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公开(公告)号：CN107302911B
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN201610259741.0
申请日：2016-04-25
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： A01N1/02
摘要： 本发明公开了一种用于牛羊食道‑咽部分泌物的保存液及其制备方法和用途，属于生物技术领域。本发明的一种用于牛羊食道‑咽部分泌物的保存液，其pH值为6.8—7.6的磷酸盐缓冲液，稳定剂以及防腐剂组成，其中，所述的磷酸盐缓冲液中还含有氯化钠及/或氯化钾，氯化钠及/或氯化钾的浓度为0.2‑10g/L，所述的稳定剂选自牛血清白蛋白，酪蛋白、马血清、甘油中的一种或多种，所述的防腐剂选自叠氮钠、盘尼西林、青霉素及氯霉素中的一种或多种。与现有技术相比，本发明采用上述原料制成保存液，无毒无刺激性气味，安全性高，保存效果好，能较长时间保存不会变质，不会影响后期O/P液检测效果。
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公开(公告)号：CN112176104A
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN202011070808.9
申请日：2020-10-09
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的可视化LAMP检测试剂盒，该试剂盒是包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒以中性红为显色染料，使肉眼直观效果更加鲜明，阳性反应为粉红色，阴性反应为橘黄色，而且还实现了由试剂盒直接提供含有颜料的反应预混缓冲液的需求，这样不仅简化了操作程序，还有效避免污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，不仅能够以从临床样品中提取的DNA为扩增模板，而且还能够直接以全血或者血清为模板扩增，反应结果直接肉眼观察判断，具有良好的特异性和敏感性，需求设备简单(恒温热块即可)，操作便捷，不需要特殊技术人员，适于各种检测环境，尤其是现场使用。
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公开(公告)号：CN111793722A
公开(公告)日：2020-10-20
申请号：CN202010787407.9
申请日：2020-08-07
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及一步法检测2型猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物探针组和试剂盒，属于病毒检测技术领域。本发明所述引物探针组，包括引物F1、引物F2、引物R和探针，所述引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述探针为在SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的5'端修饰有荧光基团、3'端修饰有猝灭基团的物质。应用本发明所述引物探针组进行检测具有良好的特异性和敏感性，与1型猪繁殖与呼吸综合征没有任何反应，具有很好的临床应用价值。
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公开(公告)号：CN111087452A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN201911309242.8
申请日：2019-12-18
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒2b亚型Cap蛋白的原核可溶性表达方法，以PCV2毒株基因组为参考序列，在PCV2b的Cap蛋白编码基因上游偶联SUMO促溶表达标签编码基因，在SUMO的上游引入6个His标签编码基因，优化基因，重组至PUC57质粒，以重组质粒为模板，设计特异性引物，经PCR扩增后产物克隆入pMAL-C4x原核表达载体，构建重组质粒，转入大肠杆菌进行诱导、纯化。本发明成功构建了pMAL-MBP-HisSUMO-Cap重组表达载体，MBP-HisSUMO-Cap融合蛋白在BL21(DE3)中可实现可溶性表达，纯化后MBP-HisSUMO-Cap融合蛋白作为免疫原，能与PCV2b阳性猪血清、兔抗MBP-tag多克隆抗体和免疫小鼠抗血清均能发生特异性反应，表明其具有较好的免疫原性，为PCV2b诊断试剂盒的研发奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN108508210B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201810149238.9
申请日：2018-02-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一种PRRSV N蛋白的原核可溶性表达方法及间接ELISA抗体检测方法，PRRSV N蛋白的原核可溶性表达方法包括(1)根据大肠杆菌密码子偏嗜性特征，人工优化并合成PRRSV N蛋白编码基因；(2)以MBP作为促溶标签，构建N蛋白原核表达载体；(3)MBP融合N蛋白表达与纯化；再通过间接ELISA抗体检测方法进行特异性试验。本发明以带有MBP标签的PMAL‑C4X作为表达载体，实现了PRRSV N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，诱导培养在接近室温进行，无需加热或降温设备，目的蛋白洗脱采用10mmoL/L麦芽糖溶液，洗脱效果好，用量少，节约成本。本发明以融合N蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强；本发明建立间接ELISA抗体检测方法与IDEXX同类试剂盒的总符合率为90％左右。
