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公开(公告)号：CN108588011B
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN201810432524.6
申请日：2018-05-08
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明提供了一种提高玻璃化冷冻牛卵母细胞受精能力的方法。本发明在玻璃化冷冻处理前，将牛卵母细胞采用含有钆和CLC的溶液联合处理，再进行玻璃化冷冻；解冻后采用甲基化‑β‑环糊精处理，而后进行体外受精。结果表明，该方法能够显著提高玻璃化冷冻牛卵母细胞的卵裂率和囊胚率，并且高于新鲜牛卵母细胞的体外受精效率，具有广泛的应用前景，值得推广。
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公开(公告)号：CN112941108A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110520380.1
申请日：2021-05-13
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种具有无角Pc位点纯合基因型的荷斯坦牛的制备方法。本发明针对牛无角Pc位点设计sgRNA并连接到pX458载体，并与含有Pc片段及靶位点两侧约800bp的同源序列左臂和右臂的同源重组片段载体共转染至荷斯坦种公牛的耳缘成纤维细胞中，将Pc片段定点插入到耳缘成纤维细胞基因组中，筛选获得发生双等位Pc位点定点整合的纯合无角基因型的体细胞。进一步以获得的无角Pc位点纯合基因型体细胞为核供体细胞，通过体细胞核移植技术培育具有无角Pc位点纯合基因型的荷斯坦牛。本发明通过实验筛选获得了定点插入效率最佳的sgRNA，并利用该sgRNA获得了双等位Pc位点插入的纯合无角基因型体细胞株，为培育无角牛提供育种材料。
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公开(公告)号：CN103898046A
公开(公告)日：2014-07-02
申请号：CN201410073635.4
申请日：2014-02-28
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC分类号： C12N5/073
摘要： 本发明提供一种专用于牛体外受精胚胎的培养液，所述培养液中含NaCl109.0-110mM、KCl2.9-3.1mM、NaHCO326.0-26.5mM、MgCl2·6H2O0.5-1.0mM、KH2PO31.0-1.3mM、丙酮酸钠0.4mM、葡萄糖1.5mM、半乳糖酸钙5mM、10v/v%胎牛血清、L-谷氨酰胺1mM、2v/v%必需氨基酸、1v/v%非必须氨基酸和谷胱甘肽1-10mM。将牛体外受精胚胎置于上述培养液中进行体外培养，结果显示明显优于未添加GSH的对照组，提高了囊胚发育率及胚胎质量，降低体外生产胚胎的成本，为牛IVF技术应用于实践提供实验基础，可大大加速遗传育种进程。
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公开(公告)号：CN102485886A
公开(公告)日：2012-06-06
申请号：CN201010580904.8
申请日：2010-12-03
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 一种快速建立转基因阳性细胞系的方法。本发明公布了一种快速建立转基因阳性细胞系的方法。该方法将慢病毒与流式细胞仪的优点结合起来，首先将目的基因插入带EGFP基因的慢病毒穿梭质粒中，包装病毒，浓缩病毒颗粒，将病毒颗粒感染细胞，经2次流式细胞仪分选，即可得到稳定遗传的转基因阳性细胞系，阳性率达99％。该方法不仅缩短建立阳性细胞系的时间，而且可避免抗性基因带来的潜在危害，解决了目前建转基因细胞系难的问题。该发明尤其对建立体外培养代数较少，活性差或不适合抗性筛选的转基因细胞系具有重要的实用价值，可加快转基因动物及基因功能研究。
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公开(公告)号：CN101724700A
公开(公告)日：2010-06-09
申请号：CN200910242827.2
申请日：2009-12-17
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明提供了一种检测牛肌肉生长抑制素基因(myostatin)第三外显子单核苷酸多态性(SNP)的快速检测方法，该方法针对myostatin基因第三外显子的G→A突变，设计了分别扩增G938A单碱基多态位点上游序列和下游序列的两组PCR引物对，其中各有一条为针对突变位点的错配引物，该引物的3′末端位于突变位点上。利用所述引物，不同牛DNA样品可以得到不同扩增结果，从而判断牛myostatin基因第三外显子的多态性。本发明方法成本低廉、操作简单、快速、准确并适合于推广应用，对快速准确地进行肉牛的标记辅助选择，加快肉牛选育进程及分子生物学领域快速的PCR检测方法研究有着重要意义。
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公开(公告)号：CN118480498A
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410722009.7
