一种自体皮肤来源的成纤维细胞培养方法

    公开(公告)号:CN107354129A

    公开(公告)日:2017-11-17

    申请号:CN201710734675.2

    申请日:2017-08-24

    IPC分类号: C12N5/077 C12N5/071

    摘要: 一种自体皮肤来源的成纤维细胞培养方法,包括下述步骤:1)取自体皮肤,分为多个组织块,将所述组织块贴在培养皿中,往所述组织块上滴加浓缩胎牛血清,充分浸润组织块,使组织块不易干燥,并促进成纤维细胞爬出;2)往所述步骤1)中的培养皿中加入选择培养基,将培养皿置于培养箱中培养直至成纤维细胞融合完成;所述选择培养基促进成纤维细胞生长,抑制其他杂细胞生长;3)将所述步骤2)的培养皿从培养箱中取出,加入胰酶消化,使成纤维细胞从培养皿中脱落;4)将所述步骤3)得到的成纤维细胞使用完全培养基接种至培养瓶中,并使成纤维细胞密度达到90%,得到原代成纤维细胞;所述完全培养基终止步骤3)的消化,并作为成纤维细胞生长增殖的培养基;5)将所述步骤4)中的原代成纤维细胞传代扩瓶培养。

    一种TM4SF1特异性嵌合抗原受体及其应用

    公开(公告)号:CN107216395B

    公开(公告)日:2018-07-20

    申请号:CN201710533614.X

    申请日:2017-07-03

    摘要: 本发明公开了一种TM4SF1特异性嵌合抗原受体,包含胞外识别区、铰链区、跨膜区和胞内信号区,其中胞外识别区为scFv序列,铰链区为CD8区域,跨膜区为CD8跨膜区或CD28跨膜区中的任一个,胞内信号区包含CD28、4‑1BB、CD3ζ中的至少一个;上述嵌合抗原受体具体为L6‑28Z、L6‑BBZ和L6‑28BBZ,其分别由SEQ ID NO.12~SEQ ID NO.14所示序列的核酸编码;本发明还提供一种包含上述核酸的重组表达载体及其宿主细胞、构建方法、在哺乳动物肿瘤治疗中的应用,本发明所述的TM4SF1特异性嵌合抗原受体可以通过修饰T细胞,并使特异性CAR‑T细胞高效特异的治疗实体肿瘤。

    一种自体皮肤来源的成纤维细胞培养方法

    公开(公告)号:CN107354129B

    公开(公告)日:2018-07-06

    申请号:CN201710734675.2

    申请日:2017-08-24

    IPC分类号: C12N5/077 C12N5/071

    摘要: 一种自体皮肤来源的成纤维细胞培养方法,包括下述步骤:1)取自体皮肤,分为多个组织块,将所述组织块贴在培养皿中,往所述组织块上滴加浓缩胎牛血清,充分浸润组织块,使组织块不易干燥,并促进成纤维细胞爬出;2)往所述步骤1)中的培养皿中加入选择培养基,将培养皿置于培养箱中培养直至成纤维细胞融合完成;所述选择培养基促进成纤维细胞生长,抑制其他杂细胞生长;3)将所述步骤2)的培养皿从培养箱中取出,加入胰酶消化,使成纤维细胞从培养皿中脱落;4)将所述步骤3)得到的成纤维细胞使用完全培养基接种至培养瓶中,并使成纤维细胞密度达到90%,得到原代成纤维细胞;所述完全培养基终止步骤3)的消化,并作为成纤维细胞生长增殖的培养基;5)将所述步骤4)中的原代成纤维细胞传代扩瓶培养。

    一种用于微骨折手术的软骨诱导基质及制备方法

    公开(公告)号:CN105255814A

    公开(公告)日:2016-01-20

    申请号:CN201510706433.3

    申请日:2015-10-27

    IPC分类号: C12N5/071 A61L27/50

    摘要: 本发明提供了一种用于微骨折手术的软骨诱导基质及其制备方法,软骨诱导基质包括凝胶和添加剂,凝胶为纤维蛋白,胶原蛋白,透明质酸,凝血酶;添加剂在培养基中的终浓度为:维生素C:233μM~287μM;亚油酸:3.7μM~8.9μM;胆固醇:9μM~17μM;地塞米松:6nM~15nM;乙酰半胱氨酸:43μM~58μM;转铁蛋白:18μg/mL~32μg/mL;亚硒酸钠:22nM~52nM;泛酸钠:13μM~24μM;生物素:28μM~43μM;胰岛素样生长因子:7μg/mL~18μg/mL;表皮生长因子:2ng/mL~9ng/mL;成纤维生长因子:2ng/mL~9ng/mL;血小板衍生生长因子:2ng/mL~9ng/mL;转化生长因子:30ng/ml~70ng/ml;胰岛素铁硒传递蛋白:1%。

    一种恢复衰竭性免疫细胞功能的融合蛋白及其应用

    公开(公告)号:CN107082812B

    公开(公告)日:2018-11-13

    申请号:CN201710197757.8

    申请日:2017-03-29

    摘要: 本发明涉及一种恢复衰竭免疫细胞功能的融合蛋白,所述融合蛋白包含识别衰竭免疫细胞的功能区和激活扩增衰竭免疫细胞的功能区,两个功能区通过一定长度的非功能性氨基酸片段连接。识别功能区是利用免疫检查点特异性抗体识别衰竭性免疫细胞的表型受体;激活扩增功能区采用细胞因子或功能类似突变体、或者表面受体的配体或功能类似突变体、或者激活性抗体来激活衰竭性免疫细胞;其还涉及该融合蛋白的应用。试验表明,本发明制备的融合蛋白既能识别衰竭性免疫细胞,又能激活扩增识别的免疫细胞,恢复免疫细胞杀伤抗原阳性细胞的功能,其可增强抑制肿瘤生长和控制病毒感染的功能,具有很好的临床前景和广泛的应用范围。