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公开(公告)号：CN111778220A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010651533.1
申请日：2020-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , C07K19/00 , A61K39/295 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPV VP2蛋白Loop2区嵌入SAT2 FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVDK)，N端嵌入T细胞表位(NVQEGRRKHTDVAFLLDRST)。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1923OP，克隆到载体pFastBacTMDual上，转化感受态细胞DH10Bac，获得重组杆粒rBacmidNT1L2B，转染sf9细胞，收获重组杆状病毒rBacNT1L2B，用其感染HF细胞，使用间接免疫荧光IFA针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测，具有特异性荧光。We stern-blot针对B、T细胞表位和VP2蛋白进行检测，在67KDa出现一条特异性条带。透射电镜TEM观察，重组蛋白NT1L2B能够自我组装成病毒样颗粒。本发明可应用在为南非2型口蹄疫制备储备疫苗，并能在此基础上达到同时预防南非2型口蹄疫和猪细小病的目的。
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公开(公告)号：CN110862437A
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201911166768.5
申请日：2019-11-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 丁耀忠 , 汪洋 , 李国秀 , 马维民 , 何继军 , 李茜 , 爱斯纳非.科友斯.伍赛特 , 代军飞 , 张杰 , 侯谦 , 马炳 , 李小云 , 刘永生 , 孙跃峰 , 吕建亮 , 邵军军 , 王永录 , 张忠旺 , 张永光
Abstract: 本发明公开了一种南非2型口蹄疫病毒VP1基因的可溶性表达方法，以南非2型口蹄疫病毒基因组(JX014256)为参考序列，在FMDV SAT2的VP1蛋白编码基因上游直接偶联SUMO促溶表达标签编码基因，然后在SUMO的上游引入6个His标签编码基因，再根据大肠杆菌密码子嗜性，优化HisSUMO-SAT2-VP1基因，重组至PUC57质粒，以HisSUMO-SAT2-VP1-PUC57质粒为模板，设计特异性引物；PCR扩增后利用相同的限制性内切酶酶切目的片段与表达载体，将目的基因克隆入pET32a(+)原核表达载体，构建重组质粒pET32a-HisSUMO-VP1，转入大肠杆菌诱导表达，利用镍柱进行纯化。结果表明HisSUMO-VP1蛋白在大肠杆菌中能可溶性表达，纯化后的目的蛋白具有较好的免疫原性。本发明充分利用His与SUMO标签的优点，不仅提高Ni与组氨酸结合的特异性和稳定性，而且提高重组蛋白纯化效率。
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公开(公告)号：CN117224669A
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202310952563.X
申请日：2023-07-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 马旭升 , 李茜 , 辇晓峰 , 尚小粉 , 罗志宽 , 代军飞 , 裴晶晶 , 朱紫祥 , 杨帆 , 曹伟军 , 茹毅 , 冯涛 , 张克山 , 田宏 , 唐静 , 李志煜 , 刘家楠
Abstract: 本发明属于病毒免疫学领域，具体涉及非洲猪瘟病毒MGF360‑21R基蛋白作为免疫诱导剂或者佐剂的应用，同时涉及该蛋白的功能鉴定。具体如：ASFV MGF360‑21R蛋白能够作为免疫应答诱导剂或者佐剂进行应用；ASFV MGF360‑21R可作为炎症应答的激动剂进行应用。本发明构建ASFV MGF360‑21R蛋白的重组慢病毒并感染小鼠后，发现小鼠血清和动物组织的炎性细胞因子产生且分泌上调。本发明为ASFV的防控以及MGF360‑21R蛋白可以作为佐剂激活炎症反应提供了新的支持。
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公开(公告)号：CN116236568A
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202310138735.X
申请日：2023-01-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 马旭升 , 尚小粉 , 辇晓峰 , 李茜 , 朱紫祥 , 茹毅 , 罗志宽 , 杨帆 , 张克山 , 田宏 , 代军飞 , 冯涛 , 王琦 , 曹伟军 , 党文 , 唐静
IPC: A61K39/39 , C12N15/867 , A01K67/027 , A61K39/12 , A61P31/20 , A61P29/00
Abstract: 本发明属于病毒免疫学领域，尤其是涉及非洲猪瘟病毒C717R蛋白作为免疫诱导剂或者佐剂的应用。具体如：ASFV C717R蛋白可作为免疫应答诱导剂或佐剂进行应用；ASFV C717R蛋白还可以作为炎症应答的激活剂进行应用。本发明将ASFV C717R重组慢病毒感染小鼠后，发现小鼠血清和动物组织的炎性细胞因子产生且分泌上调。本发明为为ASFV的防控以及C717R蛋白可以作为佐剂激活炎症反应提供了新的支持。
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公开(公告)号：CN110845580A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911072955.7
申请日：2019-11-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 汪洋 , 丁耀忠 , 李茜 , 张杰 , 爱斯纳非.科友斯.伍赛特 , 代军飞 , 李国秀 , 侯谦 , 马炳 , 刘永生 , 吕建亮 , 邵军军 , 刘新生 , 孙跃峰 , 潘丽 , 张永光
