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公开(公告)号：CN112831498A
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN202110165135.3
申请日：2021-02-06
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/89 , C12N15/90
摘要： 本发明公开了一种ssODN介导的牡蛎基因组定点突变或插入的方法，包括：合成外源供体模板‑单链寡核苷酸；体外转录合成CRISPR/Cas9系统，该系统包括Cas9 mRNA和靶基因sgRNA；然后将ssODN、Cas9 mRNA、靶基因sgRNA和非同源修复抑制剂KU5778进行混合得到混合物，利用显微注射方法将该混合物导入至牡蛎受精卵中。本发明利用ssODN介导结合CRISPR/Cas9基因编辑技术，以牡蛎为研究对象针对性地设计ssODN序列，并确定该序列的长度，最终通过显微注射成功实现了牡蛎的基因组定点突变或插入。本发明为以后开展牡蛎基因功能研究和遗传改良提供了强有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN107841561B
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN201610826171.9
申请日：2016-09-18
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了长牡蛎壳色相关的SNP遗传标记及筛选方法，本发明运用高分辨率熔解曲线分析技术和从EST公共数据库中挖掘出的133个SNP位点对选育的长牡蛎壳色群体（金色、白色、紫色与黑色）进行基因分型，通过特异性位点分析得到4个与长牡蛎生壳色相关的标记。本发明为长牡蛎壳色选育提供分子依据，同时也将对长牡蛎壳色多样性保护具有重要的作用。
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公开(公告)号：CN109385451B
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN201811316315.1
申请日：2018-11-07
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明公开了一种牡蛎CRISPR/Cas9基因编辑方法，该方法包括如下步骤：筛选待编辑基因的sgRNA靶位点序列，设计靶向序列的sgRNA序列，体外转录获得高浓度的靶基因sgRNA；将sgRNA和Cas9蛋白等体积混合后于37℃反应15分钟，再与酚红溶液等体积混合，采用显微注射方法，将混合物导入牡蛎受精卵中，孵化6小时以后，检测牡蛎胚胎或幼虫能够获得相应的基因突变体。本发明首次成功建立了牡蛎基因编辑技术，该技术既可用于研究牡蛎基因功能，又能用于精准修饰牡蛎内源基因，为牡蛎的基因改良遗传育种提供技术支持。
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公开(公告)号：CN112931324A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110247291.4
申请日：2021-03-05
申请人： 中国海洋大学
摘要： 一种适宜牡蛎海底养殖方法和装置，该养殖方法包括：选择养殖海区；选取牡蛎苗；设计牡蛎海底养殖装置；将所述养殖装置投放到所述养殖海区，整个装置位于海底；养殖牡蛎期间管理:牡蛎养殖期间，牡蛎达到商品规格且其软体部肥满即可收获。该养殖装置包括上部的浮体部和下部的鱼礁结构，所述浮体部由养成绳作为串联结构，由上至下串联起为耐压浮力体和多个贝壳和挂环，所述鱼礁结构为一中空的基体，其上部设有横梁，所述挂环与横梁连接固定，所述浮体部与所述鱼礁结构进行连接固定。本发明开发利用了外海海底牡蛎养殖海域，抗风浪和防脱落，且附着物少，可养殖大规格牡蛎，能够显著提高养殖牡蛎的品质和产量。
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公开(公告)号：CN109385451A
公开(公告)日：2019-02-26
申请号：CN201811316315.1
申请日：2018-11-07
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明公开了一种牡蛎CRISPR/Cas9基因编辑方法，该方法包括如下步骤：筛选待编辑基因的sgRNA靶位点序列，设计靶向序列的sgRNA序列，体外转录获得高浓度的靶基因sgRNA；将sgRNA和Cas9蛋白等体积混合后于37℃反应15分钟，再与酚红溶液等体积混合，采用显微注射方法，将混合物导入牡蛎受精卵中，孵化6小时以后，检测牡蛎胚胎或幼虫能够获得相应的基因突变体。本发明首次成功建立了牡蛎基因编辑技术，该技术既可用于研究牡蛎基因功能，又能用于精准修饰牡蛎内源基因，为牡蛎的基因改良遗传育种提供技术支持。
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公开(公告)号：CN107345934A
公开(公告)日：2017-11-14
申请号：CN201610295844.2
申请日：2016-05-07
