公开(公告)号：CN111020059A

公开(公告)日：2020-04-17

申请号：CN201911309233.9

申请日：2019-12-18

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 张杰 ,  丁耀忠 ,  张维兵 ,  李彦军 ,  汪洋 ,  李苗苗 ,  李国秀 ,  马炳 ,  刘永生

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的PCR检测方法，根据猪圆环病毒3型(PCV3)的保守基因区段筛选出特异性引物，建立PCR检测方法，所得目的基因扩增片段大小为457bp。建立的PCV3 PCR不与猪圆环病毒2型、1型和2型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪乙脑病毒、古典猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒发生交叉反应，可用以了解样品采集地猪群PCV3的感染情况，经敏感性和特异性检测分析表明建立的PCV3 PCR检测方法具有良好的特异性和敏感性，可用于田间样品的常规检测。采用本发明建立的PCR方法检测了我国2017-2018年11个不同省份不同猪场的总共1402份田间样品，PCV3的阳性检出率为29.48％，具有一定临床应用价值，可用于临床PCV3的检测。

公开(公告)号：CN112176104A

公开(公告)日：2021-01-05

申请号：CN202011070808.9

申请日：2020-10-09

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 张杰 ,  汪洋 ,  丁耀忠 ,  张维兵 ,  李彦 ,  马炳 ,  代军飞 ,  李茜 ,  侯谦 ,  李苗苗 ,  孙跃峰 ,  陈豪泰 ,  刘永生 ,  张永光

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的可视化LAMP检测试剂盒，该试剂盒是包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒以中性红为显色染料，使肉眼直观效果更加鲜明，阳性反应为粉红色，阴性反应为橘黄色，而且还实现了由试剂盒直接提供含有颜料的反应预混缓冲液的需求，这样不仅简化了操作程序，还有效避免污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，不仅能够以从临床样品中提取的DNA为扩增模板，而且还能够直接以全血或者血清为模板扩增，反应结果直接肉眼观察判断，具有良好的特异性和敏感性，需求设备简单(恒温热块即可)，操作便捷，不需要特殊技术人员，适于各种检测环境，尤其是现场使用。

公开(公告)号：CN110951757A

公开(公告)日：2020-04-03

申请号：CN201911168275.5

申请日：2019-11-25

申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所

发明人： 马维民 ,  何继军 ,  李国秀 ,  丁耀忠 ,  张杰 ,  李茜 ,  汪洋 ,  李苗苗 ,  马炳 ,  代军飞 ,  刘永生 ,  张维兵 ,  李小云

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N15/42 ,  C07K14/09

摘要： 本发明公开了一种南非2型口蹄疫病毒VP3基因的原核可溶性表达方法，根据南非2型口蹄疫病毒基因序列，在FMDV SAT2的VP3蛋白编码基因上游直接偶联SUMO促溶表达标签编码基因，然后在SUMO的上游引入6个His标签编码基因，再根据大肠杆菌密码子嗜性，优化HisSUMO-SAT2-VP3基因，重组至PUC57质粒，以HisSUMO-SAT2-VP3-PUC57质粒为模板，设计扩增南非2型口蹄疫病毒VP3基因的特异性引物，PCR扩增后用相同的限制性内切酶酶切目的片段与表达载体，之后将目的基因克隆入pET32a(+)原核表达载体，构建重组质粒pET32a-HisSUMO-VP3，转入大肠杆菌进行表达并对重组蛋白进行纯化。本发明成功构建了pET32a-HisSUMO-VP3原核表达载体，实现了在大肠杆菌中的表达，纯化后的目的蛋白具有较好的反应原性，为后续南非2型口蹄疫病毒亚单位疫苗的组装奠定基础。