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公开(公告)号：CN116926105A
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202211408928.4
申请日：2022-11-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种发根农杆菌介导的萝卜功能基因编辑方法及其应用，首次在‘NAU‑LHZ’萝卜中通过发根农杆菌介导的遗传转化实现萝卜功能基因编辑。发根农杆菌侵染无根幼苗后，在MS固体培养基上共培养3d后，置于MS+300mg/L Carb的固体培养基上培养不定根。以RsGLK2.1基因为例，1株发根农杆菌诱导的不定根在靶位点2中成功被编辑，将成功编辑的不定根置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基中诱导愈伤组织，通过愈伤组织表型分析进一步证实其成功编辑。本发明可快速验证萝卜关键候选基因的生物学功能，极大地加快萝卜优异种质创新与新品种选育进程。
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公开(公告)号：CN113455389B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202110928484.6
申请日：2021-08-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效繁殖萝卜自交不亲和系的方法，属于十字花科萝卜属作物育种技术领域。该方法包括以下步骤：在萝卜自交不亲和系盛花期，于上午9～11点将适宜浓度褪黑素溶液喷施于盛开的萝卜花柱头上，每隔1天喷施1次至盛花期结束，同时结合壁蜂授粉技术完成萝卜自交不亲和系的高效繁殖。本发明通过对萝卜花柱头喷施新型化学试剂褪黑素，显著提高萝卜自交不亲和系的繁殖效率；同时处理操作简便、成本低，能有效解决萝卜自交不亲和系亲本难以大面积繁殖问题，推动利用自交不和系进行萝卜F1代高效制种的应用，实用价值大且应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN113455389A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110928484.6
申请日：2021-08-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效繁殖萝卜自交不亲和系的方法，属于十字花科萝卜属作物育种技术领域。该方法包括以下步骤：在萝卜自交不亲和系盛花期，于上午9～11点将适宜浓度褪黑素溶液喷施于盛开的萝卜花柱头上，每隔1天喷施1次至盛花期结束，同时结合壁蜂授粉技术完成萝卜自交不亲和系的高效繁殖。本发明通过对萝卜花柱头喷施新型化学试剂褪黑素，显著提高萝卜自交不亲和系的繁殖效率；同时处理操作简便、成本低，能有效解决萝卜自交不亲和系亲本难以大面积繁殖问题，推动利用自交不和系进行萝卜F1代高效制种的应用，实用价值大且应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN104862330B
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201510230195.3
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有Cupin结构功能域的贮藏蛋白类型α‑淀粉酶抑制剂的生产和纯化方法；包括(1)原核表达体系构建及菌液培养诱导表达；(2)原核表达可溶性蛋白纯化；和/或(3)原核表达包涵体蛋白纯化及蛋白复性。目前，经过多次反复实验证明，采用本发明工艺流程，对此种α‐淀粉酶抑制剂进行工艺生产，得到的蛋白产量高、纯度高，生产工艺简单方便，生产周期短，无需价格昂贵设备，是一种适合于此α‐淀粉酶抑制剂生产纯化的优良生物工艺方法。
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公开(公告)号：CN104862330A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510230195.3
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有Cupin结构功能域的贮藏蛋白类型α-淀粉酶抑制剂的生产和纯化方法；包括(1)原核表达体系构建及菌液培养诱导表达；(2)原核表达可溶性蛋白纯化；和/或(3)原核表达包涵体蛋白纯化及蛋白复性。目前，经过多次反复实验证明，采用本发明工艺流程，对此种α‐淀粉酶抑制剂进行工艺生产，得到的蛋白产量高、纯度高，生产工艺简单方便，生产周期短，无需价格昂贵设备，是一种适合于此α‐淀粉酶抑制剂生产纯化的优良生物工艺方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104862291A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510230022.1
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12N9/2414 , A01N65/20 , C12Y302/01001
Abstract: 本发明公开了cupin蛋白结构域在制备α-淀粉酶抑制剂中的应用。本发明中发现了植物贮藏蛋白cupin结构具有α-淀粉酶抑制剂功能，它是通过鹰嘴豆种子中α-淀粉酶抑制剂的纯化及鉴定、蛋白原核表达并测定其抑制活性、cupin结构域缺失及氨基酸突变、来源于其他作物具有cupin结构域蛋白的原核表达并测定α-淀粉酶抑制剂活性、测定cupin结构域蛋白生物学特性等手段实现的，并发现cupin结构域影响蛋白的α-淀粉酶抑制活性具有普遍性。本发明可操作性强、重复性好、效率高、适用性强，对进一步发掘植物中贮藏蛋白类型α-淀粉酶抑制剂具有广泛而深远的意义。
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公开(公告)号：CN114958904B
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202210536365.0
申请日：2022-05-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种快速获得萝卜转基因材料的方法，包括：对萝卜种子进行消毒种植无菌苗；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；获取无根苗外植体并浸入菌液进行侵染；经过共培养和脱菌培养30d后，通过表型筛选、PCR检测和qRT‑PCR分析鉴定阳性毛状根；切取阳性毛状根放置于愈伤组织培养基上诱导愈伤组织，获得转基因愈伤组织。本发明提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短了发根时间，成功诱导了转基因愈伤组织，能够进行萝卜部分本体基因功能验证。
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公开(公告)号：CN116790782A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202211442705.X
申请日：2022-11-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种基于非组培、快速验证萝卜盐胁迫响应基因功能的方法，包括：对萝卜种子进行催芽播种；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；在非组培条件下切除实生根，获得无根苗并浸入侵染液进行侵染；侵染后的无根苗移栽至营养土并诱导毛状根；通过表型筛选和PCR检测鉴定阳性复合植株；对复合植株进行盐处理，通过表型和超氧阴离子自由基含量(O2‑)测定来评价阳性复合植株的耐盐性。本发明不仅提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短发根时间，而且避免了无菌操作。成功验证了萝卜盐胁迫响应基因的功能，为萝卜本体基因功能验证提供技术参考。
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公开(公告)号：CN114958904A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210536365.0
申请日：2022-05-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种快速获得萝卜转基因材料的方法，包括：对萝卜种子进行消毒种植无菌苗；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；获取无根苗外植体并浸入菌液进行侵染；经过共培养和脱菌培养30d后，通过表型筛选、PCR检测和qRT‑PCR分析鉴定阳性毛状根；切取阳性毛状根放置于愈伤组织培养基上诱导愈伤组织，获得转基因愈伤组织。本发明提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短了发根时间，成功诱导了转基因愈伤组织，能够进行萝卜部分本体基因功能验证。
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公开(公告)号：CN111944917B
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN201910416357.0
申请日：2019-05-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明提供一种基于转录组测序开发山茶属植物引物的方法：以茶树叶片为材料进行cDNA库的构建和illumina测序，经过滤和从头组装后获得转录组数据。使用MISA、SSR Hunter完成位点搜索，并对包含SSR位点的序列进行生物信息学分析。以此为据进行SSR分子标记引物的开发，利用开发的引物对部分山茶属植物材料进行遗传多样性分析。本发明成功设计38对引物，经多态性筛选最终获得16对多态性引物，利用这16对引物检测了部分山茶属植物资源的遗传相似性，验证了这些引物的可用性。本发明为山茶属植物SSR引物开发提供了新思路。
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