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公开(公告)号：CN117126871A
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202211569360.4
申请日：2022-12-07
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明提供了弓形虫弱毒株PruΔpp2a‑b的构建方法及其应用，属于生物医药技术领域。本发明通过敲除TgPP2A‑B基因，获得了TgPP2A‑B基因缺失的弓形虫弱毒株，缺失该基因后大量淀粉颗粒在虫体间聚集，且弓形虫丧失形成包囊的能力；TgPP2A‑B基因缺失的弓形虫弱毒株体外增殖速度和致病性较野生株均显著降低；感染TgPP2A‑B基因缺失株后小鼠既不发病也不死亡，在小鼠脑组织中检测不到包囊，对宿主具有较高的安全性；TgPP2A‑B基因缺失的弓形虫弱毒株免疫小鼠后，小鼠的抗体水平显著提高，对高剂量的弓形虫RH速殖子和Pru包囊再次感染均能够提供显著免疫保护效力，可预防弓形虫的再次感染。
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公开(公告)号：CN113403412A
公开(公告)日：2021-09-17
申请号：CN202110703245.0
申请日：2021-06-24
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/6893 , C12Q1/6844 , C12N15/113
摘要： 本发明提供了一种基于等温扩增‑CRISPR/Cas12a技术检测弓形虫DNA的试剂盒及其应用，属于寄生虫检测技术领域。本发明提供了一种用于特异性检测弓形虫DNA的crRNA，核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。同时本发明还提供了检测弓形虫DNA的试剂盒，包括所述crRNA、Cas12a蛋白和荧光报告基团标记的ssDNA。利用Cas12a靶向切割靶标序列和切割任意单链DNA序列的特性，通过crRNA靶向弓形虫DNA序列，激活Cas12a活性，从而Cas12a对FQ‑ssDNA序列进行酶切，发出的荧光信号来指示检测样品中是否含有弓形虫DNA。所述试剂盒具有操作简便，检测快速的特点，具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN116103156A
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202211569357.2
申请日：2022-12-07
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明提供了弓形虫弱毒株PruΔpp2a‑c的构建方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明通过敲除TgPP2A‑C基因，获得了TgPP2A‑C基因缺失的弓形虫弱毒株，缺失该基因后大量淀粉颗粒在虫体间聚集，且弓形虫丧失形成包囊的能力；TgPP2A‑C基因缺失的弓形虫弱毒株体外增殖速度和致病性较野生株均显著降低；感染TgPP2A‑C基因缺失株后小鼠既不发病也不死亡，在小鼠脑组织中检测不到包囊，对宿主具有较高的安全性；TgPP2A‑C基因缺失的弓形虫弱毒株免疫小鼠后，小鼠的抗体水平显著提高，对高剂量的弓形虫RH速殖子和Pru包囊再次感染均能够提供显著免疫保护效力，可预防弓形虫的再次感染。
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公开(公告)号：CN108663514A
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201810476893.5
申请日：2018-05-18
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 云南农业大学
IPC分类号： G01N33/558 , G01N33/68 , G01N33/569
CPC分类号： G01N33/558 , G01N33/56905 , G01N33/6893 , G01N2333/45 , G01N2333/47
摘要： 本发明公开了一种弓形虫纳米胶体碳诊断试纸条及制备方法，该弓形虫纳米胶体碳诊断试纸条包括：吸水垫、硝酸纤维素膜、纳米胶体碳释放垫、样品垫、PVC胶板；该弓形虫纳米胶体碳诊断试纸条的制备方法包括：弓形虫抗原ESA的制备、兔抗ESA血清的制备、纯化兔抗ESA抗体、确定纳米胶体碳ESA溶液的最佳PH值及ESA的用量、纳米胶体碳母液的制备、纳米胶体碳溶液最佳稀释倍数的确定、试纸条的组装，本研究建立的弓形虫病胶体碳诊断试纸条灵敏度和特异性较好，具有操作简单、快速，检测条带清晰，相对于传统的胶体金诊断试纸条制作成本极大降低的优点，适用于临床弓形虫病的快速诊断。
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公开(公告)号：CN106399515A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610867186.X
申请日：2016-09-29
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC分类号： C12Q1/6893 , C12Q1/6844 , C12Q2521/507 , C12Q2565/625
摘要： 本发明公开了弓形虫核酸的快速检测试剂盒，所述试剂盒包括以下成分：RPA引物探针混合液，PBST溶液，测流层析试纸条，RPA冻干酶和RPA反应预混液，并提供了弓形虫核酸的快速检测方法。本发明的有益效果为：本发明是建立在分子生物学基础上的，先基于弓形虫B1基因设计了特定引物和探针，再应用重组酶聚合酶扩增-测流层析的方法制备了快速检测弓形虫核酸的试剂盒，敏感性高于巢式PCR，特异性强，整个过程只需30分钟，结果的判定操作极其简便；得到核酸样品后整个反应过程可以在非实验室环境下进行，不仅适用于临床诊断而且可以应用于食品安全检测、养殖场现场检测、环境评估等多种领域。
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公开(公告)号：CN103122382A
公开(公告)日：2013-05-29
申请号：CN201310003967.0
申请日：2013-01-06
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了一种土壤弓形虫检测试剂盒及其制备方法，包括10×PCR反应液、引物混合物、嗜热DNA聚合酶、牛血清白蛋白、标准阳性模板，其特征在于，所述引物混合物包括：0.2pmol上游引物TX1、10pmol中间引物TX2、10pmol下游引物TX3。本发明是建立在分子生物学基础上，基于弓形虫高度保守的529bp重复序列基因，应用半套式PCR的方法检测土壤弓形虫的试剂盒，具有敏感性高、特异性强、操作简单等特点，解决了土壤中弓形虫卵囊检测的检出率低，工作量大，操作复杂及诊断技术不足等缺陷，可以用于检测土壤样本是否含有弓形虫卵囊并可进行土壤弓形虫分子流行病学调查，对周围环境进行及时监测。
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公开(公告)号：CN101974634B
公开(公告)日：2012-08-01
申请号：CN201010526397.X
申请日：2010-10-30
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明是一种弓形虫快速检测试剂盒及其制备方法，建立在分子生物学基础上，基于弓形虫高度保守的三磷酸核苷水解酶基因，应用环介导等温扩增(LAMP)的方法快速检测弓形虫的试剂盒。该试剂盒包括LAMP反应液、引物、Bst DNA聚合酶、显色剂、标准阳性模板以及dd H2O。本发明的试剂盒具有敏感性高、特异性强、反应迅速、操作简单等特点，不需要特殊的仪器设备，解决了弓形虫病检测时间长、工作量大、操作复杂等缺陷。可以用于检测临床样本是否携带弓形虫，以及弓形虫病的早期诊断和分子流行病学调查。
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公开(公告)号：CN118006605A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410104950.2
申请日：2024-01-25
IPC分类号： C12N15/113 , C12Q1/6888 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明提供了一种基于RAA结合CRISPR‑Cas12a检测棘球绦虫用crRNA及其试剂盒和应用，属于医学检测技术领域。一种基于RAA结合CRISPR‑Cas12a检测棘球绦虫用crRNA，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了一种检测试剂盒，包括所述crRNA、Cas12a、ssDNA‑FQ和RAA扩增用引物。本发明提供的试剂盒具有良好的检测特异性和较高的灵敏度，与PCR扩增方法相比，具有较明显的优势，为临床检测细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的感染提供了新手段。
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