公开(公告)号：CN104894024A

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201510317461.6

申请日：2015-06-11

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  武翠玲 ,  杨兴昊 ,  刘丹 ,  张姜 ,  吴日帮 ,  黄雅雯

IPC: C12N1/20 ,  C12P21/06 ,  C12N9/52 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12R1/01 ,  C12N9/52 ,  C12P21/06

Abstract: 本发明属于微生物技术领域，具体公开了一株假交替单胞菌突变菌株Pseudoalteromonas？sp.CSN423-M及其应用。所述Pseudoalteromonas？sp.CSN423-M菌株已于2015年1月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC？No.M2015024。该菌株的16S？rDNA核苷酸序列如SEQ？ID？NO:1所示。本发明的假交替单胞菌CSN423-M能够产胞外蛋白酶，经测定，该菌培养96h后，胞外蛋白酶活性达1461.33U/mL，因此,可用于生产蛋白酶，对蛋白酶的研究和利用具有重要的价值。

公开(公告)号：CN108118077A

公开(公告)日：2018-06-05

申请号：CN201611076917.5

申请日：2016-11-30

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  吴日帮 ,  杨兴昊 ,  刘丹 ,  武翠玲 ,  张姜 ,  黄嘉丰 ,  廖斌强

IPC: C12P21/06 ,  C12N9/52 ,  C07K14/78 ,  C07K1/34 ,  C07K1/16

Abstract: 本发明设计一种酶解胶原蛋白同时制备抗氧化肽与抗冻肽的工艺，其方法是以三文鱼皮为原料提取胶原蛋白，利用Vibrio sp.SQS2-3发酵所得的胞外蛋白酶粗酶液将其水解成短肽溶液，通过3000 Da超滤管4500×g离心超滤45min后获得具有保护肌球蛋白和减缓其Ca2+-ATPase活性在反复冻融中下降作用的抗冻肽，通过Sephadex LH-20凝胶过滤层析分离下层超滤组份后，获得具有清除DPPH自由基、羟自由基以及对DNA氧化损伤具有一定抑制的能力，并且在氧自由基吸收能力检测中显示出浓度依赖的抗氧化活性的抗氧化肽。LC-MS技术鉴定出该抗氧化组分含有19条多肽。

公开(公告)号：CN104894024B

公开(公告)日：2018-01-12

申请号：CN201510317461.6

申请日：2015-06-11

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  武翠玲 ,  杨兴昊 ,  刘丹 ,  张姜 ,  吴日帮 ,  黄雅雯

IPC: C12N1/20 ,  C12P21/06 ,  C12N9/52 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于微生物技术领域，具体公开了一株假交替单胞菌突变菌株Pseudoalteromonas sp.CSN423‑M及其应用。所述Pseudoalteromonas sp.CSN423‑M菌株已于2015年1月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.M 2015024。该菌株的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的假交替单胞菌CSN423‑M能够产胞外蛋白酶，经测定，该菌培养96h后，胞外蛋白酶活性达1461.33U/mL，因此,可用于生产蛋白酶，对蛋白酶的研究和利用具有重要的价值。

公开(公告)号：CN103105427A

公开(公告)日：2013-05-15

申请号：CN201310018497.5

申请日：2013-01-18

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  陈淑华 ,  刘丹 ,  杨兴昊 ,  黄嘉丰

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明提供了一种蛋白酶谱电泳检测方法，属于生物技术技术领域。该方法包括制胶、加样、电泳、洗胶、反应显色步骤，其中制胶时没有向凝胶里加入蛋白酶底物，而在显色之前将胶在1%的底物溶液中浸泡。避免了底物在胶中对蛋白迁移率的影响,不需要价格昂贵的电转设备,可以用于各种蛋白酶谱的检测，应用广泛。

公开(公告)号：CN104122317B

公开(公告)日：2017-03-29

申请号：CN201410309658.0

申请日：2014-07-01

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  刘丹 ,  武翠玲 ,  杨兴昊 ,  吴日帮 ,  黄嘉封 ,  黄雅雯

