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公开(公告)号：CN112210521B
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN201910625231.4
申请日：2019-07-11
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12N15/54 , C12N15/52 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N15/10 , C12N9/00 , C12R1/19
Abstract: 一种筛选丙酰辅酶A羧化酶pcc的CT亚基的重组菌及其构建方法与应用，属于基因工程和蛋白质工程领域。针对丙酰辅酶A羧化酶酶活较低，以及如何对丙酰辅酶A羧化酶进行高通量筛选的问题，本发明提供了一种筛选丙酰辅酶A羧化酶pcc的CT亚基的重组菌，所述重组菌是以草酰乙酸营养缺陷型的大肠杆菌为宿主菌，在所述宿主菌中过表达甲基丙二酸单酰辅酶A羧基转移酶基因mct，乙酰辅酶A羧化酶BCCP亚基基因accB和乙酰辅酶A羧化酶BC亚基基因accC，本发明还提供了能够提高丙酰辅酶A羧化酶pcc酶活的单一位点突变体以及多位点突变体。本发明可实现丙酰辅酶A羧化酶基因pcc的CT亚基高通量筛选。
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公开(公告)号：CN105255804B
公开(公告)日：2018-09-18
申请号：CN201510771229.X
申请日：2015-11-12
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 , 上海华谊(集团)公司
Abstract: 本发明公开了一种催化甲醇制备异戊二烯的大肠杆菌基因工程菌及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的大肠杆菌基因工程菌具有异戊二烯合成途径，同时过表达甲醇脱氢酶基因MDH，6‑磷酸己酮糖合成酶基因RmpA，6‑磷酸‑3‑己酮糖异构酶基因RmpB和甲醇脱氢酶激活蛋白基因Act。同时，本发明还提供了构建该大肠杆菌基因工程菌的方法及应用方法。本发明所提供的大肠杆菌基因工程菌可以甲醇为底物生物合成异戊二烯，具有转化效率高，生产成本低等特点，甲醇‑异戊二烯的转化率可达21.83％。
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公开(公告)号：CN112210521A
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN201910625231.4
申请日：2019-07-11
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12N15/54 , C12N15/52 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N15/10 , C12N9/00 , C12R1/19
Abstract: 一种筛选丙酰辅酶A羧化酶pcc的CT亚基的重组菌及其构建方法与应用，属于基因工程和蛋白质工程领域。针对丙酰辅酶A羧化酶酶活较低，以及如何对丙酰辅酶A羧化酶进行高通量筛选的问题，本发明提供了一种筛选丙酰辅酶A羧化酶pcc的CT亚基的重组菌，所述重组菌是以草酰乙酸营养缺陷型的大肠杆菌为宿主菌，在所述宿主菌中过表达甲基丙二酸单酰辅酶A羧基转移酶基因mct，乙酰辅酶A羧化酶BCCP亚基基因accB和乙酰辅酶A羧化酶BC亚基基因accC，本发明还提供了能够提高丙酰辅酶A羧化酶pcc酶活的单一位点突变体以及多位点突变体。本发明可实现丙酰辅酶A羧化酶基因pcc的CT亚基高通量筛选。
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公开(公告)号：CN105861533B
公开(公告)日：2019-10-15
申请号：CN201610224643.3
申请日：2016-04-12
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
Abstract: 本发明公开了一种通过镁离子诱导大肠杆菌裂解的重组载体及应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的重组载体包括连接在原始质粒上的裂解基因和插入在裂解基因之前的启动子PmgtA或同时含有启动子PmgtA和5’‑URT的片段；所述裂解基因来SRRZ来源于大肠杆菌，基因S的GenbanK ID为8182761,基因R的GenbanK ID为8182762,基因RZ的GenbanKID为8182763；所述PmgtA启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述同时含有启动子PmgtA和5’‑URT的片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。同时，本发明还提供了该重组载体的构建和使用方法。本发明的重组载体及含有该重载载体的重组细胞具有裂解效率高，成本低，能耗低的特点；在低镁离子条件下，1h内可实现100％裂解且不需要昂贵的诱导剂。
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公开(公告)号：CN107119002A
公开(公告)日：2017-09-01
申请号：CN201710291755.5
申请日：2017-04-28
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 , 燃点科技(天津)有限公司
Abstract: 本发明提供一种合成3‑羟基丙酸的重组菌及其构建方法和制备，属于基因工程领域和发酵工程领域，所述重组菌宿主菌为大肠杆菌，表达编码ATP依赖的蛋白酶水解亚单位的基因clpP、编码乙酰辅酶A羧化酶的基因accABCD和编码丙二酸单酰辅酶A还原酶的基因mcr。制备方法为：获得重组载体pETDuet‑clpP‑mcr、重组载体pACYCDuet‑accADBC；转化到宿主感受态细胞中。本发明解决了微生物发酵过程中，随着3‑羟基丙酸的浓度增加，抑制微生物生长影响产量的问题，相对于没有表达编码ATP依赖的蛋白酶水解亚单位的菌株提高了116％，是已知的摇瓶发酵最高水平。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106520644A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610850263.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
