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公开(公告)号：CN118126133A
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202410335172.8
申请日：2024-03-22
Applicant: 上海应用技术大学 , 上海沪溶生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供了提高青霉素G酰化酶活性表达的信号肽、重组菌株及其构建方法与应用。本发明通过计算筛选和实验验证，发现了能促进青霉素酰化酶在pET载体上高活性表达的新型信号肽序列，在将其替换青霉素酰化酶原始信号肽的基础上，构建了含新型信号肽的青霉素酰化酶基因工程菌，在此基础上建立了该基因工程菌高活性表达PGA的培养基组分和培养条件。在此条件下，菌种产酶活性超过了10000U/L，较原始菌株提高了37余倍。本发明获得较高的青霉素酰化酶活性表达，为后续的大规模生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN118726327A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410788676.5
申请日：2024-06-19
Applicant: 上海沪溶生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种氰酸酶突变体、核酸、重组表达载体及其应用，属于生物工程领域。将来源于大肠肝菌E.coli K‑12substr.MG1655的氰酸酶基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第37位由甘氨酸G突变为丙氨酸A，第154位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第51位由谷氨酰胺Q突变为组氨酸H。本发明所述的氰酸酶突变体G37A/K154R/Q51H对氰酸钾的比活是突变之前的2.4倍，在30℃、40℃下半衰期分别提高了2.1倍和2.6倍。本发明所述的氰酸酶亲本不能催化氰化钾，而突变体G37A/K154R/Q51H对氰化钾的比活达到了5.5U/mg，在30℃、40℃下半衰期分别为2.5h和3.0h。本发明的氰酸酶突变体可以高效的催化底物氰酸钾和氰化钾分解，从而达到降解含氰废水的目的，能广泛应用于化工、制药和冶金等行业，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN117778519A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311821143.4
申请日：2023-12-27
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种筛选产醇氧化酶菌株及判断醇氧化酶活力的方法，具体步骤如下：S1、重组醇氧化酶的表达：将菌株接种于硝酸纤维素膜上培养得到长有菌落的硝酸纤维素膜，将长有菌落的硝酸纤维素膜低温诱导，得到长有表达醇氧化酶菌落的硝酸纤维素膜；S2、将长有表达醇氧化酶菌落的硝酸纤维素膜多次冻融，室温放置；S3、重组醇氧化酶的筛选：将室温放置后的硝酸纤维素膜覆盖于显色琼脂凝胶上，通过显色琼脂凝胶上显色圈的大小及颜色深浅判断醇氧化酶活性高低，显色圈越大，颜色越深，醇氧化酶活性越高。与现有技术相比，本发明无需繁琐的菌体培养、破碎等流程，不需要借助分析仪器，能够快速筛选具有不同醇氧化酶活力菌株，简便高效。
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公开(公告)号：CN115947700A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202310019875.5
申请日：2023-01-06
Applicant: 上海应用技术大学
IPC: C07D277/593 , C12Q1/37
Abstract: 本发明涉及一种新型酰胺酶显色底物及其合成方法与应用，该合成方法包括以下步骤：步骤S1、在圆底烧瓶中加入I结构化合物氨噻肟酸与有机溶剂，缓慢滴加氯酰化剂，加毕，控温反应得到含有氨噻肟酰氯的黄色澄清溶液II；步骤S2、将反应液置于旋转蒸发仪中，以蒸发除去溶剂，生成黄色流状液体，向黄色流状液体中加入5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与丙酮，充分搅拌后，控温并滴加有机碱或无机碱，继续保温反应，反应结束后旋蒸除去溶剂，加入适量蒸馏水充分搅拌，用酸化剂调节pH，析出黄色固体，混匀离心，通过常规的过滤、洗涤与干燥得到目标产物III。本发明在酶活定量与筛选中具有灵敏度高、准确性好的优势；不需要终止剂，其具有步骤简单与反应温和等优点。
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公开(公告)号：CN115873812A
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202210904607.7
申请日：2022-07-29
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于哺乳动物细胞表达系统的高活性和高热稳定性荧光素酶突变体。本发明在密码子优化的萤火虫荧光素酶基础上利用理性设计的方法改造荧光素酶的分子结构，得到热稳定性和活性均提高的荧光素酶突变体，其突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3‑5所示。编码其蛋白质的核苷酸序列如SEQID NO.6‑8所示。突变体包括双突变位点T214N T290P、T214N K28R和A532RT214N中的至少一个。本发明获得的荧光素酶突变体，相比现有技术，其在293细胞中能够高效表达，并且表达产物具有高活性和高热稳定性的特点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110183350B
公开(公告)日：2022-08-05
