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公开(公告)号:CN101082626A
公开(公告)日:2007-12-05
申请号:CN200710126174.2
申请日:2007-06-14
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开一种用于检测Asial型口蹄疫病毒的ELISA试剂盒,它包括可与待测样品结合的固体支持物、包被于可与待测样品结合的固体支持物上的Asial型口蹄疫病毒的单克隆抗体、作为二抗的用Asial型口蹄疫病毒免疫豚鼠得到的多克隆抗体,及用酶标记的兔抗豚鼠IgG、标准血清、无色底物、和终止液;本发明还公开了这种试剂盒的制备方法。
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公开(公告)号:CN1603831A
公开(公告)日:2005-04-06
申请号:CN03160188.X
申请日:2003-09-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/561 , G01N33/577 , G01N33/68 , C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种畜牧兽医领域中利用基因工程表达的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC鉴别口蹄疫病毒感染的牲畜与经免疫接种口蹄疫病毒灭活疫苗的牲畜之间接ELISA方法。
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公开(公告)号:CN101270155B
公开(公告)日:2011-04-27
申请号:CN200810105955.8
申请日:2008-05-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/09 , C12N15/42 , C12N15/63 , C12N5/10 , C12N15/866 , A61K39/135 , A61P31/14 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装口蹄疫病毒空衣壳的方法。本发明的在昆虫细胞中组装口蹄疫病毒空衣壳的方法,包括以下步骤:1)将改造后的P12A基因和口蹄疫病毒的非结构蛋白基因3C通过杆状病毒载体导入细菌内进行重组,得到重组杆状病毒A;用重组杆状病毒A的DNA转染昆虫细胞,获得口蹄疫病毒空衣壳。本发明首次在昆虫细胞中组装成了完整的FMDV空衣壳,为基因工程亚单位疫苗和新型诊断试剂的研发奠定了基础。
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公开(公告)号:CN1240848C
公开(公告)日:2006-02-08
申请号:CN200310103412.X
申请日:2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明提供了一种检测猪瘟病毒的检测方法,步骤包括,按照扩增猪瘟病毒基因的方法,设计4条特异性寡核苷酸引物(C1~C4)和1条生物素标记的杂交捕获探针(C5);从被检样品中按提取猪瘟病毒RNA的方式提取RNA;以提取的RNA为模板,反转录合成cDNA;用所述4条特异性寡核苷酸引物(C1~C4),进行套式聚合酶链式扩增反应扩增,并将其产物用地高辛标记的dUTP标记;将所述探针与扩增产物杂交并捕获到微载体板上;加入过氧化物酶标记的抗地高辛抗体和底物进行免疫显色;测定405nm OD值(A405)并判读结果,A405≥0.1者为阳性。该方法可用于猪瘟的早期诊断和隐性带毒者的查毒。
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公开(公告)号:CN1540350A
公开(公告)日:2004-10-27
申请号:CN200310103413.4
申请日:2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/573
Abstract: 本发明的目的在于提供一种以重组蛋白为抗原建立间接酶联免疫吸附(ELISA)检测抗体的方法。该方法步骤包括,将猪瘟病毒结构蛋白E2基因中编码抗原的基因片段连接到质粒pGEM-T Easy载体上,获得重组质粒;将重组质粒纯化,与表达载体pPROEX-HTb相连,并转入大肠杆菌;培养转化的大肠杆菌,使带有所述基因片段的表达载体在大肠杆菌中表达;将表达的蛋白经包涵体提取、变性后,纯化、复性;以复性后的融合蛋白为抗原,间接酶联免疫吸附检测猪血清样本中抗体;根据测定值对样本的抗性进行判断。该方法具有成本低廉,操作简单,易于培养,生产周期短等优点。
