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公开(公告)号：CN118126133A
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202410335172.8
申请日：2024-03-22
Applicant: 上海应用技术大学 , 上海沪溶生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供了提高青霉素G酰化酶活性表达的信号肽、重组菌株及其构建方法与应用。本发明通过计算筛选和实验验证，发现了能促进青霉素酰化酶在pET载体上高活性表达的新型信号肽序列，在将其替换青霉素酰化酶原始信号肽的基础上，构建了含新型信号肽的青霉素酰化酶基因工程菌，在此基础上建立了该基因工程菌高活性表达PGA的培养基组分和培养条件。在此条件下，菌种产酶活性超过了10000U/L，较原始菌株提高了37余倍。本发明获得较高的青霉素酰化酶活性表达，为后续的大规模生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116949073A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310930033.5
申请日：2023-07-27
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种假单胞菌水解脱卤酶的编码基因、表达所述假单胞菌水解脱卤酶的重组表达载体、表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌、基因工程菌的发酵培养方法和利用表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌制备法匹拉韦中间体的方法。假单胞菌水解脱卤酶基因序列如SEQ ID NO.1所示。与现有技术相比，本发明首次利用假单胞菌水解脱卤酶催化制备法匹拉韦中间体，并使假单胞菌水解脱卤酶基因能够在工程菌中实现高效表达。在优选条件下酶活性可以达到214.5U/L，催化制备法匹拉韦中间体效率高，底物转化率可达97.2％，具有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113943746A
公开(公告)日：2022-01-18
申请号：CN202111269631.X
申请日：2021-10-29
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种腈水合酶基因表达的基因工程菌，具体涉及一种重组表达载体、基因工程菌及菌的培养方法和应用，重组表达载体含有一段腈水合酶基因，该腈水合酶基因序列如SEQ ID NO.1所示；基因工程菌为携带该重组表达载体的宿主微生物；培养方法为将宿主微生物在LB培养基中培养得到种子液，之后将种子液接种到发酵培养基中进行培养，得到基因工程菌。与现有技术相比，本发明的腈水合酶基因能够在工程菌中实现高效表达并且其酶活性极好，经测定比酶活可达50U/mg以上，在优选条件下可以达到100U/mg，因而催化合成烟酰胺效率高，转化率可达99％以上，生产效率达到720g/(L·h)。
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公开(公告)号：CN113151131A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110315377.6
申请日：2021-03-24
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种产异丁香酚单加氧酶的自诱导培养基，该培养基包括以下组分：2～10g/L的葡萄糖，1～7g/L的乳糖，20～50g/L的酵母浸粉，6～7g/L的Na2HPO4，2～4g/L的KH2PO4，0.3～0.7g/L的NaCl，0.8～1.2g/L的NH4Cl，0.1～0.3g/L的MgSO4，0.0～0.1g/L的CaCl2，pH为6～7。本发明采用改进后的自诱导培养基，并利用双温度控制的方式，能有效诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET21a‑IEM的表达；该自诱导培养基以乳糖作为底物诱导目的蛋白表达，具有产酶量高，成本低，对环境友好等优点；重组异丁香酚单加氧酶的细胞酶活可达3180.8U/L。
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公开(公告)号：CN109554384A
公开(公告)日：2019-04-02
申请号：CN201811417653.4
申请日：2018-11-26
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明提供了一种基因工程菌及其在催化二腈选择性水解中的应用。本发明公开的基因工程菌携带含有两段腈水解酶nh基因的重组表达载体，能够实现腈水解酶的双表达，催化二腈水解活力和选择性高，转化率可达99%以上。由于实现了腈水解酶的双表达，导致酶的生产成本低，并且该制备条件温和、无需添加大量有机溶剂，有利于进一步的工业化生产，在抗癫痫药物加巴喷丁的生产中具有很好的工业开发前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115947700B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202310019875.5
申请日：2023-01-06
Applicant: 上海应用技术大学
IPC: C07D277/593 , C12Q1/37
