公开(公告)号：CN106636462A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201611102581.5

申请日：2016-12-05

申请人： 东莞市第八人民医院(东莞市儿童医院) ,  东莞市儿科研究所

发明人： 黎四平 ,  马强 ,  陆小梅 ,  钟柏茂 ,  谢明玉 ,  彭琪 ,  饶春宝

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

CPC分类号： C12Q1/705 ,  C12Q1/6848 ,  C12Q1/6858 ,  C12Q2600/156 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2549/119

摘要： 本发明涉及病毒基因突变检测技术领域，具体涉及检测巨细胞病毒UL54和UL97基因耐药突变的巢式PCR引物及方法。该引物包括五对引物，对于UL54基因，第一轮PCR扩增引物为第一对引物，第二轮PCR扩增引物为第二和第三对引物，各引物序列如SEQ ID No.1‑6所示。对于UL97基因，第一轮PCR扩增引物为第四对引物，第二轮PCR扩增引物为第五对引物，各引物序列如SEQ ID No.7‑10 所示。选用本发明的巢式PCR引物，采用巢式PCR方法，优化PCR反应体系和反应程序，扩增UL54和UL97基因具有高敏感性和高度扩增特异性，可用于分析其耐药基因突变，实用性强，符合临床推广的要求。

公开(公告)号：CN107247132B

公开(公告)日：2019-06-11

申请号：CN201710363857.3

申请日：2017-05-22

申请人： 东莞市儿童医院 ,  东莞市儿科研究所

发明人： 刘倩 ,  陆小梅 ,  彭琪 ,  蒋再学 ,  谢明玉

IPC分类号： G01N33/53 ,  C07K14/085 ,  C07K1/22

摘要： 本发明涉及多肽疫苗技术领域，具体涉及一种多肽疫苗的筛选评估方法，包括如下步骤：选择病原体中和抗原表位多肽序列作为多肽疫苗的序列；将选定的中和抗原表位采用化学方法进行多肽合成，封闭活性基团；将多肽与偶联载体进行偶联，洗脱未偶联的多肽，封闭未偶联的偶联载体，清洗待用；将偶联多肽后的偶联载体装填至蛋白质纯化柱，加入抗体样本，洗脱并收集中和抗体；通过体外微量中和试验的方法，分析捕获的中和抗体的中和滴度。本发明涉及一种前期已在动物试验中证实具有中和效果的抗原表位肽，评估其是否适合用于人体的多肽疫苗的筛选评估方法。本发明的筛选评估方法将大大提高多肽疫苗的研发效率，降低研发成本。

公开(公告)号：CN106367534A

公开(公告)日：2017-02-01

申请号：CN201610807465.7

申请日：2016-09-07

申请人： 东莞市儿童医院 ,  东莞市儿科研究所

发明人： 马强 ,  钟柏茂 ,  陆小梅 ,  黎四平 ,  谢明玉 ,  刘倩 ,  何晓光 ,  彭琪

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/91

CPC分类号： C12Q1/706 ,  C12Q1/6848 ,  C12Q2600/156 ,  C12Q2549/119 ,  C12Q2531/113

摘要： 本发明涉及病毒基因突变检测技术领域，具体涉及一种检测乙型肝炎病毒表面抗原免疫逃逸突变的巢式PCR引物及巢式PCR方法，该巢式PCR方法包括如下步骤：以第一对引物对待检测DNA进行第一轮PCR，得到第一轮PCR产物，进行50-150倍稀释；以第二对引物对第一轮PCR稀释产物进行第二轮PCR，对第二轮PCR产物进行检测。本发明在长期进行HBV研究的基础上，对NCBI上乙肝病毒不同基因型的序列进行比对分析，对相关引物、反应体系进行优化后，探索出的一套特异、准确、操作简便的检测HBV表面抗原免疫逃逸突变的巢式PCR方法，可以用于分析HBV表面抗原免疫逃逸突变以及基因分型，实用性强，符合临床推广的要求。

公开(公告)号：CN107247132A

公开(公告)日：2017-10-13

申请号：CN201710363857.3

申请日：2017-05-22

申请人： 东莞市儿童医院 ,  东莞市儿科研究所

发明人： 刘倩 ,  陆小梅 ,  彭琪 ,  蒋再学 ,  谢明玉

IPC分类号： G01N33/53 ,  C07K14/085 ,  C07K1/22

CPC分类号： G01N33/53 ,  C07K14/005 ,  C12N2770/32334 ,  C12N2770/32351

摘要： 本发明涉及多肽疫苗技术领域，具体涉及一种多肽疫苗的筛选评估方法，包括如下步骤：选择病原体中和抗原表位多肽序列作为多肽疫苗的序列；将选定的中和抗原表位采用化学方法进行多肽合成，封闭活性基团；将多肽与偶联载体进行偶联，洗脱未偶联的多肽，封闭未偶联的偶联载体，清洗待用；将偶联多肽后的偶联载体装填至蛋白质纯化柱，加入抗体样本，洗脱并收集中和抗体；通过体外微量中和试验的方法，分析捕获的中和抗体的中和滴度。本发明涉及一种前期已在动物试验中证实具有中和效果的抗原表位肽，评估其是否适合用于人体的多肽疫苗的筛选评估方法。本发明的筛选评估方法将大大提高多肽疫苗的研发效率，降低研发成本。

公开(公告)号：CN106190984A

公开(公告)日：2016-12-07

申请号：CN201610807247.3

申请日：2016-09-07

申请人： 东莞市儿童医院 ,  东莞市儿科研究所

发明人： 刘倩 ,  钟柏茂 ,  陆小梅 ,  何晓光 ,  马强 ,  彭琪 ,  谢明玉

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/45 ,  C12N15/85 ,  C12R1/91

CPC分类号： C07K14/005 ,  C12N15/85 ,  C12N2760/18522 ,  C12N2800/107

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种稳定表达呼吸道合胞病毒M2-1蛋白细胞株及其构建方法，该细胞株整合了呼吸道合胞病毒M2-1基因，能稳定高效的表达呼吸道合胞病毒M2-1基因。该构建方法包括如下步骤：利用基因重组技术将呼吸道合胞病毒M2-1基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中；将构建好的重组表达载体pcDNA-M2-1转染Hep-2细胞，通过G418筛选出阳性细胞株；对阳性细胞株进行RT-qPCR和Western blot鉴定。本发明的细胞株可以为临床病毒分离培养提供快速、灵敏、稳定的平台，并为研究M2-1的转录延长因子的特性奠定了工作基础。