申请日：2024-06-05
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC分类号： C12N5/075
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种牛腔前卵泡和小腔卵泡的体外培养方法，其包括步骤：选取满足设定条件的牛卵巢，对牛卵巢进行预处理；将预处理后的牛卵巢的皮质部分横向切分成组织薄片，使用含有1％双抗的PBS缓冲液多次清洗组织薄片，将处理好的组织薄片放置于基础培养液中；将组织薄片切割成组织块，使用含有1％双抗的PBS缓冲液多次清洗组织块，将处理好的组织块放置于卵泡培养液中；挑选带有腔前卵泡的第一组织块、带有小腔卵泡的第二组织块分别放入对应的卵泡培养液中并置于37.5℃和5％CO2的培养箱内培养，定期进行半量换液。该牛腔前卵泡和小腔卵泡的体外培养方法的目的是解决牛腔前卵泡体外培养的效率较低的问题。
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公开(公告)号：CN103667179B
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201310611835.6
申请日：2013-11-26
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC分类号： C12N5/073
摘要： 本发明属于细胞领域，公开了一种诱导牛胎儿成纤维细胞重编程的方法。本发明所述方法为牛胎儿成纤维细胞经毛地黄皂苷溶液透化处理后与爪蟾卵母细胞抽提物共孵育，用含2mM CaCl2的全培养基封闭细胞膜上的可逆孔道，然后抽提物处理培养基培养诱导牛胎儿成纤维细胞重编程获得牛胎儿成纤维多能干细胞。本发明所述方法高效、稳定、安全。本发明所述牛胎儿成纤维多能干细胞碱性磷酸酶染色呈阳性，组蛋白H3K9乙酰化程度降低，有Oct‑4蛋白及多能性标志基因Oct‑4、Nanog的表达，表明牛胎儿成纤维细胞发生了重编程，细胞基因表达方式发生改变，表现干细胞特性，恢复部分发育全能性，可作为核供体制备克隆胚胎进行体细胞克隆。
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公开(公告)号：CN104800834A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201410033320.7
申请日：2014-01-23
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明提供一种新型的牛超排缓释剂，所述缓释剂为5.0-10.0mg/mL的透明质酸溶液。将本发明的牛超数排卵缓释剂与FSH联合使用，延长了FSH作用时间，简化了牛超数排卵程序，由4天8次注射减少为4天2次注射，超排效率得到提高，能够获得与常规超排一致的超排效果，此法操作方便，提高了超排效率，便于在牛场现场操作及推广使用。
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公开(公告)号：CN101724700B
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN200910242827.2
申请日：2009-12-17
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明提供了一种检测牛肌肉生长抑制素基因(myostatin)第三外显子单核苷酸多态性(SNP)的快速检测方法，该方法针对myostatin基因第三外显子的G→A突变，设计了分别扩增G938A单碱基多态位点上游序列和下游序列的两组PCR引物对，其中各有一条为针对突变位点的错配引物，该引物的3’末端位于突变位点上。利用所述引物，不同牛DNA样品可以得到不同扩增结果，从而判断牛myostatin基因第三外显子的多态性。本发明方法成本低廉、操作简单、快速、准确并适合于推广应用，对快速准确地进行肉牛的标记辅助选择，加快肉牛选育进程及分子生物学领域快速的PCR检测方法研究有着重要意义。
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公开(公告)号：CN101892309B
公开(公告)日：2012-12-19
申请号：CN201010182747.5
申请日：2010-05-19
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及一种检测牛或牛早期胚胎性别的引物及其应用。利用牛牙釉基因在两个性染色体上的等位基因存在序列长度多态特点，在相应位点上设计了一对引物，所述引物包括SEQ ID NO.1和2所示的核苷酸序列，本发明利用上述引物采用快速PCR方法对牛早期胚胎进行扩增检测，可在雄性胚胎中检测到长约395bp的Y染色体特异产物条带和长约458bp的X染色体特异产物条带，但只能在雌性胚胎中检测到长约458bp的X染色体特异产物条带。本方法只通过一对引物的PCR扩增，在任意胚胎细胞中均能扩增出性别特异PCR产物，不需设计内标引物，即可实现对被检个体的性别鉴定，成本低廉，操作简便且快速、准确，避免了传统双重PCR方法和巢式PCR方法的复杂操作和较复杂扩增条件的摸索。
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