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公开(公告)号：CN118388665A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410731516.7
申请日：2024-06-06
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/58
摘要： 本发明公开了一种ASFV优势抗原表位串联重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，属于生物领域。筛选出的ASFV优势抗原表位，根据在猪群中诱导抗体效率，将其中的P54和B602L蛋白的高免疫原性区域进行串联表达得到所述重组蛋白，以该重组蛋白为抗原，建立了一种ASFV间接ELISA检测方法，该方法准确性高，特异性好，灵敏度高，在ASF疾病防控中具有较大应用前景。
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公开(公告)号：CN117736275A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202311660819.6
申请日：2023-12-04
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K14/065 , C12N15/39 , C12N15/63 , G01N33/569 , G01N33/543
摘要： 本发明公开了一种利用LSDV噬菌体展示文库高通量、无偏见筛选到的LSDV抗原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首先构建了展示LSDV的噬菌体文库，接着利用LSDV阳性血清对文库进行噬菌体免疫共沉淀筛选，通过二代测序以及数据分析，从文库中筛选出LSDV的抗原蛋白，经验证，该抗原蛋白能特异性与LSDV抗体反应，在LSDV诊断试剂研发中有很高的应用价值。
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公开(公告)号：CN113061620B
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN202110279433.5
申请日：2021-03-16
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种T4噬菌体衣壳内腔目标蛋白包装系统，该系统由三部分组成：第一部分是利用LbCas12a基因编辑系统改造得到的缺失了IPI和IPII基因的T4突变噬菌体；第二部分是表达CRISPR‑LbCas12a基因编辑载体的宿主菌，所述CRISPR‑LbCas12a基因编辑载体在宿主菌内表达产生的CRISPR‑LbCas12a蛋白复合体能特异性切割所述T4突变噬菌体的IPIII基因的靶向序列；第三部分是用于将IPIII基因替换成目标蛋白基因的供体质粒。本发明还公开了该系统的构建方法及其应用。将蛋白包装到噬菌体衣壳内，能够避免其受外界环境的影响，提高蛋白的稳定性，同时也可做为蛋白运送载体，具有较高的应用价值。本发明提供了一种简单高效的方法，能将目标蛋白高密度包装到T4噬菌体衣壳内腔。
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公开(公告)号：CN111926030A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010670227.2
申请日：2020-07-13
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR-Cas12a系统的噬菌体基因组编辑载体，该载体包含由proC启动子调控的LbCas12a蛋白编码框核酸序列、J23100启动子调控的crRNA表达框核酸序列、包含大肠杆菌复制因子CloDF13、壮观霉素耐受基因SMR和负责调控LbCas12a蛋白表达的proC启动子元件的质粒骨架核酸序列。本发明还公开了该载体的构建方法及其在噬菌体基因组编辑中的应用。很多噬菌体通过对自身基因组DNA进行共价化学修饰(如T4噬菌体基因组中的胞嘧啶被高度糖基化修饰)以耐受宿主核酸酶对其基因组的切割，噬菌体的这种自我保护机制给基因组编辑带来了很大障碍，本发明克服了噬菌体基因组共价修饰的限制，实现了对噬菌体基因组的高效编辑。
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公开(公告)号：CN118598974A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410934204.6
申请日：2024-07-12
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K14/47 , C07K14/465 , C07K1/34 , C07K1/14
摘要： 本发明公开了一种通过高碘酸盐氧化提取蛋白质多级结构的方法，涉及蛋白质分离提取领域。所述方法的步骤包括：将生物基原料和高碘酸混合；用碱液调节反应液pH；室温下避光进行氧化反应；将反应液进行透析、过滤、沉降、离心得到多级结构的蛋白质产物。本发明提供的方法不需要对生物基原料进行复杂的前处理和脱脂处理，反应条件温和，操作简单，通过对氧化反应时间进行调控，就可以得到不同层次的蛋白质生物结构，该方法具有高效性、可控性和环境友好性。
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公开(公告)号：CN116574160B
公开(公告)日：2024-06-28
申请号：CN202310530196.4
申请日：2023-05-10
