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公开(公告)号：CN108456738B
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN201710337775.1
申请日：2017-05-15
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/14
摘要： 本发明公开了一种TaqMan实时荧光定量PCR检测腐生葡萄球菌的方法，选取腐生葡萄球菌特异的一段基因序列，基于该特异基因序列，设计引物与TaqMan探针；应用目标基因克隆质粒作为标准品，检测敏感性、扩增效率等指标，建立了腐生葡萄球菌的实时荧光探针定量PCR检测方法；除目标菌外，其它种属细菌的基因组DNA均无扩增信号，表明该方法具有很好的特异性，能够满足一般样品检测要求；所设计的探针具有极高的敏感性，最低检测限可达到每个PCR反应检出10个拷贝的目的基因；十倍倍比稀释标准品，3次重复实验均具有很好的重复性，表明该方法稳定，数据可靠；因此，本发明建立的实时荧光探针定量PCR方法是一种快速、准确的检测腐生葡萄球菌方法。
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公开(公告)号：CN108456738A
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201710337775.1
申请日：2017-05-15
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/14
摘要： 本发明公开了一种TaqMan实时荧光定量PCR检测腐生葡萄球菌的方法，选取腐生葡萄球菌特异的一段基因序列，基于该特异基因序列，设计引物与TaqMan探针；应用目标基因克隆质粒作为标准品，检测敏感性、扩增效率等指标，建立了腐生葡萄球菌的实时荧光探针定量PCR检测方法；除目标菌外，其它种属细菌的基因组DNA均无扩增信号，表明该方法具有很好的特异性，能够满足一般样品检测要求；所设计的探针具有极高的敏感性，最低检测限可达到每个PCR反应检出10个拷贝的目的基因；十倍倍比稀释标准品，3次重复实验均具有很好的重复性，表明该方法稳定，数据可靠；因此，本发明建立的实时荧光探针定量PCR方法是一种快速、准确的检测腐生葡萄球菌方法。
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公开(公告)号：CN107012215A
公开(公告)日：2017-08-04
申请号：CN201710217225.6
申请日：2017-04-05
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/686 , C12Q2600/16 , C12Q2537/143 , C12Q2565/125
摘要： 本发明公开了一种检测低温肉制品中主要腐败病原菌(腐生葡萄球菌和溶酪大球菌)的多重PCR检测试剂盒。本发明提供了检测腐生葡萄球菌和溶酪大球菌的引物组，由引物对1和引物对2组成。本发明针对腐生葡萄球菌和溶酪大球菌的特异性片段，设计用于特异扩增的两对引物，扩增片段大小分别为腐生葡萄球菌‑201bp和溶酪大球菌‑392bp，样品基因组经过多重PCR、电泳检测，即可做出相应判定。本发明通过提供两对特异性引物，利用一步多重PCR，可以鉴定出低温肉制品中的腐生葡萄球菌和溶酪大球菌，具有快速、低成本、操作简单和结果易于判定的特点。
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公开(公告)号：CN105462884A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201510950317.6
申请日：2015-12-18
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明提供鸭支原体培养基，由液体培养基和固体培养基组成，液体培养基由以下组分组成：去离子水，10%的醋酸铊溶液，PPLO肉汤，葡萄糖，蛋白胨，胰蛋白胨，1%的酚红，含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基，灭活的马血清，酵母浸出液，青霉素，L-半胱氨酸盐酸盐和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；除添加琼脂粉，去掉酚红外，固体培养基其余组分与液体培养基相同。利用上述培养基对鸭支原体分离纯化：在固体培养基上分离菌落，将分离的菌落置于液体培养基中生长，然后进行液体培养物的过滤、稀释、涂板和挑单菌落增殖的纯化步骤，重复上述步骤直至得到纯化的鸭支原体。本发明的培养基可促进鸭支原体的生长，且分离纯化鸭支原体的成功率高。
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公开(公告)号：CN104962558A
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510388709.8
申请日：2015-07-06
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明提供一对检测鸭疫里默氏杆菌的特异性引物，所述特异性引物的核苷酸序列为：上游引物ompA-F：5’-actcaaggaagagcggatca-3’；下游引物ompA-R：5’-gcttcagcagaaccaactcc-3’。本发明还提供包含有上述引物的PCR检测试剂盒。本发明的试剂盒操作简单方便，特异性和敏感性高；结果判定直观，电泳后眼观即可。
