一种15N标记菌体蛋白的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN110862928A

    公开(公告)日:2020-03-06

    申请号:CN201911222334.2

    申请日:2019-12-03

    Abstract: 本发明公开了一种15N标记菌体蛋白的制备方法及其应用。所述制备方法包括如下步骤:种子培养:将孢子液接种至种子培养基中,以120~180转/分钟的转速在33~35℃条件下培养,得到种子液;前处理:将所述种子液置于离心管中,离心,用生理盐水洗涤,得到种子处理液;标记培养:将所述种子处理液加入发酵培养基溶液中,摇甁发酵,然后置于发酵罐中继续发酵培养,继续发酵过程中以补料的方式添加所述发酵培养基溶液,终止发酵后得到发酵液;分离蛋白:将获得的所述发酵液进行抽滤,得到菌体,用液氮冷冻,研磨,冷冻干燥,得到15N标记的菌体蛋白。本发明的制备方法能够高效率地将15N标记至菌体蛋白中,得到15N标记蛋白。

    一种用于代谢稳态同位素非稳态下获取胞内中心碳代谢途径代谢通量的方法

    公开(公告)号:CN111575336A

    公开(公告)日:2020-08-25

    申请号:CN202010407280.3

    申请日:2020-05-14

    Abstract: 本发明公开了一种用于代谢稳态同位素非稳态下获取胞内中心碳代谢途径代谢通量的方法,包括批培养模块、恒化培养模块、取样模块、处理与分析样品模块;当所述批培养模块中的OUR和CER同时出现下降时转入所述恒化培养模块;所述恒化培养模块中具体包括:流加不含同位素标记底物的营养液,同时开启排废,进行恒化培养,直至使微生物细胞处于代谢稳态时,切换成流加含同位素标记底物的营养液,保持培养条件不变;当所述同位素标记底物流入反应器内时开始快速、连续取样,同时进入所述取样模块。本发明的方法在短时间内获得一系列发酵液样品,进而处理、分析样品得到精确的胞内代谢物同位素丰度数据,对计算代谢通量起着至关重要的作用。

    一种混合离子交换模式的亲水色谱填料、其制备方法及应用

    公开(公告)号:CN107138144A

    公开(公告)日:2017-09-08

    申请号:CN201710381326.7

    申请日:2017-05-25

    Abstract: 本发明涉及一种混合离子交换模式的亲水色谱填料,Silica Gel为硅胶,是末端带烯基的两性离子键合相,n=0~4,X是带正电荷的官能基团,Y是带负电荷的官能基团。还提供了上述填料的制备方法,首先利用改性试剂如硅烷化试剂将巯基硅烷键合到硅胶表面获得巯基硅胶,然后与带烯基的两性离子键合相通过巯基‑烯烃点击反应制备得到混合离子交换模式的亲水色谱填料。并提供了该色谱填料的应用。该色谱填料结构新颖,表面电荷可调控,可有效实现离子交换容量的控制与优化;制备方法具有较好的可控性、重复性及稳定性。该色谱填料作为一类全新的混合离子交换模式的色谱填料及固定相,在色谱分离及修饰蛋白质组学中痕量肽段的选择性富集均具有较大的应用潜力。

    一种混合离子交换模式的亲水色谱填料、其制备方法及应用

    公开(公告)号:CN107138144B

    公开(公告)日:2019-09-24

    申请号:CN201710381326.7

    申请日:2017-05-25

    Abstract: 本发明涉及一种混合离子交换模式的亲水色谱填料,Silica Gel为硅胶,是末端带烯基的两性离子键合相,n=0~4,X是带正电荷的官能基团,Y是带负电荷的官能基团。还提供了上述填料的制备方法,首先利用改性试剂如硅烷化试剂将巯基硅烷键合到硅胶表面获得巯基硅胶,然后与带烯基的两性离子键合相通过巯基‑烯烃点击反应制备得到混合离子交换模式的亲水色谱填料。并提供了该色谱填料的应用。该色谱填料结构新颖,表面电荷可调控,可有效实现离子交换容量的控制与优化;制备方法具有较好的可控性、重复性及稳定性。该色谱填料作为一类全新的混合离子交换模式的色谱填料及固定相,在色谱分离及修饰蛋白质组学中痕量肽段的选择性富集均具有较大的应用潜力。

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