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K14/315 , C12N15/31 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K1/22 , A61K39/09 , A61P31/04 , G01N33/569 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌高免疫原性抗原蛋白，该蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明还公开了该蛋白质的制备方法及其用途，属于分子生物学领域。该蛋白的基因存在于猪链球菌的核心基因组中，在不同的血清型中都高度保守，具有很高的免疫原性，能诱导机体产生高水平的Th1和Th2型免疫反应，该蛋白可用于猪链球菌的临床检测和制备亚单位疫苗，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN111926030B
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN202010670227.2
申请日：2020-07-13
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a系统的噬菌体基因组编辑载体，该载体包含由proC启动子调控的LbCas12a蛋白编码框核酸序列、J23100启动子调控的crRNA表达框核酸序列、包含大肠杆菌复制因子CloDF13、壮观霉素耐受基因SMR和负责调控LbCas12a蛋白表达的proC启动子元件的质粒骨架核酸序列。本发明还公开了该载体的构建方法及其在噬菌体基因组编辑中的应用。很多噬菌体通过对自身基因组DNA进行共价化学修饰(如T4噬菌体基因组中的胞嘧啶被高度糖基化修饰)以耐受宿主核酸酶对其基因组的切割，噬菌体的这种自我保护机制给基因组编辑带来了很大障碍，本发明克服了噬菌体基因组共价修饰的限制，实现了对噬菌体基因组的高效编辑。
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公开(公告)号：CN113061620A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110279433.5
申请日：2021-03-16
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种T4噬菌体衣壳内腔目标蛋白包装系统，该系统由三部分组成：第一部分是利用LbCas12a基因编辑系统改造得到的缺失了IPI和IPII基因的T4突变噬菌体；第二部分是表达CRISPR‑LbCas12a基因编辑载体的宿主菌，所述CRISPR‑LbCas12a基因编辑载体在宿主菌内表达产生的CRISPR‑LbCas12a蛋白复合体能特异性切割所述T4突变噬菌体的IPIII基因的靶向序列；第三部分是用于将IPIII基因替换成目标蛋白基因的供体质粒。本发明还公开了该系统的构建方法及其应用。将蛋白包装到噬菌体衣壳内，能够避免其受外界环境的影响，提高蛋白的稳定性，同时也可做为蛋白运送载体，具有较高的应用价值。本发明提供了一种简单高效的方法，能将目标蛋白高密度包装到T4噬菌体衣壳内腔。
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公开(公告)号：CN117736279A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202410076900.8
申请日：2023-04-21
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K14/195 , C12N15/70 , C12N15/31 , C12N1/21 , G01N33/569 , G01N33/58 , A61K39/05 , A61P31/04 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)三个候选抗原及其在制备胸膜肺炎放线杆菌检测试剂盒和亚单位疫苗中的应用。申请人通过联合使用细菌表面蛋白组学、反向疫苗学，结合噬菌体展示文库、免疫共沉淀、二代高通量测序等技术进行APP抗原蛋白的筛选，共获得3个胸膜肺炎放线杆菌候选抗原(PotA、SRP和FtsN)，这三个抗原具有很高的反应性和免疫原性，可用于APP的临床诊断和治疗，本发明的研究成果对于检测和防控胸膜肺炎放线杆菌具有重要意义。
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公开(公告)号：CN116199751B
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202310239675.0
申请日：2023-03-13
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C07K14/315 , C12N15/31 , C40B30/04 , G01N33/68 , G01N33/569 , A61K39/09 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了一种在细菌全基因组水平上高通量筛选免疫原性抗原蛋白的方法，该方法主要为三部分，第一部分是构建展示细菌蛋白的裂解性噬菌体文库，第二部分是利用噬菌体免疫共沉淀技术对噬菌体文库进行筛选，第三部分为二代测序结合生物信息学分析筛选出潜在的细菌高免疫原性的抗原蛋白。本发明提供的是一种细菌全基因组水平上、无偏好、高通量筛选免疫原性抗原蛋白的方法，该方法操作简便、成本低且可重复性强，在制备细菌的亚单位疫苗以及检测和诊断方面具有重要价值和应用潜力。
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