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公开(公告)号：CN116947981B
公开(公告)日：2024-04-23
申请号：CN202310837378.6
申请日：2023-07-07
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/065 , C12N15/39 , C12N5/20 , C07K16/08 , C12N15/70 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/535 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种LSDV和GTPV的通用型诊断抗原及其单克隆抗体，该抗原编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明还公开了一种利用该抗原和单克隆抗体建立的牛结节性皮肤病诊断试剂盒，属于免疫学领域。本发明的抗原是经蛋白免疫印迹试验结合质谱测序从LSDV基因组中筛选到的一种通用型诊断靶标，具有免疫原性，利用其制备的单克隆抗体可实现对山羊痘病毒属的LSDV和GTPV感染或免疫血清抗体检测，具有灵敏性和特异性高，检测快速便捷等优点。本发明为LSDV的血清学检测和疫苗免疫评价提供了高价值工具。
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公开(公告)号：CN116751264B
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202310647268.3
申请日：2023-05-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/065 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种重组蛋白，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明还公开了该重组蛋白的制备方法及其在制备牛结节性皮肤病病毒(LSDV)鉴别诊断试剂盒中的应用，属于分子生物学领域。本发明用5个柔性肽串联6个LSDV的特异性片段，克隆融合基因并表达得到该重组蛋白，分子量为18kDa。经验证，该蛋白与LSDV自然感染的阳性血清抗体有很强的反应原性，能用于鉴别诊断山羊痘弱毒疫苗免疫和自然感染LSDV的血清，并且还具有敏感性强、特异性好等优点。本发明为LSDV的血清学检测和防控提供了高价值工具，弥补了国内外鉴别诊断LSDV的空白。
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公开(公告)号：CN117736275A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202311660819.6
申请日：2023-12-04
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/065 , C12N15/39 , C12N15/63 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种利用LSDV噬菌体展示文库高通量、无偏见筛选到的LSDV抗原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首先构建了展示LSDV的噬菌体文库，接着利用LSDV阳性血清对文库进行噬菌体免疫共沉淀筛选，通过二代测序以及数据分析，从文库中筛选出LSDV的抗原蛋白，经验证，该抗原蛋白能特异性与LSDV抗体反应，在LSDV诊断试剂研发中有很高的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114075551B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202110656015.3
申请日：2021-06-11
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/58 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及单克隆抗体制备技术领域，具体公开了沙林鼠种布鲁氏菌脂多糖的单克隆抗体及应用。本发明用热酚水法提取沙林鼠种布鲁氏菌LPS，80℃1 h热灭活沙林鼠种布鲁氏菌免疫Balb/c小鼠；将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合；有限稀释法和间接ELISA方法筛选一株阳性杂交瘤细胞株，命名为2H2，杂交瘤细胞株2H2的保藏编号为CCTCC NO:C2021134；制备2H2株沙林鼠种布鲁氏菌LPS单克隆抗体，重链亚型为IgG1，轻链类型为κ型，浓度为8.775 mg/mL，效价为1:512000，其纯度和效价高，亲和性
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公开(公告)号：CN117683142A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311665648.6
申请日：2023-12-06
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了融合蛋白LSDV090‑133及其在检测牛结节性皮肤病病毒（LSDV）感染抗体和鉴别疫苗免疫抗体中的应用。本发明利用噬菌体展示文库筛选针对牛结节性皮肤病病毒感染血清和山羊痘弱毒疫苗免疫血清的特异性多肽，经生物信息学分析，选取牛结节性皮肤病病毒感染血清特有的3条多肽，通过柔性肽串联至pET28a载体，送公司进行基因合成，原核表达得到LSDV090‑133融合蛋白，分子量约为20 kDa。经验证，该蛋白与LSDV感染牛阳性血清有很强的反应原性，其灰度值明显强于与山羊痘弱毒疫苗免疫60dpi后的免疫血清，是一种潜在的鉴别诊断新靶标，能用于鉴别诊断LSDV感染和山羊痘弱毒疫苗免疫的抗体反应，为牛结节性皮肤病的血清学诊断和防控提供参考工具。
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公开(公告)号：CN116947981A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310837378.6
申请日：2023-07-07
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/065 , C12N15/39 , C12N5/20 , C07K16/08 , C12N15/70 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/535 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种LSDV和GTPV的通用型诊断抗原及其单克隆抗体，该抗原编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明还公开了一种利用该抗原和单克隆抗体建立的牛结节性皮肤病诊断试剂盒，属于免疫学领域。本发明的抗原是经蛋白免疫印迹试验结合质谱测序从LSDV基因组中筛选到的一种通用型诊断靶标，具有免疫原性，利用其制备的单克隆抗体可实现对山羊痘病毒属的LSDV和GTPV感染或免疫血清抗体检测，具有灵敏性和特异性高，检测快速便捷等优点。本发明为LSDV的血清学检测和疫苗免疫评价提供了高价值工具。
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公开(公告)号：CN116751264A
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN202310647268.3
申请日：2023-05-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/065 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种重组蛋白，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明还公开了该重组蛋白的制备方法及其在制备牛结节性皮肤病病毒(LSDV)鉴别诊断试剂盒中的应用，属于分子生物学领域。本发明用5个柔性肽串联6个LSDV的特异性片段，克隆融合基因并表达得到该重组蛋白，分子量为18kDa。经验证，该蛋白与LSDV自然感染的阳性血清抗体有很强的反应原性，能用于鉴别诊断山羊痘弱毒疫苗免疫和自然感染LSDV的血清，并且还具有敏感性强、特异性好等优点。本发明为LSDV的血清学检测和防控提供了高价值工具，弥补了国内外鉴别诊断LSDV的空白。
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公开(公告)号：CN114075551A
公开(公告)日：2022-02-22
申请号：CN202110656015.3
申请日：2021-06-11
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/58 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及单克隆抗体制备技术领域，具体公开了沙林鼠种布鲁氏菌脂多糖的单克隆抗体及应用。本发明用热酚水法提取沙林鼠种布鲁氏菌LPS，80℃ 1h热灭活沙林鼠种布鲁氏菌免疫Balb/c小鼠；将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合；有限稀释法和间接ELISA方法筛选一株阳性杂交瘤细胞株，命名为2H2，杂交瘤细胞株2H2的保藏编号为CCTCC NO:C2021134；制备2H2株沙林鼠种布鲁氏菌LPS单克隆抗体，重链亚型为IgG1，轻链类型为κ型，浓度为8.775 mg/mL，效价为1:512000，其纯度和效价高，亲和性好，结合能力强，特异性良好。
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