一种浸润性T细胞的培养方法

    公开(公告)号:CN110628717A

    公开(公告)日:2019-12-31

    申请号:CN201911029541.6

    申请日:2019-10-28

    发明人: 柴勋 李晓飞

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 一种浸润性T细胞的培养方法,包括以下步骤:1)制备形成效应T细胞,2)使用退分化培养基,使效应T细胞退分化为TIL-TCM,3)使用扩增培养基扩增TCM。本发明所培养的TIL-TCM有更强的瘤体趋向性,能归巢到肿瘤位置;能特异性识别肿瘤细胞,特异性杀瘤;能适应肿瘤微环境;能长时间在体内存活,起到长期抗肿瘤作用;少量的细胞,就能发挥强效的抗肿瘤作用,培养时间短,副反应几率低,操作简单,细胞增殖速度快。

    一种自体皮肤来源的成纤维细胞培养方法

    公开(公告)号:CN107354129A

    公开(公告)日:2017-11-17

    申请号:CN201710734675.2

    申请日:2017-08-24

    IPC分类号: C12N5/077 C12N5/071

    摘要: 一种自体皮肤来源的成纤维细胞培养方法,包括下述步骤:1)取自体皮肤,分为多个组织块,将所述组织块贴在培养皿中,往所述组织块上滴加浓缩胎牛血清,充分浸润组织块,使组织块不易干燥,并促进成纤维细胞爬出;2)往所述步骤1)中的培养皿中加入选择培养基,将培养皿置于培养箱中培养直至成纤维细胞融合完成;所述选择培养基促进成纤维细胞生长,抑制其他杂细胞生长;3)将所述步骤2)的培养皿从培养箱中取出,加入胰酶消化,使成纤维细胞从培养皿中脱落;4)将所述步骤3)得到的成纤维细胞使用完全培养基接种至培养瓶中,并使成纤维细胞密度达到90%,得到原代成纤维细胞;所述完全培养基终止步骤3)的消化,并作为成纤维细胞生长增殖的培养基;5)将所述步骤4)中的原代成纤维细胞传代扩瓶培养。

    一种皮肤成纤维细胞培养的选择性培养基及其制备方法

    公开(公告)号:CN107418926B

    公开(公告)日:2018-07-06

    申请号:CN201710735226.X

    申请日:2017-08-24

    IPC分类号: C12N5/071

    摘要: 一种皮肤成纤维细胞培养的选择性培养基,包括基础培养基、胎牛血清、人血清白蛋白、牛脑垂体提取物、胰岛素、维生素C、生物素、胰岛素样生长因子和表皮生长因子,并且按照1ml:0.0125ml‑0.05ml:0.005ml‑0.025ml:80μg‑423μg:7μg‑18μg:22μg‑60μg:37μg‑214μg:1μg‑20μg:0.1μg‑1μg的比例混合;所述基础培养包括DMEM培养基和F12培养基。本发明的优点在于对成纤维细胞具有选择性,提高成纤维细胞的纯度,避免杂细胞污染,有效缩短细胞传代数,细胞增殖速度快。本发明的选择性培养基还能够降低血清使用量,节约成本。

    一种含有染料EvaGreen和双热启动酶的定量PCR方法

    公开(公告)号:CN105177169B

    公开(公告)日:2016-10-26

    申请号:CN201510707423.1

    申请日:2015-10-27

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 本发明涉及一种含有染料EvaGreen和双热启动酶的定量PCR方法,其特征在于包括如下步骤:(1)构建PCR反应体系,包括:待测样品;与所述待测样品中待测模板互补的正向引物和反向引物;荧光染料EvaGreen;及双热启动酶,包括HotStar Taq DNA聚合酶和Anti Taq DNA聚合酶;(2)在所述PCR反应体系中,对所述待测模板进行PCR扩增,以形成双链DNA‑EvaGreen荧光染料复合物;(3)PCR扩增过程之中或之后,检测所述PCR反应体系的荧光值,以确定扩增产物的数量,从而确定待测模板的数量。本发明的定量PCR方法具有高精确度、高效率、高灵敏度、高特异性且价格低廉的特点。

    一种浸润性T细胞的培养方法

    公开(公告)号:CN110628717B

    公开(公告)日:2020-10-30

    申请号:CN201911029541.6

    申请日:2019-10-28

    发明人: 柴勋 李晓飞

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 一种浸润性T细胞的培养方法,包括以下步骤:1)制备形成效应T细胞,2)使用退分化培养基,使效应T细胞退分化为TIL‑TCM,3)使用扩增培养基扩增TCM。本发明所培养的TIL‑TCM有更强的瘤体趋向性,能归巢到肿瘤位置;能特异性识别肿瘤细胞,特异性杀瘤;能适应肿瘤微环境;能长时间在体内存活,起到长期抗肿瘤作用;少量的细胞,就能发挥强效的抗肿瘤作用,培养时间短,副反应几率低,操作简单,细胞增殖速度快。

    一种脂肪干细胞的培养方法

    公开(公告)号:CN109355256A

    公开(公告)日:2019-02-19

    申请号:CN201811431804.1

    申请日:2018-11-27

    发明人: 柴勋 杨娟 吴国祥

    IPC分类号: C12N5/0775 C12N5/077

    摘要: 本发明其中一种技术方案提供了一种脂肪干细胞的培养方法,该方法中使用灭活的成纤维细胞进行选择性培养。本发明使用灭活的成纤维细胞能释放凋亡信号,抑制成纤维细胞的扩增,且不影响脂肪干细胞的扩增;灭活的成纤维细胞能释放各种因子如bfgf、igf-1,TGF等,所以用该细胞当滋养层细胞培养脂肪干细胞不需要额外再添加因子,只需用基础培养基加血清替代物即可,且其扩增效率是传统方法的一倍以上。

    一种含有染料EvaGreen和双热启动酶的定量PCR方法

    公开(公告)号:CN105177169A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510707423.1

    申请日:2015-10-27

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 本发明涉及一种含有染料EvaGreen和双热启动酶的定量PCR方法,其特征在于包括如下步骤:(1)构建PCR反应体系,包括:待测样品;与所述待测样品中待测模板互补的正向引物和反向引物;荧光染料EvaGreen;及双热启动酶,包括HotStar Taq DNA聚合酶和Anti Taq DNA聚合酶;(2)在所述PCR反应体系中,对所述待测模板进行PCR扩增,以形成双链DNA-EvaGreen荧光染料复合物;(3)PCR扩增过程之中或之后,检测所述PCR反应体系的荧光值,以确定扩增产物的数量,从而确定待测模板的数量。本发明的定量PCR方法具有高精确度、高效率、高灵敏度、高特异性且价格低廉的特点。