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公开(公告)号：CN113999888A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111544235.3
申请日：2021-12-16
IPC分类号： C12Q1/24
摘要： 本发明公开了一种食源性致病菌洗脱方法，步骤为：1)配制洗脱液；2)洗脱液与样品按比例混合，放入无菌容器中孵育，收集洗脱溶液，洗脱液采用Tris·HCl缓冲溶液作为基础缓冲液，并通过加入蛋白胨、NaCl、纤维素酶、表面活性剂吐温20，增加拍打式均质机拍打，提高洗脱效率，本发明无需采取耗时的培养增菌方法，通过简单的操作让即食蔬菜污染到的食源性致病菌尽可能被洗脱下来，配合后续的检测方法，实现了食源性致病菌快速检测。
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公开(公告)号：CN114164286A
公开(公告)日：2022-03-11
申请号：CN202111505493.0
申请日：2021-12-10
申请人： 上海交通大学
摘要： 本发明公开了一种检测沙门氏菌的多重液滴数字PCR试剂盒及其方法和应用，涉及微生物检测技术领域，试剂盒包含液滴数字PCR反应液和质控品，液滴数字PCR反应液中含有用于检测肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌核酸的引物和探针，探针的两端标记有荧光基团。本发明的试剂盒及检测方法有效的提高了检测的灵敏度，抗干扰性强，减少了检测的假阴性率，且与大肠杆菌、阪崎肠杆菌等均无交叉反应，检测特异性高，减少了检测的假阳性率。
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公开(公告)号：CN114107530A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111534388.X
申请日：2021-12-15
申请人： 上海交通大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/42
摘要： 本发明公开了一种针对生菜中沙门氏菌的液滴数字PCR检测方法及试剂盒，涉及食品安全检测技术领域，主要步骤包括对生菜样品中的沙门氏菌进行洗脱，提取洗脱悬浮液中DNA，设计合成沙门氏菌PCR扩增引物和探针，进行液滴PCR扩增反应，将扩增后的数字PCR芯片置于荧光读取仪中进行结果读取和分析，本发明具备了灵敏度高、特异性好和精确性高的优点，可以检测5fg/μL的DNA和102CFU/25mL的菌液。
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公开(公告)号：CN113981118A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111551734.5
申请日：2021-12-17
申请人： 上海交通大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/42
摘要： 本发明涉及食品安全检测领域，公开了RPA‑LFD法快速检测沙门氏菌的引物对、方法、试剂盒及其应用。引物对为InvA‑F、InvA‑R，Stm‑F、Stm‑R，Sen‑F、Sen‑R；检测方法为提取样本总DNA，使用上述引物对进行RPA扩增反应和参数优化，应用靶标侧流层析试纸条进行检测，根据条带判读样品中是否含有沙门氏菌及其鼠伤寒、肠炎等血清型，整个检测过程可以在1小时内完成；试剂盒包括无菌双蒸水、缓冲液、标准阳性DNA、靶标侧流层析试纸条和产物稀释液。本发明包括检测沙门氏菌的引物对、方法和试剂盒，具有特异性强、简便、快速等特点，可用于沙门氏菌及其鼠伤寒和肠炎血清型的快速精准检测。
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公开(公告)号：CN104059977A
公开(公告)日：2014-09-24
申请号：CN201410293102.7
申请日：2014-06-25
申请人： 上海交通大学
CPC分类号： C12Q1/6809 , C12Q2531/113 , C12Q2525/151
摘要： 本发明提供一种沙门氏菌血清型鉴定方法，包括：1)提取待测样品中的DNA；2)将步骤1)获得的DNA作为模板，进行PCR检测，其中，PCR检测靶标为沙门氏菌CRISPR1和CRISPR2；3)将步骤2)中的PCR产物进行序列测定；4)借助在线免费软件CRISPRfinder，寻找对应CRISPR的前三个间隔序列，并与各血清型标准间隔序列进行同源比对；5)比对结果的判断，可同时鉴定23种沙门氏菌常见血清型。本发明还提供了一种沙门氏菌血清型的鉴定试剂盒，所述试剂盒包括用于扩增沙门氏菌CRISPR1和CRISPR2的引物，并提供23种沙门氏菌常见血清型的标准间隔序列表。
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公开(公告)号：CN106244722A
