公开(公告)号：CN116694683A

公开(公告)日：2023-09-05

申请号：CN202310650994.0

申请日：2023-06-02

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 刘志国 ,  牟玉莲 ,  李奎

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N5/10

摘要： 本发明提供一种靶向猪COL1A1基因下游序列的CRISPR‑Cas9系统及其应用。该系统包含特异性识别猪COL1A1基因3`侧翼区的gRNA以及用于将外源序列整合到该位点的供体载体。本发明提供的gRNA能够识别猪COL1A1基因3`侧翼区如SEQ ID NO：1所示的靶序列。通过所述gRNA的介导，能够使该区域特定位置产生双链断裂，切割效率可达38.2％，通过同时转入本发明提供的Donor‑1、Donor‑2或者Donor‑3载体，可实现外源序列在该位置的定点整合。

公开(公告)号：CN113278618B

公开(公告)日：2022-12-20

申请号：CN202110722887.5

申请日：2021-06-28

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  牟玉莲 ,  刘志国 ,  樊自尧 ,  向光明

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体而言，提供了一种特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用。特异性识别猪COL1A1基因的gRNA中负责识别靶片段区域的核苷酸序列为SEQ IDNO.1所示序列，本发明提供的gRNA能够识别猪COL1A1基因编码区下游如SEQ ID NO.5所示的靶序列。通过所述gRNA的介导，能够使Cas9靶向猪基因组上COL1A1基因的第51个外显子末端产生双链断裂，切割效率可达22％，进而实现对COL1A1基因进行编辑，如氨基酸的修饰、替换，或者在该位点插入外源基因表达框，实现外源基因的稳定、高效表达。

公开(公告)号：CN113278618A

公开(公告)日：2021-08-20

申请号：CN202110722887.5

申请日：2021-06-28

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  牟玉莲 ,  刘志国 ,  樊自尧 ,  向光明

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体而言，提供了一种特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用。特异性识别猪COL1A1基因的gRNA中负责识别靶片段区域的核苷酸序列为SEQ IDNO.1所示序列，本发明提供的gRNA能够识别猪COL1A1基因编码区下游如SEQ ID NO.5所示的靶序列。通过所述gRNA的介导，能够使Cas9靶向猪基因组上COL1A1基因的第51个外显子末端产生双链断裂，切割效率可达22％，进而实现对COL1A1基因进行编辑，如氨基酸的修饰、替换，或者在该位点插入外源基因表达框，实现外源基因的稳定、高效表达。

公开(公告)号：CN110257381B

公开(公告)日：2020-12-15

申请号：CN201910660844.1

申请日：2019-07-22

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  牟玉莲 ,  徐奎 ,  王晓朋 ,  刘志国 ,  刘颖

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/90

摘要： 本发明提供了一种特异性识别猪CD13基因的成套sgRNA及其编码DNA、试剂盒和应用，涉及基因工程技术领域。该成套sgRNA包括sgRNA‑L‑1和sgRNA‑R‑2，其中述sgRNA‑L‑1含有负责识别靶片段的如SEQ ID NO.1所示序列；sgRNA‑R‑2含有负责识别靶片段的如SEQ ID NO.2所示序列。该成套sgRNA特异性识别猪CD13基因的第二外显子，能有效减少CRISPR/Cas9系统引起的脱靶现象，减少非特异性切割对基因组带来的不利影响。

公开(公告)号：CN111647604A

公开(公告)日：2020-09-11

申请号：CN202010615996.2

申请日：2020-06-29

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  牟玉莲 ,  刘志国 ,  樊自尧 ,  向光明

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877

摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体而言，提供了一种特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用。特异性识别猪COL1A1基因的gRNA中负责识别靶片段区域的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示序列，本发明提供的gRNA能够识别猪COL1A1基因编码区下游如SEQ ID NO.5所示的靶序列。通过所述gRNA的介导，能够使Cas9靶向猪基因组上COL1A1基因的第51个外显子末端产生双链断裂，切割效率可达22％，进而实现对COL1A1基因进行编辑，如氨基酸的修饰、替换，或者在该位点插入外源基因表达框，实现外源基因的稳定、高效表达。

公开(公告)号：CN111534519A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010453632.9