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公开(公告)号：CN104007269A
公开(公告)日：2014-08-27
申请号：CN201410214701.5
申请日：2014-05-21
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： G01N33/96 , G01N33/531
CPC分类号： G01N33/56911 , G01N2333/195
摘要： 本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌间接血凝抗体检测试剂盒，所述试剂盒中包括：（1）鸭疫里默氏杆菌间接血凝抗原；（2）标准阳性血清；（3）标准阴性血清；（4）稀释液；并提供了其应用。本发明提供的一种鸭疫里默氏杆菌间接血凝抗体检测试剂盒及其应用，其有益效果包括以下方面：试剂盒操作简单方便，适合在各基层兽医有关单位以及养殖场广泛推广使用，本发明中的试剂盒在检测样品时只需要使用几种简单耗材以及温箱，不需要任何其它设备，即使在条件比较简陋的养鸭场也可以使用；结果判定直观，眼观即可；操作人员不需要专业知识，不必接受专业培训，只参照说明书就可进行检测；成本低廉，经济实惠，大多使用者均可接受。
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公开(公告)号：CN101607081A
公开(公告)日：2009-12-23
申请号：CN200910145908.0
申请日：2009-06-03
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开家畜使用的抗布鲁氏病的疫苗及这种疫苗所用的抗原蛋白的制备方法。本发明的布鲁氏菌疫苗所用的抗原蛋白为布鲁氏菌bcsp31蛋白，特别是布鲁氏菌bcsp31重组蛋白。重组抗原蛋白的制备方法是以从布鲁氏菌提取的细菌总DNA为模板，根据布鲁氏菌bcsp31基因的核苷酸全序列设计一对引物进行聚合酶链反应，克隆获得bcsp31蛋白基因，然后转入酵母表达载体，获得重组表达载体，再将其导入酵母表达细菌中，获得重组毕赤酵母表达菌，增殖并进行诱导表达重组毕赤酵母表达菌，经分离纯化得到所用的抗原蛋白。
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公开(公告)号：CN110004240B
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN201910307220.1
申请日：2019-04-17
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一种基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的鸡毒支原体实时荧光试剂盒及其用途，同时还提供了一种检测鸡毒支原体的试纸条试剂盒及其用途。这两种试剂盒均根据鸡毒支原体基因MGA_0878序列设计并筛选出一套各自检测的引物及探针组合，虽然两个试剂盒针对同一靶标序列，但是引物和探针的修饰碱基和检测平台不一致。实验证明这两个试剂盒特异性强、灵敏度高，与qPCR的符合率均为100％，不仅为有效检测和鉴定鸡毒支原体提供了技术手段，而且操作简便、快速、成本低，适用于基层兽医现场诊断，也能够用于鸡毒支原体的科学研究。
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公开(公告)号：CN110305975A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910374763.5
申请日：2019-05-07
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/35
摘要： 本发明公开了一种快速检测鸡滑液囊支原体的RPA试剂盒及其检测方法。该试剂盒包含：含RPA冻干颗粒的反应管，反应缓冲液，醋酸镁，一对引物及一条探针。实验证明本发明的试剂盒灵敏度和特异性与qPCR法相当，整个反应时间在20min内完成，检测结果仅需要通过荧光曲线改变来判定。因此，本发明的试剂盒具有快捷、高效、灵敏等优点，不仅为有效检测和鉴定鸡滑液囊支原体提供了技术手段，而且操作简便、快速、适用于临床兽医现场诊断和对鸡滑液囊支原体的科学研究。
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公开(公告)号：CN110241184A
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201910574966.9
申请日：2019-06-28
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12Q1/04 , C12R1/01
摘要： 本发明公开了一种快速检测鸭疫里默氏杆菌的RPA试剂盒及其检测方法。该试剂盒包含：含RPA冻干颗粒的反应管，反应缓冲液，醋酸镁，一对引物及一条探针。实验证明本发明的试剂盒灵敏度和特异性与qPCR法相当，整个反应时间在15min内完成，检测结果仅需要通过荧光曲线改变来判定。因此，本发明试剂盒具有快捷、高效、灵敏等优点，不仅为有效检测和鉴定鸭疫里默氏杆菌提供了技术手段，而且操作简便、快速，适用于临床兽医现场诊断和对鸭疫里默氏杆菌的科学研究。
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