公开(公告)日：2016-12-21
申请号：CN201610891572.2
申请日：2016-10-12
申请人： 上海交通大学
CPC分类号： C12Q1/689
摘要： 本发明公开一种可用于沙门氏菌及其血清型检测的引物、利用该引物检测沙门氏菌及血清型的方法及其试剂盒。通过该引物及检测方法能快速一体的对沙门氏菌及沙门氏菌血清型进行分型检测。本发明所述沙门氏菌及血清型的一体检测方法，具有检测方法快速、有效、低成本、操作简单、灵敏度高等优点，为沙门氏菌及其血清型的一体检测提供了新的技术平台，可用于畜牧业生产单位、基层医疗卫生单位和各疾病预防控制中心筛查和检测沙门氏菌及其血清型，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益，适于大范围推广应用。
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公开(公告)号：CN104437440B
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201410647601.1
申请日：2014-11-14
申请人： 上海交通大学
IPC分类号： B01J20/281 , B01J20/28 , B01J20/30 , C12N15/10
摘要： 本发明公开了一种多氨基硅包磁性纳米粒子的制备方法与应用，以磁性纳米粒子为核心，用反相微乳液法对磁性核心进行包硅与氨基化修饰，在氨水催化作用下，水解TEOS和APTES，包被硅层的同时表面形成粗糙的网状结构，此结构表面携带大量的氨基基团，即为多氨基硅包磁性纳米粒子，可以用于非特异性以及特异性的DNA分离。本发明制备的多氨基硅包磁性纳米粒子原料成本低，制备方法操作简易、时间短，产物无毒，环境友好；与传统的先合成硅包磁性纳米粒子再氨基化制备的氨基硅包磁性纳米粒子相比，表面氨基数量极大提高，对DNA的分离率也大为提高。
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公开(公告)号：CN104059977B
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201410293102.7
申请日：2014-06-25
申请人： 上海交通大学
摘要： 本发明提供一种沙门氏菌血清型鉴定方法，包括：1)提取待测样品中的DNA；2)将步骤1)获得的DNA作为模板，进行PCR检测，其中，PCR检测靶标为沙门氏菌CRISPR1和CRISPR2；3)将步骤2)中的PCR产物进行序列测定；4)借助在线免费软件CRISPRfinder，寻找对应CRISPR的前三个间隔序列，并与各血清型标准间隔序列进行同源比对；5)比对结果的判断，可同时鉴定23种沙门氏菌常见血清型。本发明还提供了一种沙门氏菌血清型的鉴定试剂盒，所述试剂盒包括用于扩增沙门氏菌CRISPR1和CRISPR2的引物，并提供23种沙门氏菌常见血清型的标准间隔序列表。
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公开(公告)号：CN105255931A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510679849.0
申请日：2015-10-19
摘要： 本发明公开了制备基于细菌表面展示系统的病毒受体捕获体系的方法，包括以下步骤：将病毒的衣壳蛋白编码基因片段与编码冰核蛋白N端结构域的编码基因片段融合并插入诱导型原核表达质粒中，将得到重组诱导型表达质粒转化入宿主菌，获得病毒的衣壳蛋白的细菌表面展示系统；通过诱导使病毒的衣壳蛋白展示在所述细菌的表面，获得病毒的病毒受体捕获体系。该方法制备的病毒受体不厚体系免去了纯化病毒衣壳蛋白的繁杂步骤，大大降低了获取病毒衣壳蛋白的成本，且大幅缩短病毒衣壳与病毒受体复合物的回收周期，也更容易分离环境中相应的病毒受体，具有节约、环保的有益效果。该体系可用于探索病毒新受体或分析、鉴定病毒受体的组分和结构等用途。
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公开(公告)号：CN103160577A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201310046266.5
申请日：2013-02-05
申请人： 上海交通大学
摘要： 本发明涉及食品安全领域，一种基于非标记的氨基化纳米磁珠捕获痕量基因组脱氧核糖核酸（DNA）结合聚合酶链式反应（PCR）快速检测食品中致病菌的方法。现有技术的缺点是：国标培养方法需要增菌，检测时间长；免疫检测方法需要高质量的抗体，且一种抗体只对应一种致病菌；单纯的PCR检测技术也需要前增菌，检测时间长。本发明方法为：制备适合于加入PCR体系中的氨基磁珠，捕获经过简单处理的食品样品中的DNA，最终结合物直接进行PCR检测。本发明的优点是：检测快速；价格低廉；灵敏度高；可针对不同致病菌检测，且可同时检测多种致病菌；可做半定量检测或定量检测。
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