申请号：CN201910496717.2
申请日：2019-06-10
Applicant: 上海应用技术大学
IPC: C07C251/24 , C07C249/02 , C09F9/00
Abstract: 本发明公开了一种水性涂料催干剂及其制备方法，所述水性涂料催干剂结构式为：其中R1为或R2为Mn或Co。其制备方法包括步骤1：将二胺溶于乙醇，滴加水杨醛进行反应，反应结束后冷却到室温结晶，抽滤所得固体，干燥，得到N,N'‑邻羟苯亚甲基‑1,2‑二胺配体；步骤2：将步骤1得到的N,N'‑邻羟苯亚甲基‑1,2‑二胺配体溶于二氯甲烷得到N,N'‑邻羟苯亚甲基‑1,2‑二胺的二氯甲烷溶液，滴加金属醋酸盐的乙醇溶液，反应结束后冷却，旋转蒸发除掉溶剂，干燥，得到水性涂料催干剂。本发明制备的水性涂料催干剂能够有效抑制金属离子的水解，具有良好的耐水解性，并有良好的相容性和催干性，对水性涂料的催干速度快，制备成本低廉，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN108220358A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201810018465.8
申请日：2018-01-09
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明公开一种（S）‑1‑叔丁氧羰基‑3‑羟基哌啶的制备方法，即采用毕赤酵母菌Pichia sp. SIT2014作为生物催化剂催化1‑叔丁氧羰基‑3‑哌啶酮进行不对称还原反应生成（S）‑1‑叔丁氧羰基‑3‑羟基哌啶。该制备方法具有转化率高、光学纯度高，总收率高的优点，最终所得的（S）‑1‑叔丁氧羰基‑3‑羟基哌啶的得率最高可达99.9%，光学纯度在99%以上，总收率高达95.1%。并且该制备过程反应时间短，条件温和、无需添加大量有机溶剂，且生产成本低，有利于进一步的工业化生产。
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公开(公告)号：CN113943746B
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202111269631.X
申请日：2021-10-29
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种腈水合酶基因表达的基因工程菌，具体涉及一种重组表达载体、基因工程菌及菌的培养方法和应用，重组表达载体含有一段腈水合酶基因，该腈水合酶基因序列如SEQ ID NO.1所示；基因工程菌为携带该重组表达载体的宿主微生物；培养方法为将宿主微生物在LB培养基中培养得到种子液，之后将种子液接种到发酵培养基中进行培养，得到基因工程菌。与现有技术相比，本发明的腈水合酶基因能够在工程菌中实现高效表达并且其酶活性极好，经测定比酶活可达50U/mg以上，在优选条件下可以达到100U/mg，因而催化合成烟酰胺效率高，转化率可达99％以上，生产效率达到720g/(L·h)。
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公开(公告)号：CN118389473A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410492503.9
申请日：2024-04-23
Applicant: 上海应用技术大学
IPC: C12N9/78 , C12N15/55 , C12N15/70 , C12N1/21 , C02F3/34 , C12R1/19 , C02F101/18 , C02F101/38
Abstract: 本发明公开了一种高热稳定性高活性腈水解酶突变体及其应用，属于生物工程领域。将来源于敏捷食酸菌(Acidovorax facilis)72W的腈水基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第96位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第349位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第305位由缬氨酸V突变为亮氨酸L。本发明所述的腈水解酶突变体K96R/K349R/V305L对3‑氰基吡啶和氰化钾的比活分别是突变之前的2.2和3.5倍，在40℃、50℃、55℃下半衰期分别提高了2.3倍、3.3倍、3.8倍和2.3倍、3.5倍、4.0倍。本发明的腈水解酶突变体可以在较宽的温度范围内高效的催化水解底物3‑氰基吡啶和氰化钾中的氰基为相应的羧基，从而用于制备羧酸类医药化学品或降解含氰废水，能广泛应用于化工、制药和冶金等行业，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN111549014A
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN202010338502.0
申请日：2020-04-26
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种产酯酶自诱导培养基，配方为：甘油5～13g/L，葡萄糖0.3～1.3g/L，乳糖1～6g/L，胰蛋白胨10～30g/L，酵母浸粉3～13g/L，0.0～0.5g/L MgSO4，17～19g/L Na2HPO4，6～8g/L KH2PO4，2～3g/L NH4Cl，0.5～1.0g/L Na2SO4，痕量元素适量。与现有技术相比，本发明培养基组分及培养条件出发，找到一条既能高效表达外源蛋白，又能实现自动诱导的改进型产酯酶大肠杆菌自诱导培养基，利用改进型自诱导培养基，并采用双温度调控方式，对重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-21a-estsit01进行培养和发酵产酶；本发明的自诱导培养基利用乳糖作为底物诱导目的蛋白表达，具有产酶量高，成本低；重组酯酶细胞的酶活可以达到1684U/L的优点。
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