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公开(公告)号：CN115896109A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202211100013.7
申请日：2022-09-08
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N5/10
摘要： 本发明涉及细胞工程和基因工程领域，具体公开了一种基于碱基编辑器ABE系统构建ABO基因点突变的hiPS细胞系的构建方法。本发明利用碱基编辑器ABE系统对hiPS细胞系中ABO基因进行点突变，操作简单，点突变效果更加准确。通过改造碱基编辑器ABE系统的基因组编辑技术，将抗性基因Puromycin N‑acetyl‑transferase表达在载体上，通过嘌呤霉素对电转后iPS细胞进行筛选，可以大大提高碱基编辑器ABE系统在iPSC中的基因编辑效率。优化后的碱基编辑器ABE系统基因组编辑技术具有操作简单、所需时间少、点突变效率高的特点。
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公开(公告)号：CN116836980A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310688277.7
申请日：2023-06-09
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/85
摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了一种靶向端粒DNA重复序列的sgRNA组合物及其用途，其中所述sgRNA包括sgRNA1和/或sgRNA2，所述sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，采用本发明的sgRNA结合CRISPR/Cas9基因编辑系统能够实现对细胞端粒DNA重复序列的高效切割，使细胞端粒长度降至5000kb以下，可广泛应用于端粒缩短细胞模型的构建。
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公开(公告)号：CN114438083A
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202210110465.7
申请日：2022-01-29
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/48 , C12N5/10
摘要： 本发明公开了一种识别猪PERV基因的sgRNA及其编码DNA和应用。该sgRNA的靶序列为A1‑A8中任意一种。本发明提供的sgRNA特异性识别猪PERV基因，将其用于CRISPR/Cas9系统，在不引起DNA双链断裂的情况下实现DNA碱基序列改变，可以解决利用CRISPR/Cas9系统介导PERV基因敲除时，双链断裂累积导致细胞大量死亡的问题。本发明的sgRNA敲除效率高，能够高效地对猪PERV基因进行编辑，实现在猪器官异种移植、猪细胞或个体的基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。
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公开(公告)号：CN115058456B
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202210720538.4
申请日：2022-06-23
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/877 , C12N15/89 , C12N15/66 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/54 , A01K67/027
摘要： 本发明属于动物模型构建领域，具体涉及HPRT基因敲除的动物模型的构建方法和应用，本发明针对HPRT基因第3外显子设计一条sgRNA，将sgRNA序列与T7启动子相连，获得体外转录载体，利用体外转录试剂盒，以构建的体外转录载体为模板，制备显微注射使用的Cas9mRNA和gRNA，随后将Cas9mRNA和gRNA混和后，注射到单细胞期兔受精卵中，通过PCR扩增及Sanger测序获得HPRT基因敲除的家兔模型，本发明构建HPRT基因敲除的动物模型的方法简单、高效，相对于现有的小鼠模型，本发明模型动物为家兔，家兔较小鼠具有更丰富的神经系统，在模拟人类神经系统疾病上相对更有优势。
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公开(公告)号：CN116334079A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202211040899.0
申请日：2022-08-29
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/85 , C12N15/12 , C12N5/10 , A01K67/027 , C12R1/91
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及靶向Was基因的双sgRNA和敲除Was基因的mESC细胞系及其应用。所述靶向Was基因的双sgRNA，包括Was‑sgRNA1和Was‑sgRNA2；所述Was‑sgRNA1的靶向序列为：CACAGTTGTTCAGCTCTACC；所述Was‑sgRNA2的靶向序列为：GGATGAAGTAGGACTTCTGA。本发明采用两条分别靶向小鼠Was基因第2外显子的sgRNA序列，可通过一次细胞筛选直接获得大片段基因敲除细胞系，敲除效果更加彻底，能够更好地模拟WAS综合征的重症表型。
