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公开(公告)号：CN106106195B
公开(公告)日：2017-07-28
申请号：CN201610665810.8
申请日：2016-08-15
IPC分类号： A01K1/00
摘要： 本发明属于畜牧养殖技术领域，具体地说，涉及一种装配式可移动标准化饲养羊舍。所述的装配式可移动标准化饲养羊舍主要包括地形调整平台、羊舍底板、羊舍墙体、羊舍屋顶、羊舍内部设施，其组装式标准化摸块由工厂统一加工而成，本发明中整个羊舍房处于悬粪且稳定牢固，建设不受任何地形结构、地貌特征等因素的限制，适用范围较广，不会改变土地的使用性质，可以二次循环使用，装配较简单、方便，可根据不同的需要随时进行组装和拆卸，生态环保，建设周期短、成本低，能够充分地发挥中国西南山区、半山区的山羊等生物资源优势，特别适用于中国西南贫困山区、半山区等地区的养殖户发展山羊养殖业，是使贫困地区农养殖户实现脱贫致富的有效途径。
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公开(公告)号：CN106106195A
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201610665810.8
申请日：2016-08-15
IPC分类号： A01K1/00
CPC分类号： A01K1/00
摘要： 本发明属于畜牧养殖技术领域，具体地说，涉及一种装配式可移动标准化饲养羊舍。所述的装配式可移动标准化饲养羊舍主要包括地形调整平台、羊舍底板、羊舍墙体、羊舍屋顶、羊舍内部设施，其组装式标准化摸块由工厂统一加工而成，本发明中整个羊舍房处于悬粪且稳定牢固，建设不受任何地形结构、地貌特征等因素的限制，适用范围较广，不会改变土地的使用性质，可以二次循环使用，装配较简单、方便，可根据不同的需要随时进行组装和拆卸，生态环保，建设周期短、成本低，能够充分地发挥中国西南山区、半山区的山羊等生物资源优势，特别适用于中国西南贫困山区、半山区等地区的养殖户发展山羊养殖业，是使贫困地区农养殖户实现脱贫致富的有效途径。
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公开(公告)号：CN205865497U
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201620878400.7
申请日：2016-08-15
IPC分类号： A01K1/00
摘要： 本实用新型属于畜牧养殖技术领域，具体地说，涉及一种装配式可移动标准化饲养羊舍。所述的装配式可移动标准化饲养羊舍主要包括地形调整平台、羊舍底板、羊舍墙体、羊舍屋顶、羊舍内部设施，其组装式标准化摸块由工厂统一加工而成，本实用新型中整个羊舍房处于悬粪且稳定牢固，建设不受任何地形结构、地貌特征等因素的限制，适用范围较广，不会改变土地的使用性质，可以二次循环使用，装配较简单、方便，可根据不同的需要随时进行组装和拆卸，生态环保，建设周期短、成本低，能够充分地发挥中国西南山区、半山区的山羊等生物资源优势，特别适用于中国西南贫困山区、半山区等地区的养殖户发展山羊养殖业，是使贫困地区农养殖户实现脱贫致富的有效途径。
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公开(公告)号：CN113249456A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110557343.8
申请日：2021-05-21
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/06
摘要： 本发明涉及一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，属动物转基因技术领域。本发明针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系，进行PCR、酶切及测序鉴定，基于细胞PCR条带灰度值，筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量；将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选，当单克隆细胞系形成时，抠取后于培养板扩大培养并按上述最低细胞量计数进行基因型鉴定，经鉴定后立即进行体细胞核移植，取出胎儿分离培养及鉴定后获得大量转基因猪阳性成纤维细胞系。本发明克服了基因编辑猪阳性细胞系筛选周期长、效率低、成功率低的问题，对促进转基因猪的生产具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN108342491A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201810362449.0
申请日：2018-04-20
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12Q1/6888
摘要： 本发明涉及一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法，属动物生物技术领域。以人成纤维细胞为研究对象，建立人成纤维细胞体外相容性评价方法，用此方法验证已报道的心脏或其他移植存活时间长的基因修饰猪成纤维细胞的结果，筛出更适合的补体调节因子、免疫应答因子及抗凝血因子，在GTKO的基础上，对上述因子组合后进行定点敲入或敲除，再对不同多因子组合的猪成纤维细胞用此方法进行早期筛选，获得3种以上最佳基因组合的细胞再克隆，克隆猪进行猪-非灵长类的心脏移植验证此筛选方法的可靠性。本发明不需在获得基因组合修饰猪的基础上即可评价最佳基因组合，将极大地节约基因组合筛选时间和经费投入，对开发真正的异种移植供体猪具有重大的意义。
