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公开(公告)号：CN108635574A
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201810461794.X
申请日：2018-05-15
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： A61K39/145 , A61P31/16 , A61K39/12 , A61P31/14 , C12N7/00
CPC分类号： A61K39/12 , A61K2039/5252 , A61K2039/552 , A61K2039/70 , A61P31/14 , A61P31/16 , C12N7/00 , C12N2760/16134 , C12N2760/16151 , C12N2770/24034 , C12N2770/24051 , A61K2300/00
摘要： 本发明公开一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品，该方法包括以下步骤：用EB66传代细胞分别接种鸭坦布苏、禽流感病毒株；在病毒ELD50或EID50效价达到最高时分别收获鸭坦布苏、禽流感病毒并保存；分别灭活鸭坦布苏、禽流感病毒；将灭活后的鸭坦布苏和禽流感病毒在吐温-80中完全混合，得到病毒混合液，在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化，配制成鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗。本发明通过采用EB66传代细胞系分别进行鸭坦布苏和禽流感病毒的培养，然后制备成的鸭坦布苏、禽流感二联疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。
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公开(公告)号：CN115094088A
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202210412508.7
申请日：2022-04-19
申请人： 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒，采用含塞姆利基森林病毒复制子的载体，并将p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R和M1249L基因分别插入所述载体而得；所述p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R基因序列依次如SEQ ID NO.15‑NO.21所示。该质粒通过插入非洲猪瘟抗原基因(X)，制得的pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒在真核细胞能够高效表达ASFV抗原蛋白，有利于非洲猪瘟鸡尾酒DNA疫苗的研制，也有利于通过Flag抗体胶对这些蛋白进行纯化，制取有别于原核表达的，具备翻译后修饰的高质量抗原蛋白；同时，本发明还公开了该质粒的制备方法和鸡尾酒混合疫苗。
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公开(公告)号：CN116334133A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210830659.4
申请日：2022-07-14
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司
摘要： 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV D117L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P17、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P17质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P17质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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公开(公告)号：CN113604505A
公开(公告)日：2021-11-05
申请号：CN202110916396.4
申请日：2021-08-11
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明公开了一种pSFV‑p32病毒样颗粒的制备方法，包括：(1)构建得到pSFV‑sp6‑p32质粒；(2)将pSFV‑sp6‑p32、SFV‑helper质粒体外转录成mRNA，然后将pSFV‑sp6‑p32、SFV‑helper质粒体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFV‑p32病毒样颗粒。相应的，本发明还提供上述制得的pSFV‑p32病毒样颗粒及其应用。实施本发明，通过插入非洲猪瘟p32基因，制得的pSFV‑p32病毒样颗粒能够高效表达外源蛋白p32，有利于非洲猪瘟蛋白的表达筛选和RNA疫苗研制。
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公开(公告)号：CN112608932A
公开(公告)日：2021-04-06
申请号：CN202011391371.9
申请日：2020-12-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber‑2蛋白的方法。分别以PET‑21a‑GX‑1‑fiber2质粒和PXMJ19‑C1786T‑hexon(T7)质粒为模板，通过设计的引物进行扩增，得到Fiber‑2目的片段和PXMJ19‑C1786T‑T7载体片段；然后进行同源重组，得到重组质粒PXMJ19‑T7‑his‑fiber2；最后转化至Shuffle T7‑B感受态细胞进行Fiber‑2蛋白的表达。本发明采用能提高外源基因拷贝数的质粒作为载体，构建PXMJ19‑T7‑his‑fiber2重组质粒，来增强Fiber‑2蛋白的可溶性表达。
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公开(公告)号：CN110592108B
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN201910894754.9
申请日：2019-09-20
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK‑21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；NP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1‑1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925‑3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166‑15192nt。该方法可以成功的克隆出于原病毒株完全相同、无突变的重组病毒。
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公开(公告)号：CN111718889A
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN202010730429.1
申请日：2020-07-27
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种Sf9细胞的无血清全悬浮驯化方法，包括如下步骤：步骤1：将Sf9细胞在添加硫酸葡聚糖的Sf-900 III SFM培养基中重悬并将Sf9细胞稀释至0.6-1.0×106cells/mL；步骤2：添加热灭活胎牛血清至步骤1中，对Sf9细胞进行培养；步骤3：当步骤2中Sf9细胞密度在第三天达到4×106cells/mL以上，重复步骤1和2；其中，每重复一次步骤1和步骤2，添加的热灭活胎牛血清的量逐步降低直至不添加热灭活胎牛血清依然可以使Sf9细胞密度达到4×106cells/mL以上；步骤1中的Sf-900 III SFM培养基中硫酸葡聚糖的终浓度为20-30mg/L。该方法具有驯化次数少、驯化后细胞增殖后浓度高、活率高的优点。
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公开(公告)号：CN110951767A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911379403.0
申请日：2019-12-27
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物技术领域，具体为一种具有高拷贝能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体，所述表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。通过在pXMJ19载体的棒状杆菌复制子调节部位，将第1786位点的核苷酸C进行人工突变，成功获得比pXMJ19质粒拷贝能力高约12.5倍的棒状杆菌/大肠杆菌双用载体pXMJ19C1786T质粒。pXMJ19质粒在棒状杆菌的拷贝数约为20，pXMJ19C1786T质粒在棒状杆菌的拷贝数为251。同时，本发明还公开了该表达质粒的构建方法。
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公开(公告)号：CN116036066A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202211701072.X
申请日：2022-12-28
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： A61K31/201 , A61K31/20 , A61K31/23 , A61K31/231 , A61K9/12 , A61P25/20
摘要： 本发明属于宠物用品领域，公开了一种猫面部信息素组合物，包括固体原料、液体原料和溶剂；所述溶剂含量不低于组合物总量的70wt％；所述固体原料含量不超过组合物总量的11wt％。该猫面部信息素组合物在低温下不会出现结晶现象，同时表现出良好的高低温稳定性，符合喷剂生产的标准，应用场景多样，针对固体原料进行了优化配置，通过其和液体原料的组合，可以达到媲美高浓度产品的安抚效果的目的。
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公开(公告)号：CN115927458A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210830662.6
申请日：2022-07-14
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV E183L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P54、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P54质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P54质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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