公开(公告)号：CN108642073A

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201810483185.4

申请日：2018-05-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  寇小兵 ,  吴巨友 ,  曹鹏 ,  王鹏 ,  齐开杰 ,  谢智华

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/29 ,  C12P21/02 ,  C07K14/415 ,  C07K1/36 ,  C07K1/34 ,  C07K1/22 ,  C07K1/14 ,  C07K16/16 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种梨PbrRALF2蛋白质的体外表达及其多克隆抗体的制备方法,通过设计引物克隆梨花粉PbrRALF2基因；构建大肠杆菌重组表达载体PbrALF2-pCold-TF；将构建的重组表达载体PbrRALF2-pCold-TF转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，构建表达梨PbrRALF2蛋白质的重组菌株；对重组菌株进行表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PbrRALF2蛋白质；以纯化的重组梨PbrRALF2蛋白质为抗原，采用多克隆抗体制备方法制备梨PbrRALF2多克隆抗体。通过本发明的方法，实现了梨PbrRALF2蛋白的体外表达，并制备出了效价高、特异性好的梨PbrRALF2多克隆抗体，完全可以满足相关实验及产业化的需求。