一种检测猪瘟病原的方法

    公开(公告)号:CN1240848C

    公开(公告)日:2006-02-08

    申请号:CN200310103412.X

    申请日:2003-10-31

    Abstract: 本发明提供了一种检测猪瘟病毒的检测方法,步骤包括,按照扩增猪瘟病毒基因的方法,设计4条特异性寡核苷酸引物(C1~C4)和1条生物素标记的杂交捕获探针(C5);从被检样品中按提取猪瘟病毒RNA的方式提取RNA;以提取的RNA为模板,反转录合成cDNA;用所述4条特异性寡核苷酸引物(C1~C4),进行套式聚合酶链式扩增反应扩增,并将其产物用地高辛标记的dUTP标记;将所述探针与扩增产物杂交并捕获到微载体板上;加入过氧化物酶标记的抗地高辛抗体和底物进行免疫显色;测定405nm OD值(A405)并判读结果,A405≥0.1者为阳性。该方法可用于猪瘟的早期诊断和隐性带毒者的查毒。

    一种诊断猪瘟抗体的间接酶联免疫吸附测定方法

    公开(公告)号:CN1540350A

    公开(公告)日:2004-10-27

    申请号:CN200310103413.4

    申请日:2003-10-31

    Abstract: 本发明的目的在于提供一种以重组蛋白为抗原建立间接酶联免疫吸附(ELISA)检测抗体的方法。该方法步骤包括,将猪瘟病毒结构蛋白E2基因中编码抗原的基因片段连接到质粒pGEM-T Easy载体上,获得重组质粒;将重组质粒纯化,与表达载体pPROEX-HTb相连,并转入大肠杆菌;培养转化的大肠杆菌,使带有所述基因片段的表达载体在大肠杆菌中表达;将表达的蛋白经包涵体提取、变性后,纯化、复性;以复性后的融合蛋白为抗原,间接酶联免疫吸附检测猪血清样本中抗体;根据测定值对样本的抗性进行判断。该方法具有成本低廉,操作简单,易于培养,生产周期短等优点。

    一种生产猪瘟疫苗用抗原蛋白的方法

    公开(公告)号:CN1539989A

    公开(公告)日:2004-10-27

    申请号:CN200310103408.3

    申请日:2003-10-31

    Abstract: 本发明提供一种生产猪瘟疫苗用抗原蛋白的方法,具体步骤包括:从猪瘟毒株提取病毒RNA,经反转录获得猪瘟病毒免疫基因E2;以E2基因为模板,进行聚合酶链反应,同时,根据毕赤酵母对密码子的偏爱性对E2基因进行密码子优化,然后通过酶切位点插入到毕赤酵母表达载体;将重组表达载体导入毕赤酵母菌,筛选出重组毕赤酵母菌;鉴定重组酵母菌的表达产物,并检测表达产物的免疫活性,确定入选的重组酵母菌;对选好的重组酵母菌的培养条件进行试验分析,选择出优化培养条件;在优化培养条件下培养重组酵母菌,生产疫苗用抗原蛋白。

    猪瘟病毒感染性cDNA及其构建方法

    公开(公告)号:CN1539976A

    公开(公告)日:2004-10-27

    申请号:CN200310103414.9

    申请日:2003-10-31

    Abstract: 本发明的目的在于建立一个适合我国猪瘟病毒情况的猪瘟病毒的基因操作技术平台。为了达到该目的,本发明的猪瘟病毒cDNA,是以猪瘟病毒RNA为模板,反转录合成的cDNA;该cDNA的5’端上游具有T7 RNA聚合酶启动子,3’末端具有单一的限制性酶切位点。构建猪瘟病毒感染性cDNA的方法步骤包括:根据猪瘟病毒RNA设计反转录用带有酶切位点的特异性引物;以所述RNA为模板,反转录合成cDNA;分段扩增所述cDNA各片段;将扩增后的cDNA各片段分别克隆入质粒载体;将所述cDNA各片段连接,构成带有基因组全长cDNA的质粒载体;纯化回收全长cDNA。

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