一种在酵母基因中定点敲入外源基因的方法

    公开(公告)号:CN115717154A

    公开(公告)日:2023-02-28

    申请号:CN202211381732.0

    申请日:2022-11-04

    摘要: 本发明公开一种在酵母基因中定点敲入外源基因的方法,属于基因工程技术领域。本发明所述的在酵母基因中定点敲入外源基因的方法,其步骤如下:将携带有Cas9基因和sgRNA转录基因的载体,与外源基因片段,共同转化至酵母体内,转录后的sgRNA引导Cas9蛋白至酵母靶向基因的靶点处,切割靶点,并在靶点处引入DNA双链断裂,然后利用同源重组,将外源基因敲入靶点中,从而实现外源基因在酵母基因中的定点敲入。本发明实现了以更短的同源臂序列完成同源重组,从而在酿酒酵母ADE2基因第640~641位碱基之间敲入外源基因,这在现有技术的基础上具有突出的进步。