系中,稳定过表达WIF1后,放入成骨分化诱导培养基中分别培养3天获得过表达WIF1成骨细胞;S2:通过差速超速离心法获得过表达WIF1成骨细胞来源的细胞外囊泡;S3:将骨靶向肽与细胞外囊泡以1:9的比例混合制备修饰化过表达WIF1成骨细胞来源细胞外囊泡。1、本发明中,过表达WIF1成骨细胞的构建,使得过表达WIF1成骨细胞能稳定获取;成功转染效率及诱导分化率超过70%;2、本发明中,在细胞外囊泡表面骨靶向多肽的修饰,提高细胞外囊泡在体内的靶向特异性以及循环时间;3、本发明提供的修饰化过表达WIF1成骨细胞来源的细胞外囊泡应用于OVX小鼠上,能够促进骨形成,使得骨质疏松的症状得到改善。

    一种PEG-PLGA负载TRPA1的胶束合成的制备方法

    公开(公告)号:CN118319855A

    公开(公告)日:2024-07-12

    申请号:CN202410487094.3

    申请日:2024-04-23

    Abstract: 本申请涉及生物医学技术领域,具体涉及一种PEG‑PLGA负载TRPA1的胶束合成的制备方法,包括下述步骤:S1:将抑制剂缓慢滴入PEG‑PLGA丙酮溶液中;S2:使用冰浴超声仪对混合溶液进行冰浴超声;S3:对冰浴超声后的溶液进行透析;S4:通过激光笔照射、TEM和SEM对胶束进行表征。本发明中,本发明通过PEG‑PLGA将负载HC‑030031,从分子生物学层面以及物理化学层面分析胶束的异质性。应用半月板切除手术建立小鼠骨关节炎模型,将负载HC‑030031的PEG‑PLGA胶束通过关节腔注射的方式借助胶束自身粒径小的特点穿透软骨面,进入软骨内,通过免疫组织化学的方法观察是否影响骨关节炎的病理结构,证实制备的胶束能成功包载和缓释HC‑030031,并对骨关节炎的进展起抑制作用。

    基于成骨细胞亚群来源的细胞外囊泡的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN118126939A

    公开(公告)日:2024-06-04

    申请号:CN202410224018.3

    申请日:2024-02-29

    Abstract: 本申请涉及生物医学技术领域,具体地本申请提供基于成骨细胞亚群来源的细胞外囊泡的制备及其应用,包括下述步骤:S1:将BMSC细胞系放入成骨分化诱导培养基中分别培养1天、5天、9天获得三种成骨细胞亚型EnOBs、StOBs、MinOBs;S2:通过差速超速离心法获得三种成骨细胞亚型来源的细胞外囊泡;S3:通过EDX分析和TEM对三种细胞外囊泡进行体外鉴定表征;S4:通过miRNA测序技术对三种细胞外囊泡进行分析发现差异表达的miRNA影响三种细胞外囊泡的异质性。步骤S1中的三种成骨细胞亚型分化诱导的时间点特定,分别为换成骨分化诱导培养基后1天、5天、9天获得三种成骨细胞亚型。

    一种PDPN+CAF及其在结直肠癌临床诊疗中的应用

    公开(公告)号:CN118480501A

    公开(公告)日:2024-08-13

    申请号:CN202410558091.4

    申请日:2024-05-08

    Abstract: 本申请涉及生物医学技术领域,尤其涉及一种PDPN+CAF及其在结直肠癌临床诊疗中的应用。PDPN高表达,具有促血管生成功能。所述的CAF命名为PDPN+CAF。所述CAF的检测方法,包括以下步骤:S1:验证PDPN+CAF在结直肠癌CAF中PDPN存在差异表达;S2:验证PDPN+CAF在结直肠癌中发挥的功能。在步骤S1中,验证不同结直肠癌CAF中PDPN的表达存在差异,通过Western blot及RT‑qPCR验证,不同结直肠癌CAF(CAF62、CAF804、CAF95和CAF540)中,CAF95和CAF540的PDPN表达显著高于CAF62、CAF804,这类CAF为PDPN+CAF。在步骤S2中,所述的PDPN+CAF在结直肠癌中发挥促血管生成作用,其能够促进人脐静脉内皮细胞的血管形成,迁移和黏附作用,促进结直肠癌血管生成和肿瘤转移。

    靶向CAF中的TRPA1及其在结肠癌治疗中的应用

    公开(公告)号:CN118256624A

    公开(公告)日:2024-06-28

    申请号:CN202410501294.X

    申请日:2024-04-25

    Abstract: 本申请涉及生物医学技术领域,具体涉及靶向CAF中的TRPA1及其在结肠癌治疗中的应用,TRPA1高表达,具有促结肠癌发生转移的功能,所述的CAF命名为TRPA1CAF。所述CAF的检测方法包括下列步骤:S1:验证并筛选TRPA1CAF;针对TRPA1基因设计引物,与正常成纤维细胞进行对照,针对不同CAF进行RT‑qPCR,验证CAF中的TRPA1基因表达是否上升,并筛选出高表达TRPA1的CAF,并通过Western Blot验证结论;S2:构建TPRA1敲减CAF细胞系;S3:CAF中的TRPA1对结肠癌细胞转移的作用研究;S4:构建TRPA1基因敲除鼠,进行脾注射肝转移实验。本发明CAF促癌症转移的特异性标志物对于结直肠癌肿瘤癌症转移,进而促进转移的研究具有重要意义。本发明CAF促癌症转移的特异性标志物基于多种技术方法,从分子、细胞、动物及生物信息学等层面揭示TRPA1+CAF促进结直肠癌癌症转移的功能作用,最终为转移性结肠癌的治疗提供新的诊断及治疗靶点。

    基于单细胞测序鉴定软骨下骨组织中成骨细胞亚群的方法

    公开(公告)号:CN116949150A

    公开(公告)日:2023-10-27

    申请号:CN202210388218.3

    申请日:2022-04-13

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明属于生物医学技术领域,涉及鉴定软骨下骨组织中细胞亚群的方法,具体涉及一种基于单细胞测序鉴定软骨下骨中成骨细胞亚群的方法和应用。本发明采用单细胞RNA测序技术,基于10×genomics测序平台获得测序数据,随后采用基因表达定量、基因表达矩阵分析、seurat聚类分析等生物信息学分析方法获得软骨下骨中成骨细胞的分布状态、亚群组成,通过比较差异基因表达情况实现对软骨下骨组织中成骨细胞亚群的鉴定。进一步本发明鉴定的三个成骨细胞亚群可用于制备干预治疗骨关节炎相关生物材料。

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