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公开(公告)号：CN103215226A
公开(公告)日：2013-07-24
申请号：CN201210543400.8
申请日：2012-12-16
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N5/0793 , C12N5/0775 , C12N15/11 , C12N15/861 , C12N7/01
摘要： Lmx1a介导的与神经干细胞共培养诱导rASCs为DA能神经元的方法，属于诱导干细胞替代缺损的神经元细胞治疗帕金森氏病的方法。本发明步骤有构建Lmx1a基因克隆及重组质粒，构建与包装重组腺病毒Ad-Lmx1a，将感染Ad-Lmx1a的rASCs与NSCs共培养分化为DA能神经元；以及rASCs和NSCs传代细胞的培养等。本发明诱导的神经元样细胞能分化出表达多巴胺能神经元细胞蛋白标志物，且诱导后的细胞可传导电信号或分泌神经递质，证明诱导细胞为神经元细胞。
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公开(公告)号：CN101555485A
公开(公告)日：2009-10-14
申请号：CN200910094460.4
申请日：2009-05-15
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所 , 昆明云健制药有限公司
IPC分类号： C12N15/70 , C12P21/02 , C07K14/635 , C07K1/14 , C12R1/19
摘要： 重组人甲状旁腺激素(1－84)非融合表达及规模化制备方法，本发明属于基因工程，包括发酵培养基、发酵参数、菌体收集、重组人甲状旁腺激素蛋白提取与纯化以及该蛋白的生物活性检测，本发明诱导表达起始时间为8小时，一次发酵时间为12小时，所收获湿菌重量与发酵液体积比为21.4g∶1L，重组人PTH(1－84)表达量约占菌体总量的25％；经层析柱纯化可获得大于95％的纯度，得率约为湿菌10mg/L发酵液，并建立了OD450nm条件下重组人PTH(1－84)蛋白与cAMP浓度关系方程。
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公开(公告)号：CN103275935B
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201210531688.7
申请日：2012-12-12
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N5/0793 , C12N5/0775 , C12N15/11 , C12N15/861 , C12N7/01
摘要： SHH/Lmx1a信号通路调控NTN修饰的rASCs分化多巴胺能神经元的方法，属于生物医学方法。本发明通过PCR分别获得Lmx1a基因和嵌合NTN基因的编码序列，经同源重组在HEK-293细胞中分别包装重组腺病毒Ad-Lmx1a和Ad-NTN。再将Ad-Lmx1a感染rASCs，用SHH/FGF-8等细胞因子将rASCs诱导至待命状态，再感染Ad-NTN，加入B27，N2 supplement，bFGF等诱导剂。本发明显著提高rASCs向神经元细胞分化的潜能，相关转录因子能应用于帕金森氏病的未来细胞替代治疗中。
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公开(公告)号：CN103275935A
公开(公告)日：2013-09-04
申请号：CN201210531688.7
申请日：2012-12-12
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N5/0793 , C12N5/0775 , C12N15/11 , C12N15/861 , C12N7/01
摘要： SHH/Lmx1a信号通路调控NTN修饰的rASCs分化多巴胺能神经元的方法，属于生物医学方法。本发明通过PCR分别获得Lmx1a基因和嵌合NTN基因的编码序列，经同源重组在HEK-293细胞中分别包装重组腺病毒Ad-Lmx1a和Ad-NTN。再将Ad-Lmx1a感染rASCs，用SHH/FGF-8等细胞因子将rASCs诱导至待命状态，再感染Ad-NTN，加入B27，N2supplement，bFGF等诱导剂。本发明显著提高rASCs向神经元细胞分化的潜能，相关转录因子能应用于帕金森氏病的未来细胞替代治疗中。
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公开(公告)号：CN116904399A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202210683202.5
申请日：2022-06-16
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/12 , C12N7/00 , A61K39/125 , A61P31/14
摘要： 本发明提供了一种稳定表达人源KREMEN1受体的Vero细胞及其应用，本发明使用慢病毒技术，在非洲绿猴肾细胞（Vero）中过表达人KREMEN1基因，构建了稳定表达人源KREMEN1（hKREMEN1）受体的新型Vero细胞。实验证明：柯萨奇病毒A10在该细胞系上比在原始Vero细胞具有更优的增殖特性。
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公开(公告)号：CN114717265A
公开(公告)日：2022-07-08
申请号：CN202210388646.6
申请日：2022-04-14
