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公开(公告)号：CN112522256B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202010835848.1
申请日：2020-08-19
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种CRISPR/Cas9系统及其在构建抗肌萎缩蛋白基因缺陷的猪源重组细胞中的应用。本发明提供了sgRNA组合，由sgRNADMD‑Ug3(靶序列结合区如SEQ ID NO：8中第1‑20位核苷酸所示)和sgRNADMD‑Dg3(靶序列结合区如SEQ ID NO：11中第1‑20位核苷酸所示)组成。本发明提供了试剂盒，由转录得到sgRNADMD‑Ug3的质粒pKG‑U6gRNA(DMD‑Ug3)、转录得到sgRNADMD‑Dg3的质粒pKG‑U6gRNA(DMD‑Dg3)和质粒pKG‑GE3组成。所述sgRNA组合或所述试剂盒可用于制备重组细胞或制备杜氏肌营养不良症动物模型。所述重组细胞为抗肌萎缩蛋白基因缺陷的细胞，可用于体细胞克隆制备动物疾病模型。本发明为杜氏肌营养不良症猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于杜氏肌营养不良症药物的研发具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN112522257B
公开(公告)日：2023-06-20
申请号：CN202010946436.5
申请日：2020-09-10
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/62 , C12N15/12 , C12N15/54 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种用于制备RRIP四个基因联合敲除的重症免疫缺陷猪源重组细胞的系统，具体涉及一种用于制备RAG1基因、RAG2基因、IL2RG基因和PRKDC基因这四个基因联合敲除的重症免疫缺陷猪源重组细胞的系统。本发明提供了sgRNA组合，由sgRNARAG1‑g4、sgRNARAG2‑g2、sgRNAIL2RG‑g7和sgRNAPRKDC‑g6组成。sgRNARAG1‑g4的靶序列结合区如SEQ ID NO：9中第1‑20位核苷酸所示；sgRNARAG2‑g2的靶序列结合区如SEQ ID NO：13中第1‑20位核苷酸所示；sgRNAIL2RG‑g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：24中第1‑20位核苷酸所示；sgRNAPRKDC‑g6的靶序列结合区如SEQ ID NO：34中第1‑20位核苷酸所示。本发明为重症免疫缺陷猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于重症免疫缺陷药物的研发具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN116064523A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202210955222.3
申请日：2022-08-10
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/85 , C12N15/89 , C12N15/70 , C12N15/87 , C12N15/62 , C12N5/10 , C12Q1/02 , A01K67/027 , A61K49/00
摘要： 本发明公开了基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO：16所示HPS1‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示HPS1‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将HPS1‑gRNA1、HPS1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为HPS1基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备海普综合症模型猪；制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。本发明对于海普综合症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN113046388B
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202110065732.9
申请日：2021-01-19
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种用于猪APOE和LDLR基因编辑的CRISPR/Cas9系统，包含Cas9表达载体和针对猪APOE和LDLR基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA‑eEF1a‑mNLS‑hSpCas9‑EGFP‑PURO载体。本发明采用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将猪的APOE和LDLR基因敲除，制备出APOE和LDLR基因双敲除的猪重组细胞，为进一步的通过体细胞克隆技术生产动脉粥样硬化克隆猪奠定坚实基础，进而为动脉粥样硬化疾病的治疗及发病机制的研究提供有力的实验工具。
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公开(公告)号：CN115976017A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210889196.9
申请日：2022-07-27
申请人： 南京启真基因工程有限公司
摘要： 本发明公开了构建SPR基因突变的墨蝶呤还原酶缺乏症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示SPR‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示SPR‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将SPR‑gRNA1、SPR‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为SPR基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备墨蝶呤还原酶缺乏症模型猪；制备墨蝶呤还原酶缺乏症细胞模型或墨蝶呤还原酶缺乏症组织模型或墨蝶呤还原酶缺乏症器官模型。本发明对于墨蝶呤还原酶缺乏症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN115927320A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211038898.2
申请日：2022-08-29
申请人： 南京启真基因工程有限公司
摘要： 本发明公开了基因编辑系统在制备SLC13A1基因突变低硫酸盐血症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示SLC13A1‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示SLC13A1‑gRNA2和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法：将SLC13A1‑gRNA1、SLC13A1‑gRNA2和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为SLC13A1基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备模型猪；制备细胞模型或组织模型或器官模型。本发明对于低硫酸盐血症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN115927319A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211038802.2
申请日：2022-08-29
申请人： 南京启真基因工程有限公司
摘要： 本发明公开了涉及构建PARK7基因突变的帕金森病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了SEQ ID NO：16所示PARK7‑gRNA2、SEQ ID NO：17所示PARK7‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法：将PARK7‑gRNA2、PARK7‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为PARK7基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备帕金森病模型猪；制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。本发明对于帕金森病药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN115807036A
公开(公告)日：2023-03-17
申请号：CN202210976020.7
申请日：2022-08-15
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027 , C12N15/70 , C12N15/12 , C12N9/22 , C07K19/00 , C12Q1/02 , A61K49/00
摘要： 本发明公开了制备BRCA2基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。本发明提供了制备重组猪细胞的方法：将BRCA2‑gRNA1、BRCA2‑gRNA2和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为BRCA2基因发生突变的重组细胞。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示BRCA2‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示BRCA2‑gRNA2和NCN蛋白的试剂盒。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备乳腺癌模型猪；制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。本发明对于乳腺癌药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
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公开(公告)号：CN112813101B
公开(公告)日：2023-03-10
申请号：CN202110175618.1
申请日：2021-02-09
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种构建瘦肉率高、生长快的优质猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。一种用于猪SST‑MSTN基因编辑的CRISPR/Cas9系统，包含Cas9表达载体、针对猪MSTN基因的gRNA表达载体以及针对猪SST基因的gRNA表达载体。本发明分别针对MSTN基因和SST基因的不同靶点设计了相应的gRNA表达载体，通过筛选获得具有较高编辑效率的gRNA及其表达载体。配合本发明改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑，编辑效率比原载体有了显著的提高。
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公开(公告)号：CN112538497B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN201910890978.2
申请日：2019-09-20
申请人： 南京启真基因工程有限公司
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/90 , C12N9/22 , C12N5/10 , C12N15/113
摘要： 本发明公开了CRISPR/Cas9系统及其在构建α、β和α&β地中海贫血模型猪细胞系中的应用，针对猪HBA和HBB基因各设计了一对靶点序列，利用该两对靶点序列构建了三种CRISPR/Cas9系统，每种CRISPR/Cas9系统均包括gRNA载体和Cas9表达载体；将该三种CRISPR/Cas9系统中的表达载体按比例分别转入猪成纤维细胞，筛选得到α、β和α&β地中海贫血模型猪细胞系。本发明通过基因编辑技术在猪原代成纤维细胞中对猪HBA、HBB基因分别造成单基因突变及联合基因突变，得到HBA、HBB、HBA&HBB基因突变细胞。
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