CPC classification number: C12N9/0006 , C12N15/74 , C12P7/56 , C12Y101/01028
Abstract: 本发明公开了一种高产D-乳酸的重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明提供的重组菌，是将D-乳酸脱氢酶基因ldhA在肺炎克雷伯氏菌过量表达，得到重组肺炎克雷伯氏菌。本发明D-乳酸生产方法是将重组菌活化后进行逐级扩大培养，实现了500L发酵罐水平上的中试生产。本发明简单易行，实现了D-乳酸在中试水平上的高效合成，产量达到210g/L，且不含有L-乳酸，具有产量高、生产成本较低的特点，具有良好的市场前景和经济效益。
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公开(公告)号：CN106434505A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610851558.X
申请日：2016-09-26
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
CPC classification number: C12P7/56 , C12N9/0006 , C12Y101/01002 , C12Y101/01028 , C12Y101/01202
Abstract: 本发明公开了一种利用生物柴油副产物甘油合成D-乳酸的重组菌及其应用，属于基因工程领域。本发明提供的重组菌，是将D-乳酸脱氢酶基因ldhA导入敲除了1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT和醛还原酶/醇脱氢酶基因yqhD的宿主重组肺炎克雷伯氏菌中得到的工程菌株。本发明实现了以生物柴油副产物甘油为底物合成D-乳酸，在摇瓶水平，产量和转化率分别达到12.7g/L和50.4％，光学纯度为100％，具有光学纯度和转化率高、生产成本低的特点。
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公开(公告)号：CN104046659B
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201410272402.7
申请日：2014-06-18
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
Abstract: 本发明公开了一种聚3-羟基丙酸共聚物及其生产方法，属于基因工程技术领域。本发明通过基因整合技术在宿主菌基因组上整合甘油脱水酶基因和甘油脱水酶再激活酶基因，并导入聚羟基脂肪酸合成酶基因、丙醛脱氢酶基因、β-酮脂酰辅酶A硫解酶基因、乙酰乙酰辅酶A还原酶基因和丙酰辅酶A合成酶基因，重组后的基因工程菌具有生物合成聚3-羟基丙酸-co-3-羟基戊酸的能力。本发明首次通过生物合成的方式获得了聚3-羟基丙酸-co-3-羟基戊酸。与聚3-羟基丙酸相比，所得的聚3-羟基丙酸-co-3-羟基戊酸具有更高的熔点和更低的结晶性，具有较佳的可降解性，可作为包装材料、医用植入材料、药物缓释材料和电化学材料。
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公开(公告)号：CN105861533A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610224643.3
申请日：2016-04-12
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
Abstract: 本发明公开了一种通过镁离子诱导大肠杆菌裂解的重组载体及应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的重组载体包括连接在原始质粒上的裂解基因和插入在裂解基因之前的启动子PmgtA或同时含有启动子PmgtA和5’?URT的片段；所述裂解基因来SRRZ来源于大肠杆菌，基因S的GenbanK ID为8182761,基因R的GenbanK ID为8182762,基因RZ的GenbanKID为8182763；所述PmgtA启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述同时含有启动子PmgtA和5’?URT的片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。同时，本发明还提供了该重组载体的构建和使用方法。本发明的重组载体及含有该重载载体的重组细胞具有裂解效率高，成本低，能耗低的特点；在低镁离子条件下，1h内可实现100％裂解且不需要昂贵的诱导剂。
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公开(公告)号：CN103497922B
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201310409148.6
申请日：2013-09-10
Applicant: 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
Abstract: 本发明公开了一种联产3-HP和P3HP的重组肺炎克雷伯氏菌及其制备方法和应用。是将甘油脱水酶基因，甘油脱水酶再激活酶基因，醛脱氢酶基因，丙酰辅酶A合成酶基因和聚羟基脂肪酸合成酶基因导入敲除了1,3-丙二醇氧化还原酶基因和醛还原酶/醇脱氢酶基因的宿主重组肺炎克雷伯氏菌，得到重组菌。本发明降低了3-羟基丙酸和聚3-羟基丙酸的生产成本，实现了以同一菌体为宿主同时合成3-羟基丙酸和聚3-羟基丙酸。
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