申请日：2020-05-26

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 刘志国 ,  牟玉莲 ,  李奎

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

摘要： 本发明提供了识别猪eIF4G1基因的sgRNA及其编码DNA和应用。该sgRNA特异性识别猪eIF4G1基因的sgRNA识别猪eIF4G1基因的第16外显子，且用于CRISPR/Cas9系统，含有如序列1、序列2和序列3所示的负责识别靶片段的序列。本发明提供的特异性识别猪eIF4G1基因的sgRNA能够特异性识别猪eIF4G1基因的第16外显子，且本发明提供的sgRNA用于CRISPR/Cas9系统。本发明通过实验发现，该sgRNA配合CRISPR/Cas9系统，敲除效率分别为70％、45％和50％，能够高效的对猪eIF4G1基因进行基因编辑操作，可实现猪细胞或者个体的基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。

公开(公告)号：CN106676136B

公开(公告)日：2019-11-29

申请号：CN201611270696.5

申请日：2016-12-30

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 刘志国 ,  李奎 ,  牟玉莲 ,  郑新民 ,  毕延震

IPC分类号： C12N15/877 ,  C12N5/071

摘要： 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法。本发明提供了一种构胚胎培养液，其中含有50nM BIX‑01294和0.5nM毛壳素。所述胚胎培养液可以用来培养重构胚胎和/或制备用于培养重构胚胎的试剂盒。本发明通过在PZM‑3培养液中添加一定浓度的BIX‑01294和毛壳素联合处理早期克隆胚胎，能显著提高克隆胚胎的囊胚率和囊胚细胞数，显著提高猪克隆胚胎的发育效率，比单独使用BIX‑01294或者毛壳素处理的效果更好，本发明对提高猪体细胞核移植技术的整体效率有重要意义。

公开(公告)号：CN110257381A

公开(公告)日：2019-09-20

申请号：CN201910660844.1

申请日：2019-07-22

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  牟玉莲 ,  徐奎 ,  王晓朋 ,  刘志国 ,  刘颖

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/90

摘要： 本发明提供了一种特异性识别猪CD13基因的成套sgRNA及其编码DNA、试剂盒和应用，涉及基因工程技术领域。该成套sgRNA包括sgRNA-L-1和sgRNA-R-2，其中述sgRNA-L-1含有负责识别靶片段的如SEQ ID NO.1所示序列；sgRNA-R-2含有负责识别靶片段的如SEQ ID NO.2所示序列。该成套sgRNA特异性识别猪CD13基因的第二外显子，能有效减少CRISPR/Cas9系统引起的脱靶现象，减少非特异性切割对基因组带来的不利影响。

公开(公告)号：CN106591374B

公开(公告)日：2019-08-09

申请号：CN201611270683.8

申请日：2016-12-30

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  刘志国 ,  牟玉莲 ,  郑新民 ,  毕延震

IPC分类号： C12N15/877 ,  C12N5/071

摘要： 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。本发明提供了毛壳素的应用，为如下(a1)‑(a5)中的至少一种：(a1)制备用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液；(a2)制备用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液；(a3)培养用于动物体细胞核移植的供核细胞；(a4)培养用于动物体细胞核移植的重构胚胎；(a5)促进动物体细胞核移植中的重构胚形成囊胚。本发明通过利用小分子药物毛壳素对体细胞核移植中的供核细胞或者重构胚胎进行处理，促进体细胞核移植重编程的发生，显著提高克隆胚胎的囊胚发育率和囊胚细胞数，最终提高猪体细胞核移植技术的整体效率。本发明对提高猪体细胞核移植技术的整体效率有重要意义。

公开(公告)号：CN105950625A

公开(公告)日：2016-09-21

申请号：CN201610390926.5

申请日：2016-06-03

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  刘志国 ,  牟玉莲 ,  魏迎辉 ,  郑新民

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85

CPC分类号： C12N15/1136 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/475 ,  C12N15/85 ,  C12N2310/10 ,  C12N2800/107 ,  C12N2800/80

摘要： 本发明公开了一对特异性识别猪MSTN基因启动子的sgRNA及其编码DNA与应用。本发明提供成套sgRNA，由sgRNA‑L‑1和sgRNA‑R‑2组成；所述sgRNA‑L‑1中识别靶序列的片段的核苷酸序列为序列1；所述sgRNA‑R‑2中识别靶序列的片段的核苷酸序列为序列2。本发明能用于敲除猪基因组中MSTN基因启动子上的MEF3因子结合区，能促进猪肌肉细胞的发育，增加猪的肌肉含量。