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公开(公告)号:CN101270155A
公开(公告)日:2008-09-24
申请号:CN200810105955.8
申请日:2008-05-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/09 , C12N15/42 , C12N15/63 , C12N5/10 , C12N15/866 , A61K39/135 , A61P31/14 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装口蹄疫病毒空衣壳的方法。本发明的在昆虫细胞中组装口蹄疫病毒空衣壳的方法,包括以下步骤:1)将改造后的P12A基因和口蹄疫病毒的非结构蛋白基因3C通过杆状病毒载体导入细菌内进行重组,得到重组杆状病毒A;用重组杆状病毒A的DNA转染昆虫细胞,获得口蹄疫病毒空衣壳。本发明首次在昆虫细胞中组装成了完整的FMDV空衣壳,为基因工程亚单位疫苗和新型诊断试剂的研发奠定了基础。
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公开(公告)号:CN100371342C
公开(公告)日:2008-02-27
申请号:CN200410000102.X
申请日:2004-01-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明主要涉及口蹄疫病毒感染性cDNA及其制备方法。本发明公开了特别是O型口蹄疫病毒的感染性cDNA及其制备方法、从该感染性cDNA转录的RNA、包含该感染性cDNA的宿主细胞等。病毒poly(C)序列是通过化学合成而获得并通过利用天然限制性位点来组装的。口蹄疫病毒感染性cDNA可用于了解基因的功能、了解病毒的致病机理和基因组的复制、表达调控机制、通基因过缺失技术制备弱毒株疫苗和开发新型的口蹄疫疫苗等。
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公开(公告)号:CN1640884A
公开(公告)日:2005-07-20
申请号:CN200410000102.X
申请日:2004-01-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明主要涉及口蹄疫病毒感染性cDNA及其制备方法。本发明公开了特别是O型口蹄疫病毒的感染性cDNA及其制备方法、从该感染性cDNA转录的RNA、包含该感染性cDNA的宿主细胞等。病毒poly(C)序列是通过化学合成而获得并通过利用天然限制性位点来组装的。口蹄疫病毒感染性cDNA可用于了解基因的功能、了解病毒的致病机理和基因组的复制、表达调控机制、通基因过缺失技术制备弱毒株疫苗和开发新型的口蹄疫疫苗等。
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公开(公告)号:CN1539989A
公开(公告)日:2004-10-27
申请号:CN200310103408.3
申请日:2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供一种生产猪瘟疫苗用抗原蛋白的方法,具体步骤包括:从猪瘟毒株提取病毒RNA,经反转录获得猪瘟病毒免疫基因E2;以E2基因为模板,进行聚合酶链反应,同时,根据毕赤酵母对密码子的偏爱性对E2基因进行密码子优化,然后通过酶切位点插入到毕赤酵母表达载体;将重组表达载体导入毕赤酵母菌,筛选出重组毕赤酵母菌;鉴定重组酵母菌的表达产物,并检测表达产物的免疫活性,确定入选的重组酵母菌;对选好的重组酵母菌的培养条件进行试验分析,选择出优化培养条件;在优化培养条件下培养重组酵母菌,生产疫苗用抗原蛋白。
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公开(公告)号:CN1539976A
公开(公告)日:2004-10-27
申请号:CN200310103414.9
申请日:2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明的目的在于建立一个适合我国猪瘟病毒情况的猪瘟病毒的基因操作技术平台。为了达到该目的,本发明的猪瘟病毒cDNA,是以猪瘟病毒RNA为模板,反转录合成的cDNA;该cDNA的5’端上游具有T7 RNA聚合酶启动子,3’末端具有单一的限制性酶切位点。构建猪瘟病毒感染性cDNA的方法步骤包括:根据猪瘟病毒RNA设计反转录用带有酶切位点的特异性引物;以所述RNA为模板,反转录合成cDNA;分段扩增所述cDNA各片段;将扩增后的cDNA各片段分别克隆入质粒载体;将所述cDNA各片段连接,构成带有基因组全长cDNA的质粒载体;纯化回收全长cDNA。
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