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公开(公告)号：CN115948461A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202210830321.9
申请日：2022-07-14
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/113 , C12N5/10
摘要： 本发明涉及基因编辑技术领域，尤其是涉及一种双向导碱基基因编辑系统及其应用。所述系统包括靶向元件、编辑效应元件和向导元件；所述向导元件包括gRNA1载体和gRNA2载体；所述gRNA1载体含有至少一个靶向靶标位点且产生切割的gRNA序列和/或PBS序列，所述gRNA2载体含有至少一个靶向靶标位点但不产生切割的gRNA序列和PBS序列，同一个靶标位点的gRNA序列和PBS序列位于不同gRNA载体上。无论是针对FANCF基因还是RNF基因，本发明的CRISPR/DPE系统、CRISPR/DDPE系统明显提高了靶标位点的编辑效率，说明CRISPR/DPE系统具有广泛适用性。
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公开(公告)号：CN115058456A
公开(公告)日：2022-09-16
申请号：CN202210720538.4
申请日：2022-06-23
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/877 , C12N15/89 , C12N15/66 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/54 , A01K67/027
摘要： 本发明属于动物模型构建领域，具体涉及HPRT基因敲除的动物模型的构建方法和应用，本发明针对HPRT基因第3外显子设计一条sgRNA，将sgRNA序列与T7启动子相连，获得体外转录载体，利用体外转录试剂盒，以构建的体外转录载体为模板，制备显微注射使用的Cas9mRNA和gRNA，随后将Cas9mRNA和gRNA混和后，注射到单细胞期兔受精卵中，通过PCR扩增及Sanger测序获得HPRT基因敲除的家兔模型，本发明构建HPRT基因敲除的动物模型的方法简单、高效，相对于现有的小鼠模型，本发明模型动物为家兔，家兔较小鼠具有更丰富的神经系统，在模拟人类神经系统疾病上相对更有优势。
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公开(公告)号：CN115058451A
公开(公告)日：2022-09-16
申请号：CN202210721261.7
申请日：2022-06-23
申请人： 五邑大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/113 , C12N15/12
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种用于同源重组和单碱基编辑的双报告质粒及其构建方法和应用。本发明的用于同源重组和单碱基编辑的双报告质粒包括骨架序列和插入序列，所述插入序列依次包括蓝色荧光序列BFP、连接元件T2A、红色荧光序列mCherry、不完整的绿色荧光序列GFPHDR和STgRNA序列。本发明的双报告质粒在发生单碱基编辑和同源重组时，报告质粒的荧光会发生变化，从而保证基因编辑载体进入细胞后仍然具有较高的编辑活性，同时由于对同源重组和单碱基编辑均可以进行报告，提高了报告质粒的适用范围。
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公开(公告)号：CN118440921A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410427483.7
申请日：2024-04-10
申请人： 五邑大学
摘要： 本发明公开了一种胞嘧啶碱基编辑系统及其应用，具体公开了一种融合蛋白，所述融合蛋白自N端至C端依次包括第一融合蛋白和第二融合蛋白；所述第一融合蛋白自N端至C端依次包括FK506结合蛋白片段、脱氨酶第一片段、nCas9第一片段和两个尿嘧啶糖基酶抑制蛋白片段；所述第二融合蛋白自N端至C端依次包括nCas9第二片段、脱氨酶第二片段和FKBP雷帕霉素结合结构域。本发明提供的融合蛋白能够响应雷帕霉素发生二聚化从而发挥基因编辑活性，其编辑脱靶率低、编辑效率高。
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公开(公告)号：CN118359732A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410488581.1
申请日：2024-04-23
申请人： 五邑大学
摘要： 本发明公开了一种融合蛋白及含有其的碱基编辑系统和应用，所述融合蛋白包括第一融合蛋白和第二融合蛋白；所述第一融合蛋白自N端至C端依次包括FK506结合蛋白片段、脱氨酶A3A第一片段、nCas9第一片段和两个尿嘧啶糖基酶抑制蛋白片段；所述第二融合蛋白自N端至C端依次包括nCas9第二片段、脱氨酶A3A第二片段和FKBP雷帕霉素结合结构域。本发明方案的融合蛋白及含有其的碱基编辑系统能够在细胞中进行可控的C>T编辑并且该系统在不含rapamycin时，拆分的两部分在NES和NLS的作用下分别定位在细胞核和细胞质减少分裂片段自发二聚化的可能，降低了所述基因编辑方法的脱靶率，同时维持了较高的编辑效率。
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