IPC: C07K14/015 , C12N15/35 , C12N15/866 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于基因组装及免疫原性鉴定技术领域，公开了一种猪细小病毒样颗粒的组装及其免疫原性鉴定方法，包括VP2基因的扩增，优化及重组供体质粒的构建；VP2重组穿梭质粒的构建与鉴定；重组杆状病毒的获得与鉴定；Western-blot鉴定VP2蛋白的表达；VP2蛋白的间接免疫荧光鉴定；PPV-AV30病毒纯化及鉴定；病毒样颗粒的组装及鉴定。本发明对蛋白进行翻译后加工修饰，展示目的蛋白的天然构象；本发明成功表达了PPV毒株AV-30的蛋白VP2，并且正确组装成了VLPs，与天然病毒粒子PPV-AV30相似，为下一步研究基于VLPs的亚单位疫苗或者制备嵌合型VLPs奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116236568B
公开(公告)日：2024-07-23
申请号：CN202310138735.X
申请日：2023-01-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 马旭升 , 尚小粉 , 辇晓峰 , 李茜 , 朱紫祥 , 茹毅 , 罗志宽 , 杨帆 , 张克山 , 田宏 , 代军飞 , 冯涛 , 王琦 , 曹伟军 , 党文 , 唐静
IPC: A61K39/39 , C12N15/867 , A01K67/0278 , A61K39/12 , A61P31/20 , A61P29/00
Abstract: 本发明属于病毒免疫学领域，尤其是涉及非洲猪瘟病毒C717R蛋白作为免疫诱导剂或者佐剂的应用。具体如：ASFV C717R蛋白可作为免疫应答诱导剂或佐剂进行应用；ASFV C717R蛋白还可以作为炎症应答的激活剂进行应用。本发明将ASFV C717R重组慢病毒感染小鼠后，发现小鼠血清和动物组织的炎性细胞因子产生且分泌上调。本发明为为ASFV的防控以及C717R蛋白可以作为佐剂激活炎症反应提供了新的支持。
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公开(公告)号：CN111793650A
公开(公告)日：2020-10-20
申请号：CN202010651532.7
申请日：2020-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/866 , C12N15/62 , A61K39/295 , A61K39/135 , A61K39/23 , A61P31/14 , A61P31/20
Abstract: 本发明根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPV VP2蛋白Loop2区和Loop4区后嵌入SAT2FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVDK)，N端嵌入两个T细胞表位(NVQEGRRKHTDVAFLLDRST)串联。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1927OP，克隆到载体pFastBacTMDual上，转化感受态细胞DH10Bac，获得重组杆粒rBacmidN(T1)2L2B4B，转染sf9细胞收获重组杆状病毒rBacN(T1)2L2B4B，用其感染HF细胞，使用间接免疫荧光IFA针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测，具有特异性荧光。Western-blot针对B、T细胞表位和VP2蛋白进行检测，在72KDa出现一条特异性条带。透射电镜TEM观察，重组蛋白N(T1)2L2B4B能够自我组装成病毒样颗粒。本发明旨在为南非2型口蹄疫制备储备疫苗，并能在此基础上达到同时预防南非2型口蹄疫和猪细小病的目的。
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公开(公告)号：CN110305984A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910511586.0
申请日：2019-06-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开一种非洲猪瘟病毒的可视化LAMP检测试剂盒。该试剂盒包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒以中性红染料替代了传统钙黄素，不仅使可视化直观效果更加鲜明，将反应时间缩短至45分钟，而且还实现了由试剂盒直接提供反应预混缓冲液的需求，这样进一步简化了操作程序，更加有效避免污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性、敏感性和稳定性。
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公开(公告)号：CN108823246A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810785057.5
申请日：2018-07-17
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/866 , C12N15/40 , C07K14/08
Abstract: 本发明公开了一种PRRSV的双标记型病毒样颗粒(VLPs)的制备及鉴定方法，涉及生物研究技术领域，制备含有GP5、M和N蛋白编码基因ORF5、ORF6和ORF7的pMD18T重组质粒，为扩增模板，ORF5末端引入Myc标签，ORF6末端引入His标签，重组至双元载体的PpH和Pp10启动子下，获得重组质粒，转入DH10Bac大肠杆菌获得重组杆粒；ORF7与pFastBacHTB载体重组获得重组杆粒。将两种重组杆粒接种SF9细胞，Myc-GP5、His-M和His-N蛋白被成功表达，自动组装成VLPs。为研究GP5、M和N主要结构蛋白功能和开发能够区分感染和免疫的VLPs疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113564276A
公开(公告)日：2021-10-29
申请号：CN202110550305.X
申请日：2021-05-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了FMDV可视化RT‑LAMP检测方法的建立。以合成的39条3D‑T7序列的体外RNA转录本为模板，对RT‑LAMP引物、引物浓度、反应时间、反应温度和显色剂等进行了筛选。建立了FMDV的RT‑LAMP检测方法，总体系为20μL，包括RT‑LAMP缓冲液15.2μL，BstAMV酶混合液1.5μL，外引物F3和B3各0.04μL(100μM)，内引物FIP和BIP各0.5μL(100μM)，环引物Floop和Bloop各0.11μL(100μM)，中性红1μL(500μM)，模板1μL。反应时间55min，反应温度65℃。反应结束后，若反应管溶液变为粉红色判为阳性，若为橘黄色则判为阴性。该方法特异性强，不与BVDV、ORFV、SPPV/GTPV、SVDV、BTV、PRRSV、CSFV、PRV、PPV和PCV等病毒发生反应。建立的FMDV可视化RT‑LAMP方法为基层现场检测奠定了基础，以达到快速诊断FMDV的目的。
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