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公开(公告)号：CN114561434B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210328681.9
申请日：2022-03-30
申请人： 南京师范大学
IPC分类号： C12P7/6432 , C12P7/6434 , C12N1/15 , C12N15/79 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N1/38 , C12R1/645
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种裂殖壶菌发酵生产EPA和DHA的方法，该方法是以裂殖壶菌为生产菌株，在发酵培养基中添加恩西地平，发酵生产多不饱和脂肪酸。本发明通过激活裂殖壶菌部分ELO/DES途径，提高裂殖壶菌发酵产物中EPA和DHA含量，采用裂殖壶菌工程菌EDG为生产菌株，使发酵产物中EPA含量提高8.73倍，DHA含量提高1.15倍。
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公开(公告)号：CN114426985B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202111401206.1
申请日：2021-11-23
申请人： 南京师范大学
摘要： 本发明公开了一种农杆菌转化裂殖壶菌的方法和应用，所述转化方法是将外源基因导入农杆菌，利用农杆菌将外源基因导入裂殖壶菌，使裂殖壶菌获得相关外源基因的功能。本发明将转入G418抗性基因表达盒的农杆菌AGL‑1与裂殖壶菌HX‑308共培养，使得外源基因成功转化到裂殖壶菌HX‑308，并实现基因的定点敲除。本发明实验操作非常简单，有效节约了时间和成本，不仅可以实现农杆菌转化裂殖壶菌，更重要的可以实现基因敲除，通过基因敲除，可以在裂殖壶菌体内构建了一套完整的遗传操作系统。本发明使用较短的同源臂即可完成定点整合，在一般的真菌转化中可能需要2‑3kb的同源臂，为简化裂殖壶菌的遗传操作奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114480148A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210015562.8
申请日：2022-01-07
申请人： 南京师范大学
IPC分类号： C12N1/15 , C12N15/80 , C12N9/10 , C12P7/6432 , C12R1/645
摘要： 本发明公开了一种表达EPA合酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法，是以Schizochytrium sp.HX‑308为出发菌株，插入Shewanella japonica EPA合酶编码基因；本发明也公开了上述菌株的一种应用，其通过发酵生产EPA。本发明的工程菌株稳定性好，培养周期短、胞内油脂含量高、不受季节限制、EPA合成量显著提高，获得的EPA生产成本低、顾客接受度高。本发明适用于构建表达EPA合酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株，该菌株可应用于EPA的生物合成。
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公开(公告)号：CN110283857A
公开(公告)日：2019-09-27
申请号：CN201910525288.7
申请日：2019-06-18
申请人： 南京师范大学
摘要： 本发明公开了一种基于拟茎点霉细胞发酵生产柚皮素的方法，利用CRISPR-Cas9敲除内生真菌拟茎点霉全局调控因子信号转导相关的MAPKK基因后，激活柚皮素的生物合成，可在突变株的发酵液及菌丝体中获得柚皮素。本发明首次发现了微生物天然合成途径产柚皮素，提供了一种快速生产柚皮素的方法，克服了植物提取法周期长，提取困难和化学合成法产物选择性差、纯度低、反应条件苛刻及环境污染严重缺点，具有选择性好、产物纯度高，反应条件温和、操作简便等优点，在食品和医药生产中具有良好的应用前景，为柚皮素生产提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN115820749B
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202310123047.6