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公开(公告)号：CN106435016B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610760228.X
申请日：2016-08-30
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明提供一种快速显色一步法检测猪圆环病毒2型的LAMP试剂盒，该试剂盒包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒在不延长原有1小时反应时间的条件下，实现了将荧光染料直接加入反应管的一步操作，不仅简化了操作程序，解决了含有钙黄素的预混染料对Bst DNA扩增酶的抑制而导致在反应管直接加入荧光染料不显色的根本问题，还有效避免了由于反应结束后二次开盖导致的释放产物形成气溶胶的污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性、敏感性和稳定性。
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公开(公告)号：CN109765368A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910096814.2
申请日：2019-01-31
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/535 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N21/78
摘要： 本发明提供了一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，涉及酶联免疫技术领域，所述试剂盒包括酶标板和酶标二抗；所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被。本发明提供的试剂盒检测口蹄疫病毒2C的抗体，具有高效、灵敏特异性和重复性均良好的优点，该方法操作简便、快速、成本低廉，可以在室温下可视化检测，适合于在临床应用中进行推广，为口蹄疫病毒2C抗体的快速检测提供可靠的技术手段。
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公开(公告)号：CN105861755B
公开(公告)日：2019-03-29
申请号：CN201610398762.0
申请日：2016-06-07
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一组用于快速检测南非型口蹄疫病毒的特异性引物组，所述特异性引物组由1条下游引物和7条上游引物组成；所述下游引物为序列表中序列1所示单链DNA分子，所述上游引物为序列表中序列2‑8所示单链DNA分子；还提供了包含有该引物组的试剂盒。本发明的有益效果为：本发明通过使用特异性复合引物及在一系列质控和阴性、阳性对照的辅助下，从分子水平对SAT FMDV的病毒核酸进行检测，该方法具有简便、经济、快速、灵敏和特异的特点，是可以同时检测三个SAT FMDV的检测技术，实现对SAT FMDV诊断和监控的战略储备，对于防止该些病毒传入我国具有重要的战略意义，同时具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109142727A
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201811178968.8
申请日：2018-10-10
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种O型口蹄疫病毒抗体的可视化快速检测试剂盒及其应用，涉及生物检测技术领域。所述试剂盒包括：O型口蹄疫病毒抗原、包被酶标板、洗涤液、血清和抗体稀释液、底物显色液TMB、辣根过氧化物酶标二抗、终止液、O型口蹄疫病毒标准阴阳性血清；其中，所述酶标板以O型口蹄疫病毒146s包被。可以通过颜色变化来判定结果，溶液是蓝色为阳性，无色为阴性，本发明的用于检测O型口蹄疫病毒的抗体，具有高敏感性、特异性和重复性均良好的优点，且该试剂盒在室温下操作，适用于基层临床可视化检测。
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公开(公告)号：CN108508210A
公开(公告)日：2018-09-07
申请号：CN201810149238.9
申请日：2018-02-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一种PRRSV N蛋白的原核可溶性表达方法及间接ELISA抗体检测方法，PRRSV N蛋白的原核可溶性表达方法包括(1)根据大肠杆菌密码子偏嗜性特征，人工优化并合成PRRSV N蛋白编码基因；(2)以MBP作为促溶标签，构建N蛋白原核表达载体；(3)MBP融合N蛋白表达与纯化；再通过间接ELISA抗体检测方法进行特异性试验。本发明以带有MBP标签的PMAL-C4X作为表达载体，实现了PRRSV N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，诱导培养在接近室温进行，无需加热或降温设备，目的蛋白洗脱采用10mmoL/L麦芽糖溶液，洗脱效果好，用量少，节约成本。本发明以融合N蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强；本发明建立间接ELISA抗体检测方法与IDEXX同类试剂盒的总符合率为90％左右。
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