Abstract: 本发明涉及一种新型酰胺酶显色底物及其合成方法与应用，该合成方法包括以下步骤：步骤S1、在圆底烧瓶中加入I结构化合物氨噻肟酸与有机溶剂，缓慢滴加氯酰化剂，加毕，控温反应得到含有氨噻肟酰氯的黄色澄清溶液II；步骤S2、将反应液置于旋转蒸发仪中，以蒸发除去溶剂，生成黄色流状液体，向黄色流状液体中加入5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与丙酮，充分搅拌后，控温并滴加有机碱或无机碱，继续保温反应，反应结束后旋蒸除去溶剂，加入适量蒸馏水充分搅拌，用酸化剂调节pH，析出黄色固体，混匀离心，通过常规的过滤、洗涤与干燥得到目标产物III。本发明在酶活定量与筛选中具有灵敏度高、准确性好的优势；不需要终止剂，其具有步骤简单与反应温和等优点。
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公开(公告)号：CN113151201A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110315426.6
申请日：2021-03-24
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明公开了一种异丁香酚单加氧酶突变体及其应用，属于生物工程领域。将来源于硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)Jin1的异丁香酚单加氧酶基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第83位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第95位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第273位由亮氨酸突变为苯丙氨酸F。本发明所述的异丁香酚单加氧酶突变体K83R/K95R/L273F的比活是突变之前的2.1倍，在25℃、30℃、35℃下半衰期分别提高了3.0倍、12.0倍、24.7倍。本发明的异丁香酚单加氧酶突变体在氧气作用下可以在较宽的温度范围内催化底物异丁香酚苯环上的丙烯基氧化从而生成香兰素，能广泛应用于食品、化工、制药等行业，具有广阔的前景。
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公开(公告)号：CN110643625A
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201910899001.7
申请日：2019-09-23
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明公开一种水相体系中高效绿色制备生物素中间体的方法，即采用重组微杆菌酯酶整细胞在纯水体系中催化内消旋生物素二甲酯不对称水解生成(4S,5R)-半甲酯。当底物浓度为200mM，反应时间为4h，(4S,5R)-半甲酯e.e.值大于99％，产率达100％，时空产率超过400g/L/d。该制备方法催化效率高、底物转化率高、产品光学纯度高，并且以不含有机溶剂的纯水作为反应介质，具有潜在的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN109369331A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811532510.8
申请日：2018-12-14
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明提供了一种纯水中一步法制备消旋体芳基邻二醇的方法，其特征在于，包括下列步骤：将间氯过氧苯甲酸溶解在去离子水中，加入苯乙烯类化合物，30℃水浴加热，以转速200rpm-300rpm搅拌进行反应2-3h，反应液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去乙酸乙酯，得到消旋体芳基邻二醇。本发明的一种纯水中一步法制备消旋体芳基邻二醇的方法，即在去离子水中，使用间氯过氧苯甲酸为氧化剂，在2～3h内高化学选择性和高产率地实现苯乙烯类化合物的双羟化反应，获得消旋体芳基邻二醇。该方法没有使用有机溶剂和重金属催化剂，反应时间短，反应条件温和，对环境绿色环保，操作简单，催化剂易于获得，具有潜在的应用前景，克服了目标产物产率低、催化剂难以获得、需要有机溶剂等问题。
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公开(公告)号：CN117778519A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311821143.4
申请日：2023-12-27
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种筛选产醇氧化酶菌株及判断醇氧化酶活力的方法，具体步骤如下：S1、重组醇氧化酶的表达：将菌株接种于硝酸纤维素膜上培养得到长有菌落的硝酸纤维素膜，将长有菌落的硝酸纤维素膜低温诱导，得到长有表达醇氧化酶菌落的硝酸纤维素膜；S2、将长有表达醇氧化酶菌落的硝酸纤维素膜多次冻融，室温放置；S3、重组醇氧化酶的筛选：将室温放置后的硝酸纤维素膜覆盖于显色琼脂凝胶上，通过显色琼脂凝胶上显色圈的大小及颜色深浅判断醇氧化酶活性高低，显色圈越大，颜色越深，醇氧化酶活性越高。与现有技术相比，本发明无需繁琐的菌体培养、破碎等流程，不需要借助分析仪器，能够快速筛选具有不同醇氧化酶活力菌株，简便高效。
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