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公开(公告)号：CN110373392A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201910498532.5
申请日：2019-06-10
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种适合肾脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术同时敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，在此基础猪上再定点插入hCD39、hTBM、REN三个修饰基因，构建多基因修饰的肾脏异种移植供体猪，再对该供体猪进行功能验证，获得适合肾脏异种移植的供体猪。本发明为适合异种肾脏移植供体猪的开发提供了科学的理论基础，为肾脏衰竭患者的移植治疗提供了希望。
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公开(公告)号：CN110373391A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201910498531.0
申请日：2019-06-10
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因后并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，再在此基础猪的Rosa26位点再定点插入hCD39、hTBM两个心脏功能修饰特异基因，构建出多基因修饰的心脏异种器官移植供体猪再进行功能验证，获得适合心脏异种移植的供体猪。本发明为异种心脏移植提供了可靠的供体猪，为处于终末期的心脏病患者的治疗提供了希望。
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公开(公告)号：CN110358766A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910497797.3
申请日：2019-06-10
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/90 , C12N15/867 , C12N15/65
摘要： 本发明涉及一种基于全基因组CRISPR/Cas9文库筛选异种移植抗原基因的方法，属动物基因编辑技术领域。基于CRISPR/Cas9基因编辑系统，针对猪基因组范围内的全部基因各设计1-2条靶向sgRNA，构建sgRNA慢病毒载体随机敲除文库并转染至HEK293T细胞中，收集病毒再转染至猪PK15细胞中，将转入病毒的猪PK15细胞包被到灵长类的胸腺或肾包膜下，或用人血清进行体外培养，分别在不同的时间内回收存活的细胞，再对回收的活细胞建立单细胞DNA文库或进行单细胞培养扩增后提取DNA，再用慢病毒载体上的通用引物扩增含有sgRNA的上述DNA片段，对敲除的单细胞基因位点进行定型，最终确定并查找出相关基因的信息。本发明的实施对猪作为异种器官移植过程中猪细胞表面新抗原的挖掘具有重要的指导意义。
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公开(公告)号：CN110295194A
公开(公告)日：2019-10-01
申请号：CN201910497796.9
申请日：2019-06-10
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明涉及一种猪内源性逆转录病毒失活克隆猪的构建方法，属动物生物技术领域。通过ddPCR和全基因组测序比对，确定猪内源性逆转录病毒在猪胎儿成纤维细胞基因组中的拷贝数和其占据染色体的位置，利用CRISPR/Cas9技术构建猪内源性逆转录病毒失活载体转染至猪胎儿成纤维细胞，筛选获得的阳性细胞进行体细胞核移植，待妊娠时取出胎儿鉴定其失活与否，利用ddPCR和全基因组测序比对后，再对该猪胎儿成纤维细胞进行基因打靶，依次循环，直至获得猪内源性逆转录病毒完全失活的细胞后进行体细胞核移植，最终获得猪内源性逆转录病毒完全失活的克隆猪。本发明克服了猪内源性逆转录病毒失活效率低、成功率低的问题，对解决异种器官移植的安全性问题具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN113249456B
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202110557343.8
申请日：2021-05-21
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/06
摘要： 本发明涉及一种快速筛选基因编辑猪阳性细胞系的方法，属动物转基因技术领域。本发明针对已知的不同基因编辑类型的猪阳性成纤维细胞系，进行PCR、酶切及测序鉴定，基于细胞PCR条带灰度值，筛选获得细胞基因型鉴定所需的最低细胞量；将目的基因表达载体转染至猪成纤维细胞并进行单细胞培养筛选，当单克隆细胞系形成时，抠取后于培养板扩大培养并按上述最低细胞量计数进行基因型鉴定，经鉴定后立即进行体细胞核移植，取出胎儿分离培养及鉴定后获得大量转基因猪阳性成纤维细胞系。本发明克服了基因编辑猪阳性细胞系筛选周期长、效率低、成功率低的问题，对促进转基因猪的生产具有重要的意义。
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