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10 , C12N15/12 , C12N7/00 , A61K39/125 , A61P31/14
摘要： 本发明提供了一种适用于柯萨奇病毒A6培养的新型稳转细胞系及其应用，构建所述新型稳转细胞系包括构建hKREMEN1慢病毒过表达载体、病毒包装和稳转细胞筛选。本发明克服了CVA6病毒在Vero细胞增殖不理想的问题，利用慢病毒技术，在非洲绿猴肾细胞（Vero）中过表达人KREMEN1基因，通过构建可稳定表达hKREMEN1受体的Vero细胞，大大提高了CVA6病毒在Vero细胞上的增殖能力，为手足口病疫苗研发奠定了良好基础，有利于疫苗制备及其有效性的评价。
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公开(公告)号：CN102199627A
公开(公告)日：2011-09-28
申请号：CN201110062839.4
申请日：2011-03-16
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/861 , A61P25/16
摘要： 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法，属于基因工程。步骤有：将NTN和TH基因分别插入双顺反子表达质粒pcDNA3.0BA多克隆位点，用筛选出的模板和引物PCR扩增得到双顺反子表达盒，插入腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV转录和翻译，电转感受态细胞BJ-5183，筛选阳性克隆，经鉴定转化XL-10(Gold)宿主菌,在AD-293细胞中包装成双顺反子重组腺病毒。本发明重组腺病毒Ad-NTN-TH感染宿主细胞后能稳定转录和共表达NTN和TH，表达的功能蛋白NTN在体外促进鸡胚背根神经节生长突触，还能促进胎鼠多巴胺能神经元的存活，酪氨酸羟化酶TH在体外催化L-Tyrosine反应生成L-DOPA。
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公开(公告)号：CN114717265B
公开(公告)日：2023-06-20
申请号：CN202210388646.6
申请日：2022-04-14
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10 , C12N15/12 , C12N7/00 , A61K39/125 , A61P31/14
摘要： 本发明提供了一种适用于柯萨奇病毒A6培养的新型稳转细胞系及其应用，构建所述新型稳转细胞系包括构建hKREMEN1慢病毒过表达载体、病毒包装和稳转细胞筛选。本发明克服了CVA6病毒在Vero细胞增殖不理想的问题，利用慢病毒技术，在非洲绿猴肾细胞（Vero）中过表达人KREMEN1基因，通过构建可稳定表达hKREMEN1受体的Vero细胞，大大提高了CVA6病毒在Vero细胞上的增殖能力，为手足口病疫苗研发奠定了良好基础，有利于疫苗制备及其有效性的评价。
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公开(公告)号：CN101555485B
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN200910094460.4
申请日：2009-05-15
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所 , 昆明云健制药有限公司
IPC分类号： C12N15/70 , C12P21/02 , C07K14/635 , C07K1/14 , C12R1/19
摘要： 重组人甲状旁腺激素(1-84)非融合表达及规模化制备方法，本发明属于基因工程，包括发酵培养基、发酵参数、菌体收集、重组人甲状旁腺激素蛋白提取与纯化以及该蛋白的生物活性检测，本发明诱导表达起始时间为8小时，一次发酵时间为12小时，所收获湿菌重量与发酵液体积比为21.4g∶1L，重组人PTH(1-84)表达量约占菌体总量的25％；经层析柱纯化可获得大于95％的纯度，得率约为湿菌10mg/L发酵液，并建立了OD450nm条件下重组人PTH(1-84)蛋白与cAMP浓度关系方程。
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公开(公告)号：CN102199627B
公开(公告)日：2012-11-07
申请号：CN201110062839.4
申请日：2011-03-16
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/861
摘要： 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法，属于基因工程。步骤有：将NTN和TH基因分别插入双顺反子表达质粒pcDNA3.0BA多克隆位点，用筛选出的模板和引物PCR扩增得到双顺反子表达盒，插入腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV转录和翻译，电转感受态细胞BJ-5183，筛选阳性克隆，经鉴定转化XL-10(Gold)宿主菌,在AD-293细胞中包装成双顺反子重组腺病毒。本发明重组腺病毒Ad-NTN-TH感染宿主细胞后能稳定转录和共表达NTN和TH，表达的功能蛋白NTN在体外促进鸡胚背根神经节生长突触，还能促进胎鼠多巴胺能神经元的存活，酪氨酸羟化酶TH在体外催化L-Tyrosine反应生成L-DOPA。
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