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种蛋白酶谱电泳检测方法在快速鉴定蛋白酶种类上的应用，包括以下步骤：a.制备不含蛋白酶底物的SDS聚丙烯酸胺凝胶；b.蛋白酶样品与不含β-巯基乙醇的加样缓冲液混匀后加样，且加样时样品不在沸水浴中加热；c.电泳；d.洗胶；e.将胶在含有不同蛋白酶抑制剂的底物溶液中浸泡；f.反应显色。本发明方法能对不同蛋白酶进行定性，比传统方法在耗时上明显缩短；省去了分离纯化蛋白酶的繁琐步骤；重复性好，灵敏度高，活性条带测定准确，非常有利于后续的蛋白酶鉴定及有目的的纯化工作；可以用于各种蛋白酶类型的检测，有广阔的应用空间。

公开(公告)号：CN103105427B

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201310018497.5

申请日：2013-01-18

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  陈淑华 ,  刘丹 ,  杨兴昊 ,  黄嘉丰

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明提供了一种蛋白酶谱电泳检测方法，属于生物技术技术领域。该方法包括制胶、加样、电泳、洗胶、反应显色步骤，其中制胶时没有向凝胶里加入蛋白酶底物，而在显色之前将胶在1%的底物溶液中浸泡。避免了底物在胶中对蛋白迁移率的影响,不需要价格昂贵的电转设备,可以用于各种蛋白酶谱的检测，应用广泛。

公开(公告)号：CN108117597A

公开(公告)日：2018-06-05

申请号：CN201611076855.8

申请日：2016-11-30

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  吴日帮 ,  杨兴昊 ,  刘丹 ,  张姜 ,  黄嘉丰 ,  王理飞

IPC: C07K14/78 ,  C07K1/16 ,  C07K1/14 ,  C12N9/52 ,  C12P21/06 ,  A61P39/06 ,  C12R1/63

Abstract: 本发明设计一种海洋细菌胞外蛋白酶酶解鲮鱼皮胶原蛋白制备抗氧化肽的方法，制备方法如下：(1)将海洋细菌Vibrio sp.SQS2-3菌株接种于液体种子培养基，震荡培养1～2天，然后接种于发酵培养基，培养4-5天，经离心、透析后制得粗酶液；(2)将经过丙酮脱脂后的鲮鱼皮放置在80℃超纯水中水浴30min，然后经过过滤、离心、透析、冻干后制得鲮鱼皮胶原蛋白；(3)将粗酶液与鲮鱼皮胶原蛋白以1:10的比例混合，放置在37℃摇床中酶解15h，经过灭活、离心、超滤、Sephadex LH-20凝胶过滤层析的方法制得抗氧化肽，经质谱鉴定其氨基酸序列为Thr-Ala-Gly-His-Pro-Gly-Thr-His。

公开(公告)号：CN104122317A

公开(公告)日：2014-10-29

申请号：CN201410309658.0

申请日：2014-07-01

Applicant: 中南大学

Inventor： 何海伦 ,  刘丹 ,  武翠玲 ,  杨兴昊 ,  吴日帮 ,  黄嘉封 ,  黄雅雯

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种蛋白酶谱电泳检测方法在快速鉴定蛋白酶种类上的应用，包括以下步骤：a.制备不含蛋白酶底物的SDS聚丙烯酸胺凝胶；b.蛋白酶样品与不含β-巯基乙醇的加样缓冲液混匀后加样，且加样时样品不在沸水浴中加热；c.电泳；d.洗胶；e.将胶在含有不同蛋白酶抑制剂的底物溶液中浸泡；f.反应显色。本发明方法能对不同蛋白酶进行定性，比传统方法在耗时上明显缩短；省去了分离纯化蛋白酶的繁琐步骤；重复性好，灵敏度高，活性条带测定准确，非常有利于后续的蛋白酶鉴定及有目的的纯化工作；可以用于各种蛋白酶类型的检测，有广阔的应用空间。