申请日：2023-02-16
申请人： 南京师范大学
摘要： 本发明公开了一种芝麻酚在提高裂殖壶菌中角鲨烯产量的应用和方法，利用芝麻酚培养裂殖壶菌提高角鲨烯产量的方法，所述方法包括以下步骤：将裂殖壶菌菌株接种于种子培养基中，进行活化，并将得到的活化菌转接于种子培养基以获得一代种子；将一代种子接种于种子培养基中再次培养获得二代种子；将获得的二代种子接种于种子培养基中再次培养获得三代种子；将三代种子转接于含芝麻酚的发酵培养基中进行发酵培养，以产生角鲨烯。本发明首次提出了添加一种新的外源化合物可以控制裂殖壶菌发酵过程中角鲨烯的含量，这种外源化合物就是芝麻酚，与未加芝麻酚的对照组相比，加入不同浓度的芝麻酚的实验组中裂殖壶菌的角鲨烯的含量均能提高。
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公开(公告)号：CN114790425A
公开(公告)日：2022-07-26
申请号：CN202210186656.1
申请日：2022-02-28
申请人： 南京师范大学
IPC分类号： C12N1/13 , C12N15/55 , C12N15/82 , C12N15/90 , C12P7/6427 , C12P7/6418 , C12R1/89
摘要： 本发明公开了一种裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法，该裂殖壶菌基因工程菌株以裂殖壶菌为出发菌株，敲除奇数链脂肪酸甘油酯脂肪酶基因和多不饱和脂肪酸甘油酯脂肪酶基因；本发明也公开了上述裂殖壶菌基因工程菌株的一种应用，通过发酵生产奇数链脂肪酸和多不饱和脂肪酸。本发明实现了提高基因工程菌株中奇数链脂肪酸和多不饱和脂肪酸产量的目的，适用于构建裂殖壶菌基因工程菌株，构建出的裂殖壶菌基因工程菌株可用于奇数链脂肪酸和多不饱和脂肪酸的生物合成。
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公开(公告)号：CN109161480A
公开(公告)日：2019-01-08
申请号：CN201810903450.X
申请日：2018-08-09
申请人： 南京师范大学
摘要： 本申请公开一种拟茎点霉的原生质体制备方法及基因敲除方法，从枫香拟茎点霉菌丝体中制备原生质体，利用融合PCR和同源重组构建CRISPR-Cas9载体，并将该技术应用于枫香拟茎点霉乳清酸脱氧核苷5'-磷酸脱羧酶ura和丝裂原活化蛋白激酶MAPK1关键基因的敲除，本申请提供了该技术在枫香拟茎点霉基因功能研究中的应用，并为枫香拟茎点霉与植物共生，促其抗病、增产等机制研究提供了有效的技术方法和新的思路。
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公开(公告)号：CN109161480B
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN201810903450.X
申请日：2018-08-09
申请人： 南京师范大学
摘要： 本申请公开一种拟茎点霉的原生质体制备方法及基因敲除方法，从枫香拟茎点霉菌丝体中制备原生质体，利用融合PCR和同源重组构建CRISPR‑Cas9载体，并将该技术应用于枫香拟茎点霉乳清酸脱氧核苷5'‑磷酸脱羧酶ura和丝裂原活化蛋白激酶MAPK1关键基因的敲除，本申请提供了该技术在枫香拟茎点霉基因功能研究中的应用，并为枫香拟茎点霉与植物共生，促其抗病、增产等机制研究提供了有效的技术方法和新的思路。
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公开(公告)号：CN115820749A
公开(公告)日：2023-03-21
申请号：CN202310123047.6
申请日：2023-02-16
申请人： 南京师范大学
摘要： 本发明公开了一种芝麻酚在提高裂殖壶菌中角鲨烯产量的应用和方法，利用芝麻酚培养裂殖壶菌提高角鲨烯产量的方法，所述方法包括以下步骤：将裂殖壶菌菌株接种于种子培养基中，进行活化，并将得到的活化菌转接于种子培养基以获得一代种子；将一代种子接种于种子培养基中再次培养获得二代种子；将获得的二代种子接种于种子培养基中再次培养获得三代种子；将三代种子转接于含芝麻酚的发酵培养基中进行发酵培养，以产生角鲨烯。本发明首次提出了添加一种新的外源化合物可以控制裂殖壶菌发酵过程中角鲨烯的含量，这种外源化合物就是芝麻酚，与未加芝麻酚的对照组相比，加入不同浓度的芝麻酚的实验组中裂殖壶菌的角鲨烯的含量均能提高。
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