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： G01N27/447 , G01N1/30
CPC分类号： G01N27/447 , G01N1/30
摘要： 本发明涉及一种适用于长牡蛎的微卫星聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速银染方法，所述方法包括以下步骤：聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后，取下凝胶，浸泡在染液中3min；将凝胶放入蒸馏水中冲洗10s；随后取出凝胶，放入显影液中4min；将显影成功的胶冲洗干净。将传统的固定、三次冲洗、染色、显影、定影、冲洗等6个步骤缩减为四个步骤，染色液与显影液可反复使用3次，同时银染效果也得到了保证，与传统方法相比大大节省了时间与成本。
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公开(公告)号：CN112931324B
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202110247291.4
申请日：2021-03-05
申请人： 中国海洋大学
摘要： 一种适宜牡蛎海底养殖方法和装置，该养殖方法包括：选择养殖海区；选取牡蛎苗；设计牡蛎海底养殖装置；将所述养殖装置投放到所述养殖海区，整个装置位于海底；养殖牡蛎期间管理:牡蛎养殖期间，牡蛎达到商品规格且其软体部肥满即可收获。该养殖装置包括上部的浮体部和下部的鱼礁结构，所述浮体部由养成绳作为串联结构，由上至下串联起为耐压浮力体和多个贝壳和挂环，所述鱼礁结构为一中空的基体，其上部设有横梁，所述挂环与横梁连接固定，所述浮体部与所述鱼礁结构进行连接固定。本发明开发利用了外海海底牡蛎养殖海域，抗风浪和防脱落，且附着物少，可养殖大规格牡蛎，能够显著提高养殖牡蛎的品质和产量。
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公开(公告)号：CN107841561A
公开(公告)日：2018-03-27
申请号：CN201610826171.9
申请日：2016-09-18
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q2600/124 , C12Q2600/156
摘要： 本发明公开了长牡蛎壳色相关的SNP遗传标记及筛选方法，本发明运用高分辨率熔解曲线分析技术和从EST公共数据库中挖掘出的133个SNP位点对选育的长牡蛎壳色群体（金色、白色、紫色与黑色）进行基因分型，通过特异性位点分析得到4个与长牡蛎生壳色相关的标记。本发明为长牡蛎壳色选育提供分子依据，同时也将对长牡蛎壳色多样性保护具有重要的作用。
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公开(公告)号：CN105441576A
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201610018599.0
申请日：2016-01-12
申请人： 中国海洋大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12Q2600/156 , C12Q2600/16 , C12Q2537/143 , C12Q2563/107 , C12Q2565/125
摘要： 本发明公开了一种用于长牡蛎亲子鉴定的微卫星多重PCR方法，该方法包括如下步骤：提取亲本和子代DNA；使用18个微卫星位点及带荧光标记的M13（-21）通用引物，对提取的DNA样本进行多重PCR扩增；对扩增产物的荧光信号进行检测，获得亲本和子代基因型数据；对亲本和子代进行亲缘关系鉴定。经验证，使用本发明2组多重PCR组合对12个长牡蛎全同胞家系进行亲子鉴定，即可达到100%的鉴定成功率。本发明为长牡蛎提供了一套经济有效、准确度高的基于DNA标记的亲子鉴定技术。通过微卫星标记鉴定获得的系谱关系记录，可以将长牡蛎个体追溯到其产出地，从而建立牡蛎产品的跟踪与溯源技术，为解决当今社会人们日益关注的食品安全问题提供有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN111328745A
公开(公告)日：2020-06-26
申请号：CN202010330245.6
申请日：2020-04-24
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明提供了一种荔枝螺幼虫的培育装置和方法，该装置包括培育槽和水槽，该培育槽套装于水槽内；所述培育槽上部开口，底部覆设有筛网二，所述水槽的上部开口，用于套装培育槽；所述培育槽的一侧上部开有一插孔，所述水槽的一侧上部开有一插孔，该插孔一与插孔二能够相互对应，出水管通过所述插孔一和插孔二插入至培育槽内；所述水槽的下部设有插孔，用于插入入水管，所述插孔的位置要低于所述培育槽的底端。荔枝螺幼虫的培育方法以该装置为基础，根据幼虫不同时期提供不同的饵料，培育至幼虫变态为止。本发明为螺类苗种繁育节约了大量的人力和财力，且达到了高效的幼虫培育目的，培育期间的疣荔枝螺幼虫存活率达到85%以上。
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